Avaliação do papel da crotoxina na modulação da carcinogênese pulmonar induzida em animais fenotipicamente selecionados para a resposta inflamatória aguda

Cancer is the main cause of death in the world, with lung cancer being responsible for most of the deaths, either because it is often diagnosed at a late stage or due to the lack of effective therapeutic methods. Crotoxin (CTX) is the main component of South American rattlesnake venom, corresponding to about 60% of its composition. In recent years, its immunomodulatory, anti-inflammatory, and antitumor properties have been described, making it a new possible candidate for therapeutic use. In order to study the regulatory role of CTX, lung carcinogenesis was induced by intraperitoneal injection of urethane (URT) in mice phenotypically selected for maximal (AIRmax) or minimal (AIRmin) acute inflammatory responses. From a genetic background, these animals have different sensitivity to urethane-induced lung tumorigenesis due to the fixation of alleles with opposite effects at the pas1 locus (Pulmonary adenoma susceptibility 1) during the selection process, with a susceptibility allele (pas1s ) in the AIRmin mice and a resistance allele (pas1r ) in the AIRmax mice. Considering these differences and the described effects of CTX, these animals were subjected to different treatments with CTX and evaluated regarding their tumorigenesis in terms of incidence and cellular dynamics in the lung. The results showed that the phenotypes of resistance and susceptibility in the mice were preserved, even after CTX administration. Additionally, possible modulatory effects of CTX were observed, mainly in histopathologic analysis on the groups where CTX was administered 10 days after tumor induction by urethane with a concentration of 8 μg/kg and 16 μg/kg, and also on the treatment where CTX was administered every 10 days with a concentration of 8 μg/kg.

O câncer é a principal causa de morte no mundo, sendo o câncer de pulmão o responsável pelo maior número de óbitos, seja por ser diagnosticado muitas vezes num estágio tardio ou pela falta de métodos terapêuticos eficazes. A crotoxina (CTX) é o principal componente do veneno da cascavel (Crotalus durissus terrificus), correspondendo a cerca de 60% da sua composição. Nos últimos anos, têm sido descritas as suas propriedades imunomoduladoras, anti-inflamatórias e antitumorais, sendo apresentada como uma possível candidata para utilização terapêutica. Com o intuito de estudar o papel regulador da CTX, foi induzida carcinogênese pulmonar por injeção intraperitoneal de uretana (URT), em animais fenotipicamente selecionados para resposta inflamatória aguda máxima (AIRmax) ou mínima (AIRmin). Do ponto de vista genético, estes animais apresentam uma sensibilidade diferenciada à tumorigênese pulmonar induzida por URT, relacionada à fixação de alelos de efeitos opostos no locus pas1 (Pulmonary adenoma susceptibillity 1) durante o processo de seleção, com um alelo de suscetibilidade (pas1s ) na linhagem AIRmin, e um alelo de resistência (pas1r ) na linhagem AIRmax. Considerando estas diferenças entre as linhagens e os efeitos descritos da CTX, esses animais foram submetidos a diferentes tratamentos com CTX e avaliados quanto à tumorigênese, no que concerne à incidência e dinâmica celular no pulmão. Os resultados demonstraram que os fenótipos de resistência e susceptibilidade estão preservados entre as linhagens, mesmo após a administração da CTX. Adicionalmente, foram observados possíveis efeitos moduladores da CTX, principalmente nas análises histopatológicas nos grupos de tratamento quando a CTX é aplicada 10 dias após a administração de URT na concentração de 8 μg/kg e 16 μg/kg, assim como quando aplicada continuamente de 10 em 10 dias numa concentração de 8 μg/kg.

