Detecção de proteínas imunorreativas de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica / Detection of immunoreactive proteins of Rickettsia sp. Atlantic Forest strain

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença infecciosa, transmitida por carrapatos ao homem. Uma nova riquetsiose humana foi descrita como causadora de Febre Maculosa no Estado de São Paulo, sendo denominada de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. O presente trabalho teve como objetivo detectar e identificar proteínas com potencial de estimular o sistema imune de hospedeiro mamífero, desta nova cepa descrita. Para tanto, foi realizado a extração proteica total de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. As proteínas extraídas foram fracionadas por eletroforese. As bandas proteicas foram transferidas para membranas de nitrocelulose por migração elétrica e submetidas à técnica de Western-blot, para detecção proteica. Ao todo sete proteínas imunorreativas foram detectadas. Duas proteínas apresentaram maior abundancia, com peso molecular, de 200 e 130 kDa respectivamente. Através da comparação de mapas proteômicos existentes e pelo peso molecular que estas proteínas apresentaram, sugere-se que as duas proteínas detectadas representem rOmpA (200 kDa) e rOmpB (130 kDa). As demais proteínas detectadas apresentaram menor ocorrência e peso molecular inferior a 78 kDa, podendo representar membros da família de antígenos de superfície celular (Sca - Surface cell antigen). As proteínas detectadas poderão servir como base de estudo na elaboração de métodos diagnósticos sensíveis e específicos, no desenvolvimento de vacinas, além de possibilitarem novos estudos para terapias mais eficazes.(AU)

Brazilian Spotted Fever (BSF) is an infectious disease transmitted by ticks to humans. A new human rickettsial infection was reported to cause spotted fever in the State of São Paulo and was named Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. This study aimed to detect and identify proteins with potential to stimulate the immune system of mammalian host of this new strain described. Therefore, we performed total protein extraction Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. The extracted proteins were fractionated by electrophoresis. The protein bands were transferred to nitrocellulose membrane by electrical migration and subjected to Western blot for protein detection. In all, seven immunoreactive proteins were detected. Two proteins showed higher abundance, with molecular weight of 200 and 130 kDa respectively. By comparing existing proteomic maps and the molecular weight of these proteins showed that, it is suggested that the two proteins detected representing rOmpA (200 kDa) and rOmpB (130 kDa). The other detected proteins had lower occurrence and molecular weight less than 78 kDa, which may represent members of the cell surface antigens Family (Sca - Surface cell antigen). The detected proteins may serve as a study based on the development of sensitive and specific diagnostic methods in the development of vaccines and they enable further studies to more effective therapies.(AU)

Detecção de proteínas imunorreativas de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica / Detection of immunoreactive proteins of Rickettsia sp. Atlantic Forest strain

Brazilian Spotted Fever (BSF) is an infectious disease transmitted by ticks to humans. A new human rickettsial infection was reported to cause spotted fever in the State of São Paulo and was named Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. This study aimed to detect and identify proteins with potential to stimulate the immune system of mammalian host of this new strain described. Therefore, we performed total protein extraction Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. The extracted proteins were fractionated by electrophoresis. The protein bands were transferred to nitrocellulose membrane by electrical migration and subjected to Western blot for protein detection. In all, seven immunoreactive proteins were detected. Two proteins showed higher abundance, with molecular weight of 200 and 130 kDa respectively. By comparing existing proteomic maps and the molecular weight of these proteins showed that, it is suggested that the two proteins detected representing rOmpA (200 kDa) and rOmpB (130 kDa). The other detected proteins had lower occurrence and molecular weight less than 78 kDa, which may represent members of the cell surface antigens Family (Sca - Surface cell antigen). The detected proteins may serve as a study based on the development of sensitive and specific diagnostic methods in the development of vaccines and they enable further studies to more effective therapies.(AU)

