RESUMO
The hydroxymethylpyrimidine phosphate kinases (HMPPK) encoded by the thiD gene are involved in the thiamine biosynthesis pathway, can perform two consecutive phosphorylations of 4-amino-5-hydroxymethyl-2-methyl pyrimidine (HMP) and are found in thermophilic and mesophilic bacteria, but only a few characterizations of mesophilic enzymes are available. The presence of another homolog enzyme (pyridoxal kinase) that can only catalyze the first phosphorylation of HMP and encoded by pdxK gene, has hampered a precise annotation in this enzyme family. Here we report the kinetic characterization of two HMPPK with structure available, the mesophilic and thermophilic enzyme from Salmonella typhimurium (StHMPPK) and Thermus thermophilus (TtHMPPK), respectively. Also, given their high structural similarity, we have analyzed the structural determinants of protein thermal stability in these enzymes by molecular dynamics simulation. The results show that pyridoxal kinases (PLK) from gram-positive bacteria (PLK/HMPPK-like enzymes) constitute a phylogenetically separate group from the canonical PLK, but closely related to the HMPPK, so the PLK/HMPPK-like and canonical PLK, both encoded by pdxK genes, are different and must be annotated distinctly. The kinetic characterization of StHMPPK and TtHMPPK, shows that they perform double phosphorylation on HMP, both enzymes are specific for HMP, not using pyridoxal-like molecules as substrates and their kinetic mechanism involves the formation of a ternary complex. Molecular dynamics simulation shows that StHMPPK and TtHMPPK have striking differences in their conformational flexibility, which can be correlated with the hydrophobic packing and electrostatic interaction network given mainly by salt bridge bonds, but interestingly not by the number of hydrogen bond interactions as reported for other thermophilic enzymes. ENZYMES: EC 2.7.1.49, EC 2.7.4.7, EC 2.7.1.35, EC 2.7.1.50.
Assuntos
Proteínas de Bactérias/química , Fosfotransferases (Aceptor do Grupo Fosfato)/química , Proteínas de Bactérias/isolamento & purificação , Ensaios Enzimáticos , Ligação de Hidrogênio , Interações Hidrofóbicas e Hidrofílicas , Cinética , Simulação de Dinâmica Molecular , Fosfotransferases (Aceptor do Grupo Fosfato)/isolamento & purificação , Conformação Proteica , Estabilidade Proteica , Pirimidinas/química , Salmonella typhimurium/enzimologia , Eletricidade Estática , Especificidade por Substrato , Thermus thermophilus/enzimologiaRESUMO
O estudo das variáveis relativas ao terapeuta é um tema de relevância empírica no âmbito da investigação sobre o processo e resultados terapêuticos. O objetivo deste estudo é verificar se há diferenças nas respostas dadas às três subescalas em avaliação na versão em língua portuguesa do Therapeutic Identity Questionnaire (ThId) (fatores curativos, estilo terapêutico e pressupostos de base) em função da orientação teórica, dos anos de experiência e da realização de terapia pessoal dos 34 terapeutas em estudo, e avaliar as características psicométricas do instrumento. Em conclusão, a versão em língua portuguesa do ThId apresenta boas qualidades psicométricas e revelase útil para detectar diferenças de estilo e atitude terapêutica entre clínicos de diferentes orientações teóricas, mesmo em amostras dereduzida dimensão.
The study of therapist variables is a matter of empirical relevance in the realm of the research on therapeutic process and outcome.The goal of this study is to ascertain the differences regarding the responses given to the 3 subscales of the Portuguese version of the Therapeutic Identity Questionnaire (ThId) in evaluation (curative factors, therapeutic style and basic assumptions) in relation to theoretical orientation, years of experience and previous personal therapy among the 34 therapists enrolled in the study, along side the psychometric evaluation of the instrument. In conclusion, the Portuguese version of ThId displays good preliminary psychometricqualities and empirical use fulness to capture differences in style and attitude between clinicians of different theoretical models, evenin reduced samples.
El estudio de las variables relacionadas con el terapeuta es tema de prominencia empírica en la investigación sobre proceso y resultados terapéuticos. El objetivo de este estudio es verificar si hay diferencias en las respuestas a las tres subescalas en evaluación en la versión en lengua portuguesa del Therapeutic Identity Questionnaire (ThId) (factores curativos, estilo terapéutico y supuestos de base) atendiendo ala orientación teórica, años de experiencia y realización de terapia personal de los 34 terapeutas participantes, y evaluar las características psicométricas del instrumento. En conclusión, la versión en lengua portuguesa del ThId tiene buenas propiedades psicométricas y esútil para detectar diferencias de estilo y actitud terapéutica entre clínicos de diferentes orientaciones teóricas, incluso en muestras dedimensión reducida.
Assuntos
Humanos , Feminino , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Terapia Cognitivo-Comportamental , Terapia PsicanalíticaRESUMO
O estudo das variáveis relativas ao terapeuta é um tema de relevância empírica no âmbito da investigação sobre o processo e resultados terapêuticos. O objetivo deste estudo é verificar se há diferenças nas respostas dadas às três subescalas em avaliação na versão em língua portuguesa do Therapeutic Identity Questionnaire (ThId) (fatores curativos, estilo terapêutico e pressupostos de base) em função da orientação teórica, dos anos de experiência e da realização de terapia pessoal dos 34 terapeutas em estudo, e avaliar as características psicométricas do instrumento. Em conclusão, a versão em língua portuguesa do ThId apresenta boas qualidades psicométricas e revelase útil para detectar diferenças de estilo e atitude terapêutica entre clínicos de diferentes orientações teóricas, mesmo em amostras dereduzida dimensão.(AU)
The study of therapist variables is a matter of empirical relevance in the realm of the research on therapeutic process and outcome.The goal of this study is to ascertain the differences regarding the responses given to the 3 subscales of the Portuguese version of the Therapeutic Identity Questionnaire (ThId) in evaluation (curative factors, therapeutic style and basic assumptions) in relation to theoretical orientation, years of experience and previous personal therapy among the 34 therapists enrolled in the study, along side the psychometric evaluation of the instrument. In conclusion, the Portuguese version of ThId displays good preliminary psychometricqualities and empirical use fulness to capture differences in style and attitude between clinicians of different theoretical models, evenin reduced samples.(AU)
El estudio de las variables relacionadas con el terapeuta es tema de prominencia empírica en la investigación sobre proceso y resultados terapéuticos. El objetivo de este estudio es verificar si hay diferencias en las respuestas a las tres subescalas en evaluación en la versión en lengua portuguesa del Therapeutic Identity Questionnaire (ThId) (factores curativos, estilo terapéutico y supuestos de base) atendiendo ala orientación teórica, años de experiencia y realización de terapia personal de los 34 terapeutas participantes, y evaluar las características psicométricas del instrumento. En conclusión, la versión en lengua portuguesa del ThId tiene buenas propiedades psicométricas y esútil para detectar diferencias de estilo y actitud terapéutica entre clínicos de diferentes orientaciones teóricas, incluso en muestras dedimensión reducida.(AU)