Análise da urina dos camundongos ofertados com água filtrada e autoclavada (esterilizada)

Water is considered one of the most important concerns in the world in terms of its use and maintenance as a universal good. Drinking water is considered when it poses no risk to health, is free of chemical and biological agents harmful to human and animal health, and is therefore fit for consumption. The supply of water in vivariums, whether for experimentation or production, may not present a water quality that is satisfactory for consumption, as the supply comes from the ater and sewage treatment system, which may still contain microorganisms and residues, such as iron, chlorine, heavy metals and even other organisms harmful to animal health. The vivariums have physical and chemical systems such as autoclaving, filtration, chlorination and acidification to contain the amount of waste and infectious agents in the water offered to the animals and the laboratory routine -LENA DE SÁ, et al. 2001-. Chemical processes require the need for regular tests to validate the water, ensuring quality for animal ingestion. Filtration, which is a physical method, manages to block undesirable substances through granulation -sand and carbon- and autoclave sterilization becomes more used. -KURTZ, et al. 2020-. In vivariums, whether for experimentation or creation, in addition to filtration, the autoclave becomes one of the indispensable items, as there is a requirement that the animals do not suffer external interference to the point of harming or altering the results of the experiments. NORMATIVA N.33 CONCEA, 2016. The present project aimed to compare water samples, offered to mice, which went through the filtration and autoclaved process, and to determine the parameters of the urine samples. The results of the water analysis were identical between both samples and the values of the reactive strip markers in the urine, showed results within the reference values, demonstrating that filtered water or autoclaved water is effective to maintain the health of the animals.

A água é considerada uma das mais importantes preocupações no mundo no que se refere ao uso à sua manutenção como um bem universal. Considera-se água potável quando ela não oferece nenhum risco à saúde, está livre de agentes químicos e biológicos nocivos à saúde humana e animal, estando assim, própria para consumo. A oferta de água em biotérios, seja ele de experimentação ou de produção, podem não apresentar a qualidade de água que seja satisfatória para o consumo, pois a oferta vem do sistema de tratamento de água e esgoto, que ainda podem conter microorganismos e resíduos, como ferro, cloro, metais pesados e até outros organismos nocivos à saúde animal. Os biotérios contam com sistemas físicos e químicos como autoclavação, filtração, cloração e acidificação para conter a quantidade de resíduos e agentes infecciosos na água ofertada aos animais e a rotina laboratorial (LENA DE SÁ, et al. 2001). Os processos químicos exigem a necessidade de testes regulares para a validação da água, garantindo a qualidade para ingestão animal. Já a filtração, que é um método físico, consegue barrar substâncias indesejáveis por meio de granulação -areia e carbono- e a esterilização por autoclave se tornam mais utilizados -KURTZ, et al. 2020-. Nos biotérios, sejam eles de experimentação ou criação, além da filtração, a autoclave torna-se um dos itens indispensáveis, pois há a exigência que os animais não sofram interferências externas a ponto de prejudicar ou alterar os resultados dos experimentos NORMATIVA N 33 CONCEA 2016. O presente projeto teve como objetivo comparar amostras de água, ofertadas para camundongos, que passaram pelo processo de filtração e autoclavada, e determinar os parâmetros das amostras de urina. Os resultados da análise de água foram idênticos entre ambas as amostras e os valores dos marcadores de fita reativa na urina, mostraram resultados dentro dos valores de referência, demonstrando que água filtrada ou a água autoclavada são eficazes para manter a saúde dos animais.

Estudo comparativo entre anestesia dissociativa e anestesia inalatória para inoculação intracerebral em camundongos

This work seeks to show a comparative analysis between dissociative anesthesia and inhalational general anesthesia used in intracerebral inoculations of mice. The intracerebral inoculation technique (challenge) is used in Biological Quality Control for the potency tests of the rabies vaccine and vaccines with a pertussis component. Intracerebral inoculation is an invasive and painful procedure for the animal, due to the increase in intracranial pressure and, therefore, it is essential to perform anesthesia before the procedure so that the inoculation is performed safely and painlessly, allowing greater comfort to the animal and less variability of the technique. For many years, dissociative anesthesia was the only approach used in laboratory animals, but with the development of studies and research, other approaches, such as inhalation anesthesia, have become increasingly used, providing a lot of safety and good results. Evaluating both anesthesia techniques, we observed that the animals submitted to inhalation anesthesia reached the adequate anesthetic plane more quickly, a quick recovery and low mortality, when compared to dissociative anesthesia. In conclusion, this work showed that for the intracerebral inoculation procedure, the inhalational anesthesia approach is more satisfactory.