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença infecciosa, transmitida por carrapatos ao homem. Uma nova riquetsiose humana foi descrita como causadora de Febre Maculosa no Estado de São Paulo, sendo denominada de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. O presente trabalho teve como objetivo detectar e identificar proteínas com potencial de estimular o sistema imune de hospedeiro mamífero, desta nova cepa descrita. Para tanto, foi realizado a extração proteica total de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. As proteínas extraídas foram fracionadas por eletroforese. As bandas proteicas foram transferidas para membranas de nitrocelulose por migração elétrica e submetidas à técnica de Western-blot, para detecção proteica. Ao todo sete proteínas imunorreativas foram detectadas. Duas proteínas apresentaram maior abundancia, com peso molecular, de 200 e 130 kDa respectivamente. Através da comparação de mapas proteômicos existentes e pelo peso molecular que estas proteínas apresentaram, sugere-se que as duas proteínas detectadas representem rOmpA (200 kDa) e rOmpB (130 kDa). As demais proteínas detectadas apresentaram menor ocorrência e peso molecular inferior a 78 kDa, podendo representar membros da família de antígenos de superfície celular (Sca - Surface cell antigen). As proteínas detectadas poderão servir como base de estudo na elaboração de métodos diagnósticos sensíveis e específicos, no desenvolvimento de vacinas, além de possibilitarem novos estudos para terapias mais eficazes.(AU)

Detecção de proteínas imunorreativas de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica

ABSTRACT: Brazilian Spotted Fever (BSF) is an infectious disease transmitted by ticks to humans. A new human rickettsial infection was reported to cause spotted fever in the State of São Paulo and was named Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. This study aimed to detect and identify proteins with potential to stimulate the immune system of mammalian host of this new strain described. Therefore, we performed total protein extraction Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. The extracted proteins were fractionated by electrophoresis. The protein bands were transferred to nitrocellulose membrane by electrical migration and subjected to Western blot for protein detection. In all, seven immunoreactive proteins were detected. Two proteins showed higher abundance, with molecular weight of 200 and 130 kDa respectively. By comparing existing proteomic maps and the molecular weight of these proteins showed that, it is suggested that the two proteins detected representing rOmpA (200 kDa) and rOmpB (130 kDa). The other detected proteins had lower occurrence and molecular weight less than 78 kDa, which may represent members of the cell surface antigens Family (Sca - Surface cell antigen). The detected proteins may serve as a study based on the development of sensitive and specific diagnostic methods in the development of vaccines and they enable further studies to more effective therapies.

RESUMO: A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença infecciosa, transmitida por carrapatos ao homem. Uma nova riquetsiose humana foi descrita como causadora de Febre Maculosa no Estado de São Paulo, sendo denominada de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. O presente trabalho teve como objetivo detectar e identificar proteínas com potencial de estimular o sistema imune de hospedeiro mamífero, desta nova cepa descrita. Para tanto, foi realizado a extração proteica total de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. As proteínas extraídas foram fracionadas por eletroforese. As bandas proteicas foram transferidas para membranas de nitrocelulose por migração elétrica e submetidas à técnica de Western-blot, para detecção proteica. Ao todo sete proteínas imunorreativas foram detectadas. Duas proteínas apresentaram maior abundancia, com peso molecular, de 200 e 130 kDa respectivamente. Através da comparação de mapas proteômicos existentes e pelo peso molecular que estas proteínas apresentaram, sugere-se que as duas proteínas detectadas representem rOmpA (200 kDa) e rOmpB (130 kDa). As demais proteínas detectadas apresentaram menor ocorrência e peso molecular inferior a 78 kDa, podendo representar membros da família de antígenos de superfície celular (Sca - Surface cell antigen). As proteínas detectadas poderão servir como base de estudo na elaboração de métodos diagnósticos sensíveis e específicos, no desenvolvimento de vacinas, além de possibilitarem novos estudos para terapias mais eficazes.

