Avaliação da segurança da esterilização por peróxido de hidrogênio vaporizado nas práticas atuais do centro de material e esterilização / Safety Assessment of Vaporized Hydrogen Peroxide Sterilization in the Current Practices of Central Sterile Service Departments

Introdução: O recente avanço das técnicas cirúrgicas demandou a utilização de métodos de esterilização a baixa temperatura, tal como o peróxido de hidrogênio vaporizado (VH2O2), para possibilitar a esterilização de produtos para saúde (PPS) termossensíveis. Embora amplamente utilizado nos Centros de Material e Esterilização (CME), os problemas relacionados à esta tecnologia são muitos, tais como: baixa difusibilidade do VH2O2, ausência de normas construtivas e de validação, limitação das tecnologias para medir a concentração do agente esterilizante, validação e monitoramento dos ciclos, além de práticas inadequadas de carregamento e esterilização de PPS. Objetivo: Avaliar, por meio de indicadores físicos (IF) e biológicos (IB), se as práticas atuais do CME, na escolha das cargas e do carregamento, interferem na segurança dos esterilizadores de VH2O2: Sterrad® 100S ciclo curto, Sterrad® 100NX ciclo padrão e Vpro® Max ciclo sem lúmen. Método: Pesquisa de campo, exploratória e descritiva, realizada em hospitais que utilizam os equipamentos supracitados na rotina. Os dados foram coletados após aprovação do Comitê de Ética e Pesquisa e autorização dos hospitais participantes. Foram avaliados três esterilizadores de cada modelo de CMEs distintos, sendo que a escolha dos ciclos para coleta dos dados deu-se pela maior criticidade e frequência de utilização nos locais de estudo. Os IB foram posicionados, unitariamente, em envelopes duplos de Tyvek® (considerados pacote-teste), com fechamento por selagem térmica. Em cada esterilizador, foi realizado um ensaio vazio em meio ciclo, com três pacotes-testes nas seguintes posições: superior/anterior; superior/centro e inferior/posterior. Sequencialmente, foram realizados ensaios com a mesma carga em triplicata, compostos pelos PPS que representam um desafio à rotina, também, em meio ciclo. Internamente, adicionaram-se IB, além de dois pacotes-testes posicionados na parte superior/anterior e inferior /posterior, sendo o primeiro colocado no ponto mais próximo da entrada do agente esterilizante, e o segundo colocado no ponto mais distante. Resultados: do total de 9 ensaios com carga para cada modelo de esterilizador, obtemos IB positivos em 22% dos ensaios do modelo 100S, 33% no modelo 100NX e 100% no modelo V-pro. Os IB positivos foram relacionados à sobreposição de pacotes, à presença de tapete imantado, às bandejas de acondicionamento sem instrução de uso do fabricante (IUF) para o método e, principalmente, à difusibilidade do VH2O2 prejudicada em pontos mais distantes da entrada do VH2O2 na câmara de esterilização. Outras hipóteses que podem ter contribuído para o resultado foram a falta de IUF dos PPSs para o método e o uso de massa adicional que consome o VH2O2. Não foi possível correlacionar os resultados dos IB positivos aos parâmetros físicos do esterilizador, bem como ao total de peso da carga. Conclusão: O presente estudo pode afirmar que as cargas e o carregamento interferem na segurança dos esterilizadores por VH2O2. As IUF validadas dos esterilizadores, dos PPSs, dos sistemas de barreira estéril e das bandejas de acondicionamento devem ser respeitadas, como também a qualificação dos equipamentos com carga que representem um desafio da rotina utilizando-se IB em meio ciclo. Este procedimento pode detectar a insuficiência de exposição dos PPSs ao agente esterilizante para atender o Nível de Segurança de Esterilidade (SAL - Sterility Assurance Level) de 10-6 . Atualmente, o monitoramento de rotina de todos os ciclos com IB é o procedimento mais seguro para este método de esterilização.