Este trabalho busca mostrar uma análise comparativa entre a anestesia dissociativa e anestesia geral inalatória utilizada em inoculações intracerebrais de camundongo. A técnica de inoculação intracerebral (desafio) é utilizada no Controle de Qualidade Biológico para os testes de potência da vacina da raiva e vacinas com componente pertussis. A inoculação intracerebral é um procedimento invasivo e doloroso ao animal, devido ao aumento da pressão intracraniana e, por isso é fundamental a realização de anestesia antes do procedimento para que a inoculação seja realizada de forma segura e indolor, permitindo um maior conforto ao animal e menor variabilidade da técnica. Durante muitos anos a anestesia dissociativa foi a única abordagem utilizada em animais de laboratório, mas com o desenvolvimento de estudos e pesquisas, outras abordagens, como a anestesia inalatória, tornam-se cada vez mais utilizadas, fornecendo bastante segurança e bons resultados. Avaliando ambas as técnicas de anestesia, observamos que os animais submetidos a anestesia inalatória atingiram mais rapidamente o plano anestésico adequado, uma recuperação rápida e baixa mortalidade, quando comparada com a anestesia dissociativa. Em conclusão este trabalho mostrou que para o procedimento de inoculação intracerebral a abordagem da anestesia inalatória é mais satisfatória.

Refinamento do teste da potência do soro antitetânico

O tétano é uma doença infecciosa aguda e grave, causada pelo Clostridium tetani, uma bactéria gram-positiva anaeróbia restrita que produz a neurotoxina tetânica. O objetivo desse trabalho foi observar o refinamento do teste de potência do soro antitetânico. Para se estabelecer a capacidade protetora do soro antitetânico sobre o efeito letal de uma dose fixa de toxina tetânica é utilizado o teste de potência em camundongos Swiss. Esta metodologia é realizada na rotina do Controle de Qualidade biológico para liberação dos lotes de soros antitetânicos produzidos pelo Instituto Butantan. No teste de potência, alguns dos animais desenvolvem a doença e após o início dos sintomas, não é possível observar uma reversão dos efeitos causados pela doença, portanto a introdução do ponto final humanitário, a retira prévia dos animais do teste e a alteração do local de inoculação, revelaram uma melhora significativa no bem-estar dos animais. O Controle de Qualidade Biológico realizou o refinamento do teste, não permitindo a evolução da doença, ou seja, a retirada dos camundongos no terceiro estágio de adoecimento, diminuindo o sofrimento, dor e estresse dos animais.

Atorvastatina Atenua o Remodelamento Vascular em Camundongos com Síndrome Metabólica / Atorvastatin Attenuates Vascular Remodeling in Mice with Metabolic Syndrome

Resumo Fundamento A síndrome metabólica é caracterizada por um conjunto de comorbidades. Durante a síndrome, observam-se alterações estruturais no sistema cardiovascular, especialmente o remodelamento vascular. Uma das causas predisponentes para essas alterações é a inflamação crônica oriunda de mudanças na estrutura e composição do tecido adiposo perivascular. Atorvastatina é eficaz no tratamento das dislipidemias. No entanto, seus efeitos pleiotrópicos não são totalmente compreendidos. Supõe-se que, durante a síndrome metabólica, ocorre remodelamento vascular e que o tratamento com atorvastatina pode ser capaz de atenuar tal condição. Objetivos Avaliar os efeitos do tratamento com atorvastatina sobre o remodelamento vascular em modelo experimental de síndrome metabólica. Métodos Camundongos Swiss receberam dieta controle ou dieta hiperglicídica por 18 semanas. Após 14 semanas de dieta, os camundongos foram tratados com veículo ou atorvastatina (20mg/kg) durante 4 semanas. Foram avaliados o perfil nutricional e metabólico por testes bioquímicos; análise estrutural da artéria aorta por histologia e dosagem de citocinas por ensaio imunoenzimático. O nível de significância aceitável para os resultados foi p <0,05. Resultados A dieta hiperglicídica promoveu o desenvolvimento de síndrome metabólica. Tal fato culminou no remodelamento hipertrófico do músculo liso vascular e tecido adiposo perivascular. Além disso, houve aumentos das citocinas TNF-α e IL-6 circulantes e no tecido adiposo perivascular. O tratamento com atorvastatina reduziu significativamente os danos metabólicos, o remodelamento vascular e os níveis de citocinas. Conclusão Atorvastatina ameniza danos metabólicos associados à síndrome metabólica induzida por dieta hiperglicídica, além de atenuar o remodelamento vascular, sendo esses efeitos associados à redução de citocinas pró-inflamatórias.