Detection of macrophages infected with Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis in a cow with clinical stage IV of Johne's disease. A case report / Detección de macrófagos infectados con Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis en una vaca en fase clínica IV de la enfermedad de Johne. Reporte de un caso / Detecção de macrófagos infectados com Mycobacterium avium paratuberculosis subespécie em uma vaca com uma fase clínica IV da doença de Johne. Um relato de caso

Anamnesis: a six-year-old milking Holstein cow (Bos taurus taurus) was diagnosed with stage IV Johne's Disease (JD). Clinical and Laboratory findings: the cow suffered intermittent diarrhea during 6 months with no response to antibiotic treatment. Consequently, the cow was subjected to euthanasia. Treatment approach: antemortem milk and peripheral blood samples and postmortem colon, mediastinic, mesenteric lymph nodes, and spleen samples were processed for macrophages isolation. Total DNA was extracted from macrophages and used to diagnose IS900 of Mycobacterium avium paratuberculosis (MAP) through real time PCR. The MAP IS900 segment was successfully amplified from cells of all samples, indicating that these cells were MAP-infected macrophages. Conclusion: macrophages of cows suffering from JD can be used for amplification of the MAP IS900 segment.

Anamnesis: una vaca Holstein de 6 años de edad (Bos taurus taurus) presentó sintomatología de la fase IV de la enfermedad de Johne. Hallazgos clínicos y de laboratorio: la vaca presentó diarrea intermitente durante 6 meses sin respuesta al tratamiento con antibióticos. En consecuencia, la vaca fue sometida a eutanasia. Esquema de tratamiento: muestras de leche y de sangre periférica se tomaron ante-mortem; muestras de la mucosa del intestino, bazo y linfonodos mediastínico y mesentérico, se tomaron post-mortem, todas para aislamiento de macrófagos. El ADN total de los macrófagos fue usado para la amplificación del segmento IS900 de Mycobacterium avium paratuberculosis (MAP) por PCR en tiempo real. Conclusión: los macrófagos de vacas con la enfermedad de Johne pueden ser usados para la amplificación del segmento IS900 de MAP.

Anamnese: uma vaca Holstein com 6 anos de idade (Bos taurus taurus) apresentou os sintomas da fase IV da doença de Johne. Achados clínicos e laboratoriais: a vaca teve diarreia intermitente por seis meses sem resposta ao tratamento com antibióticos. Por conseguinte, a vaca foi submetida à eutanásia. Abordagem de tratamento: amostras de leite e de sangue periférico foram retiradas ante-mortem, enquanto as amostras da mucosa intestinal, baço e linfonodos mesentéricos e mediastinais foram tomadas todas post-mortem para o isolamento de macrófagos. O ADN total de macrófagos foi utilizado para amplificação do segmento IS900 do Mycobacterium avium paratuberculosis (MAP) por PCR em tempo real. Conclusão: macrófagos isolados a partir de vacas com doença de Johne podem ser utilizados para a amplificação da segmento IS900 do MAP.

Necrotizing hepatopancreatitis (NHP) in marine shrimp / Hepatopancreatite necrosante (NHP) em camarão marinho

Necrotizing hepatopancreatitis (NHP) is a serious bacterial disease which affects cultured shrimp. It is caused by Rickettsia-like, pleomorfic, gram-negative, obligatory intracellular bacteria that attack hepatopancreas" cells. NHP prevalence is associated with high temperatures and salinity periods, ocurring mainly in juveniles and adults, not being observed clinical signs in post-larval stages. It attacks several penaeid species; however NHP in Litopenaeus vannamei is most reported. Ingestion of infected dead animals or material of is the most probable mean of contamination. NHP affected shrimp may become lethargic, anorexic, soft-shelled, flaccid body with loose cuticle, darkened gills and atrophic and pale hepatopancreas. Water quality control is very important in the prophylaxis of the disease. The techniques mostly used for the diagnosis of NHP are wet mounts of hepatopancreas, histology, in situ hibridization and most accurately, PCR. Drugs as oxytetracyclin have demonstrated good results in the prevention and in the treatment of NHP. However, it was aimed to enlarge the knowledge of necrotizing hepatopancreatitis in marine shrimp and show the need of more researches and discussion on this subject.