Introduction: The recent advances in surgical techniques have required the use of low- temperature sterilization methods, such as vaporized hydrogen peroxide (VH2O2), to enable the sterilization of thermo-sensitive health care products. Although widely applied in Central Sterile Service Departments (CSSD), problems related to this technology are many such as: low diffusivity, lack of constructive and validation standards, technology limitation to measure the concentration of the sterilizing agent, cycle validation and monitoring, as well as inadequate loading and sterilization practices for health care products. Objective: Evaluating, through physical (PI) and biological (BI) indicators, whether the current practices of Central Sterile Service Departments, when choosing the load and the loading processes, interfere with the safety of VH2O2 sterilizers: Sterrad® 100S short cycle, Sterrad® 100NX standard cycle and Vpro® Max lumenless cycle. Method: Field, exploratory and descriptive research study performed in hospitals that use the aforementioned equipment in the working routine. Data were collected after approval by the Research Ethics Committee and authorization of the participating hospitals. Three sterilizers from each model and from different CSSD were evaluated, and the choice of cycles for data collection followed the criticality and frequency of use in the study sites. The BIs were unitarily positioned in double-Tyvek® (test-package) envelopes, with heat-sealing closure. In each sterilizer, a half-cycle no-loading test was performed, with three testing-packages in the following positions: upper/anterior; upper/center and lower/posterior. Subsequently, triplicate assays were performed with the same load, containing health care products that represent a routine challenge, also, in half cycle. BIs were added internally, in addition to two testing-packages, positioned in the upper/anterior and inferior/posterior area, the first placed at the point closest to the entrance of the sterilizing agent in the chamber, and the second at the farthest point. Results: For total of 9 assays with load from each sterilizers model, positive BIs 22% on assays in the 100S model test, 33% in the 100NX model and 100% in the V-pro model. The positive BIs were related to package overlapping; presence of magnetic mat; packaging trays, without the recommendations of the equipment manufacturers; and impaired diffusion of the VH2O2 sterilizing agent in the sterilization chamber, especially at points distant from the agent entrance. Other hypotheses that may have contributed to the result were the lack of IFU of the health care products for the method, as well as the use of additional mass consuming VH2O2. It was not possible to correlate the positive BI results to the physical parameters of the sterilizer, as well as to the total weight of the load. Conclusion: The current research study can conclude that the loads and the loading interfere in the safety of the sterilizers by VH2O2. The validated instructions for use of sterilizers manufacturers, health care products, sterile barrier systems and packaging trays must be respected, as well as the qualification of loading equipment, representing a challenge to the routine using BI in half cycle. This procedure can detect the insufficient exposure of health care products to the sterilizing agent to meet the Sterility Assurance Level (SAL) of 10-6 . Currently, routine monitoring of all cycles with BIs is the safest procedure for this sterilization method.

Sobrevivência de Campylobacter jejuni em amostras de leite pasteurizado e UHT artificialmente contaminados e mantidas sob refrigeração / Viability of Campylobacter jejuni in the refrigerated samples of artificially contaminated pasteurized and UHT milks

Campylobacter é o agente etiológico mais prevalente em gastroenterites de causa alimentar no mundo. Apesar de o leite cru ser fonte de infecção, pouco se conhece sobre as consequências da recontaminação do leite. A viabilidade de Campylobacter jejuni foi avaliada em leites pasteurizados e UHT mantidos sob refrigeração. Ambos os leites foram divididos em cinco porções de 100 mL, inoculados com 101 UFC.mL-1 de C. jejuni e mantidos de 4 ºC a 7 ºC por 48 horas. Repetiu-se o procedimento, utilizando-se inoculações de 102, 103 e 104 UFC.mL-1. As alíquotas foram analisadas imediatamente após inoculação e depois de 24 e 48 h quanto à viabilidade de C. jejuni. O micro-organismo manteve-se viável em todas as amostras, porém no leite pasteurizado houve redução de 1 ciclo log nas contagens após 24 h e baixas contagens após 48 h. Provavelmente,a redução ocorreu pela presença de microbiota neste leite, que competiu ou inibiu o crescimento de C. jejuni. O leite UHT ofereceu boas condições de sobrevivência em todos os períodos. O consumo de leite contaminado, mesmo em armazenamento refrigerado, pode ser fonte de infecção. O micro-organismo manteve-se mais viável no leite UHT quando comparado ao pasteurizado, provavelmente pela ausência de outros micro-organismos competidores.

Campylobacter is the most prevalent etiologic agent of foodborne gastroenteritis worldwide.Although raw milk is an important source of infection, little is known about the consequencesof milk recontamination. This study aimed at verifying the viability of Campylobacter jejuni inpasteurized and UHT milks stored under refrigeration. Both samples were divided into five portionsof 100 mL, inoculated with 101 CFU.mL-1 of C. jejuni and stored at 4 °C - 7 ºC for 48 h. The procedure was repeated using inoculations of 102, 103 and 104 CFU.mL-1. Aliquots were analyzed immediatelyafter inoculation and after 24 and 48 h to evaluate C. jejuni viability. The microorganism their viabilityin all of samples. In pasteurized milk a reduction of 1 log cycle occurred after 24 h and low countsafter 48 h. Probably, the reduction happened due to the occurrence of microbiota in this milk, whichcaused competition or inhibition of microorganism growth. UHT milk offered good conditions forbacteria survival in all of the periods. The consumption of contaminated milk, even stored under refrigeration might be a source of infection. Microorganism were more viable in UHT milk thanin pasteurized one, probably owing to the absence of competing microorganisms.