Abstract Background Metabolic syndrome is characterized by an array of comorbidities. During this syndrome, structural changes are observed in the cardiovascular system, especially vascular remodeling. One of the predisposing causes for these changes is chronic inflammation resulting from changes in the structure and composition of perivascular adipose tissue. Atorvastatin is effective in the treatment of dyslipidemias. However, its pleiotropic effects have not been completely understood. We hypothesize that metabolic syndrome may lead to vascular remodeling and that atorvastatin therapy may be able to attenuate this condition. Objectives To assess the effects of atorvastatin therapy on vascular remodeling in an experimental model of metabolic syndrome. Methods Swiss mice received a control diet or a hyperglicemic diet for 18 weeks. After 14 weeks of diet, mice were treated with vehicle or atorvastatin (20mg/kg) during for 4 weeks. Nutritional and metabolic profiles were assessed by biochemical tests; moreover, a histological assessment of aorta structure was conducted, and cytokine levels were determined by the immunoenzyme assay. The acceptable level of significance for the results was set at p<0.05. Results Hyperglicemic diet promoted the development of metabolic syndrome. It indeed culminated in hypertrophic remodeling of vascular smooth muscle and perivascular adipose tissue. Furthermore, there were increases in the levels of circulating TNF-α and IL-6 and in the perivascular adipose tissue. Atorvastatin therapy significantly reduced metabolic damages, vascular remodeling, and cytokine levels. Conclusion Atorvastatin attenuate metabolic damages associated with metabolic syndrome induced by hyperglycemic diet, in addition to attenuating vascular remodeling; both effects are associated with reduced levels of pro-inflammatory cytokines.

Effect of long-term consumption of oxidized polyunsaturated fatty acids on atherosclerotic lesion in LDL receptor knockout mice / Efeito do consumo crônico de ácidos graxos poliinsaturados oxidados na aterosclerose em camundongos knockout para receptor de LDL

Polyunsaturated fatty acids (PUFA) are susceptible to enzymatic and non-enzymatic oxidation, leading to the production of secondary compounds that present different physiological effects. Among the PUFA, the products formed from Omega 6 (n-6 FA) and Omega 3 (n-3 FA) fatty acids oxidation can modulate inflammation, dyslipidemia and oxidative stress preventing or reducing the atherosclerosis progression. In fact, the effect of chronic intake of edible oils containing products of polyunsaturated fatty acids oxidation (POPs) on atherosclerosis is still controversial. In general POPs from n-6 FA have a more pro-inflammatory profile than POPs from n-3 FA. Thus, the objective of this study was to compare the chronic intake of partially oxidized n-6 FA and n-3 FA rich oils on atherosclerosis biomarkers. Initially, six edible oils containing a higher amount of n-6 and n-3 FA were submitted to oxidative conditions, simulating the steps of transport, storage and consume. It was observed that oxidative reaction started in all oils since the first step and at the moment of consumption, some oxidative chemical markers were out the legal range suggested by the Official Agencies. In addition, it was possible to identify the type of secondary product formed from each precursor oil, providing a better information for oils quality control. After this step, fish and soybean oils were chosen as n-3 FA and n-6 FA rich oils, respectively. Using LDLr(-/-) mice, the effect of three oxidative levels of soybean oil was evaluated after 24 weeks of supplementation. Animals fed with the oil with the highest level of oxidation (fried and reused oil) showed no body weight gain, suggesting that POPs from soybean oil at this level could promote a browning effect on white adipose tissue by increasing UCP-1 expression. This group also showed the highest concentration of lipoproteins in plasma. However, these metabolic differences did not accelerate atherosclerosis in the animals. Finally, the effect of POPs from n-3 FA and n-6 FA oxidation were compared also using LDLr(-/-) mice as model for experimental atherosclerosis. Some alterations observed after n-3 FA supplementation, such as the increase of liver weight, IL-6, SONPC, 8-HETE and 15-F2-Isop and the decrease of BAT and glucose, were reversed by their POPs. In addition, POPs from n-6 FA caused increased of LDL and 5-HETE. As observed in the previous study, these metabolic alterations were not enough to prevent or accelerate atherosclerosis, as measured by histological analysis of the lesion size in the aorta. These results suggest that although a significant amount of POPs are being consumed by diet, their metabolic effects did not influence atherosclerotic plaques in the animal model. However, besides lesion area in the aortas, new studies should also evaluate the plaques stability