A hepatopancreatite necrosante (NHP) é uma enfermidade bacteriana grave, que acomete os camarões marinhos. É causada por uma bactéria intracelular obrigatória, pleomórfica, gram-negativa, do tipo Rickettsia, que ataca as células do hepatopâncreas (glândula digestiva). A NHP está associada a períodos prolongados de elevadas temperaturas e salinidades, ocorrendo principalmente em animais juvenis e adultos, não sendo observados sinais clínicos em pós-larvas. Pode acometer várias espécies, mas principalmente Litopenaeus vannamei. A transmissão ocorre através da ingestão de animais mortos contaminados ou de material contaminado. Os camarões afetados apresentam-se letárgicos, anoréxicos, exoesqueleto amolecido, corpo flácido, cutícula frouxa, brânquias escurecidas, hepatopâncreas atrofiado e pálido. O controle físico-químico da água é de extrema importância na profilaxia da doença. As técnicas mais usadas para o diagnóstico da NHP são: o exame a fresco (análise presuntiva), a histopatologia, hibridização in situ e principalmente Reação em Cadeia de Polimerase (PCR). Drogas como a oxitetraciclina têm demonstrado bons resultados, tanto na prevenção como no tratamento desta enfermidade. Contudo, objetivou-se ampliar os conhecimentos sobre a hepatopancreatite necrosante em camarões marinhos buscando mostrar a necessidade de mais pesquisas e discussão sobre este assunto.

Necrotizing hepatopancreatitis (NHP) in marine shrimp / Hepatopancreatite necrosante (NHP) em camarão marinho

Necrotizing hepatopancreatitis (NHP) is a serious bacterial disease which affects cultured shrimp. It is caused by Rickettsia-like, pleomorfic, gram-negative, obligatory intracellular bacteria that attack hepatopancreas" cells. NHP prevalence is associated with high temperatures and salinity periods, ocurring mainly in juveniles and adults, not being observed clinical signs in post-larval stages. It attacks several penaeid species; however NHP in Litopenaeus vannamei is most reported. Ingestion of infected dead animals or material of is the most probable mean of contamination. NHP affected shrimp may become lethargic, anorexic, soft-shelled, flaccid body with loose cuticle, darkened gills and atrophic and pale hepatopancreas. Water quality control is very important in the prophylaxis of the disease. The techniques mostly used for the diagnosis of NHP are wet mounts of hepatopancreas, histology, in situ hibridization and most accurately, PCR. Drugs as oxytetracyclin have demonstrated good results in the prevention and in the treatment of NHP. However, it was aimed to enlarge the knowledge of necrotizing hepatopancreatitis in marine shrimp and show the need of more researches and discussion on this subject.

A hepatopancreatite necrosante (NHP) é uma enfermidade bacteriana grave, que acomete os camarões marinhos. É causada por uma bactéria intracelular obrigatória, pleomórfica, gram-negativa, do tipo Rickettsia, que ataca as células do hepatopâncreas (glândula digestiva). A NHP está associada a períodos prolongados de elevadas temperaturas e salinidades, ocorrendo principalmente em animais juvenis e adultos, não sendo observados sinais clínicos em pós-larvas. Pode acometer várias espécies, mas principalmente Litopenaeus vannamei. A transmissão ocorre através da ingestão de animais mortos contaminados ou de material contaminado. Os camarões afetados apresentam-se letárgicos, anoréxicos, exoesqueleto amolecido, corpo flácido, cutícula frouxa, brânquias escurecidas, hepatopâncreas atrofiado e pálido. O controle físico-químico da água é de extrema importância na profilaxia da doença. As técnicas mais usadas para o diagnóstico da NHP são: o exame a fresco (análise presuntiva), a histopatologia, hibridização in situ e principalmente Reação em Cadeia de Polimerase (PCR). Drogas como a oxitetraciclina têm demonstrado bons resultados, tanto na prevenção como no tratamento desta enfermidade. Contudo, objetivou-se ampliar os conhecimentos sobre a hepatopancreatite necrosante em camarões marinhos buscando mostrar a necessidade de mais pesquisas e discussão sobre este assunto.