Perfis de compostos voláteis de banana submetidos a diferentes tratamentos pós-colheita e suas correlações com a expressão diferencial dos receptores de etileno / Volatile compounds profile of bananas submitted to different post-harvest treatments and its correlations to differential expression of ethylene receptors

O aroma de frutos é um atributo fortemente associado à qualidade, e quaisquer alterações ambientais ou tratamentos pós-colheita podem alterar a sua composição. Acredita-se que a biossíntese de voláteis seja um dos processos regulados pelo etileno. Estudos indicam que a expressão diferencial dos elementos que compõem os receptores de etileno desempenha importante papel na sinalização dos processos ligados ao amadurecimento, entre eles a formação do aroma. Os objetivos deste trabalho são: caracterizar as alterações decorrentes de tratamentos pós-colheita no aroma de banana durante o amadurecimento, e correlacionar com as variações nos padrões de expressão gênica diferencial dos receptores de etileno. Bananas pré-climatéricas variedade Nanicão foram divididas em quatro grupos: controle (não tratado), etileno (100ppm/12h), 1-MCP (100ppb/12h), armazenados a 20°C, e grupo frio (armazenado por 15 dias a 13°C). Foram analisados diariamente a produção de etileno e de CO2 por CG. Foram analisadas a cor da casca, açúcares solúveis e amido. Os compostos voláteis foram isolados por microextração em fase sólida (SPME) em frutos inteiros e polpas e analisados em CG-MS. Para confirmar os resultados e verificar se as alterações encontradas se repetem em outras variedades de bananas, o estudo foi repetido no Horticultural Sciences Department, na Universidade da Florida (EUA), em bananas var. 'Grand Naine'. Em paralelo, realizou-se a quantificação relativa da expressão dos receptores de etileno (ETR1, ERS1, ERS2 e ERS3) por PCR em tempo real. Com relação ao perfil de voláteis, os resultados indicam que os frutos não se diferenciam no período pré-climatérico. Porém, o perfil de voláteis do grupo controle foi significativamente diferente do grupo frio, tanto na polpa quanto no fruto inteiro no período climatérico. Esse efeito foi mais pronunciado na Nanicão do que na 'Grand Naine'. Compostos típicos como o acetato de isoamila foram drasticamente reduzidos nos frutos submetidos ao frio, e não foram encontrados na Nanicão. Não houve diferenças significativas com relação ao perfil de aromas entre o grupo controle e o grupo etileno. Com relação aos frutos tratados com 1-MCP observou-se o atraso na formação de alguns compostos sem alterar, contudo, o perfil final de voláteis. Com relação ao padrão de transcrição dos receptores de etileno, o frio reduziu o acúmulo dos transcritos do ETR1, ERS2 e ERS3 em todos os pontos. ERS1 parece estar correlacionado com a síntese de esteres. Os resultados sugerem que o mecanismo pelo qual o etileno regula o metabolismo de biossíntese de aromas parece contar com a participação relevante de determinados tipos de receptores. A correlação temporal encontrada entre as alterações no perfil de transcritos de três destes e os efeitos sobre a produção de compostos voláteis reforçam esta hipótese

Fruit aroma is an attribute strongly associated to quality, and any change in the environment or post-harvest treatment could affect its composition. Volatile biosynthesis is a process that is believed to be regulated by ethylene. Studies demonstrate that differential expression of ethylene receptors have an important role in fruit ripening processes, including aroma synthesis. The aims of this study are: evaluate modifications due to post-harvest treatment on the aroma of banana fruit during ripening, and correlate to variations on differential expression of ethylene receptors. Pre climacteric bananas of 'Nanicão' variety were divides in four groups: control (without treatment), ethylene (100ppm/12h), 1-MCP (100ppb/12h), stored at 20°C, and cold storage group (stored for 15 days at 13°C). Daily measurements were conducted of ethylene production and respiration using GC. Peel color, soluble sugars and starch were analyzed. Volatile compounds were isolated by solid phase microextraction (SPME) in whole fruits and pulp and analyzed by GCMS. To confirm the results ant to verify if the findings repeat in another banana variety, this study was repeated at Horticultural Sciences Department, at University of Florida (EUA), under supervision of Dr. Jeffrey K. Brecht, in bananas Cavendish cv. 'Grand Naine'. Also, relative quantification of the expression of ethylene receptors (ETR1, ERS1, ERS2 and ERS3) was analyzed using real time PCR. Regarding the volatile profile, groups did not differentiated in pre-climacteric period. But the volatile profile of control group significantly differentiates from cold storage group, in both pulp and whole fruit, in post climacteric period. This effect was more pronounced in bananas 'Nanicão' than 'Grand Naine'. Typical banana aroma compounds like isoamyl acetate were drastically reduced in fruits under cold storage, and were not found in 'Nanicão'. There were not any significant differences between control group and ethylene treated. Regarding 1-MCP treated fruits, there was a delay on the synthesis of some compounds without affecting the final volatile profile. Regarding the transcription pattern of ethylene receptors, cold storage reduced mRNA of ETR1, ERS2 and ERS3 in all samples. ERS1 receptor seems to be correlated to ester synthesis. These results suggest that the mechanism whereby the ethylene regulates the biosynthesis of aroma, seems to count with relevant participation of some receptors. The temporal correlation found in the differential expression of three receptors and the effect on volatile compounds synthesis reinforces this hypothesis