Os ácidos graxos poliinsaturados (PUFA) são suscetíveis à oxidação enzimática e não enzimática, levando à produção de compostos secundários que apresentam diferentes efeitos fisiológicos. Entre os PUFA, os produtos formados a partir da oxidação dos ácidos graxos ômega 6 (n-6 FA) e ômega 3 (n-3 FA) podem modular a inflamação, dislipidemia e estresse oxidativo, impedindo ou reduzindo a progressão da aterosclerose. De fato, o efeito da ingestão crônica de óleos contendo produtos da oxidação de ácidos graxos poliinsaturados (POPs) na aterosclerose ainda é controverso. Em geral, os POPs dos n-6 FA têm um perfil mais pró-inflamatório do que os POPs dos n-3 FA. Assim, o objetivo deste estudo foi comparar a ingestão crônica de POPs provenientes de óleos ricos em n-6 FA e n-3 FA em biomarcadores de aterosclerose. Inicialmente, seis óleos ricos em n-6 FA e n-3 FA foram submetidos a condições oxidativas, simulando as etapas de transporte, armazenamento e consumo. Observou-se que a reação oxidativa iniciou-se em todos os óleos desde a primeira etapa e, no momento do consumo, alguns marcadores oxidativos estavam fora da faixa legal sugerida pelas agências reguladoras. Além disso, foi possível identificar o tipo de produto secundário formado a partir de cada óleo precursor, fornecendo melhores informações para o controle de qualidade dos óleos. Após esta etapa, os óleos de peixe e soja foram escolhidos como óleos ricos em n-3 FA e n-6 FA, respectivamente. Utilizando camundongos LDLr(-/-), o efeito de três níveis oxidativos de óleo de soja foi avaliado após 24 semanas de suplementação. Os animais alimentados com o óleo com maior nível de oxidação (óleo frito e de reuso) não apresentaram ganho de peso corporal, sugerindo que os POPs do óleo de soja nesse nível de oxidação pudessem promover um efeito de Browning no tecido adiposo branco, aumentando a expressão de UCP-1. Este grupo também mostrou a maior concentração de lipoproteínas no plasma. No entanto, essas diferenças metabólicas não aceleraram a aterosclerose nos animais. Finalmente, o efeito de POPs da oxidação de óleos ricos em n-3 FA e n-6 FA foi comparado também usando camundongos LDLr(-/-), como modelo para aterosclerose experimental. Algumas alterações observadas após a suplementação com óleo de peixe fresco, como aumento do peso hepático, IL-6, SONPC, 8-HETE e 15-F2-IsoP e diminuição da BAT e glicose, foram revertidas por seus POPs. Além disso, os POPs do óleo de soja causaram aumento de LDL e 5-HETE. Como observado no estudo anterior, essas alterações metabólicas não foram suficientes para prevenir ou acelerar a aterosclerose, medida pela análise histológica do tamanho da lesão na aorta. Esses resultados sugerem que, embora uma quantidade significativa de POPs esteja sendo consumida pela dieta, seus efeitos metabólicos não influenciaram as placas ateroscleróticas no modelo animal. Porém, além da área de lesão nas aortas, novos estudos também devem avaliar a estabilidade das placas

Análise proteômica dos efeitos cardiotóxicos da peçonha de Crotalus durissus terrificus

Todo ano, aproximadamente 2,7 milhões de indivíduos são mordidos por serpentes peçonhentas em todo o mundo. Dentre eles, são reportados cerca de 490.000 amputações e 130.000 óbitos bem como outros problemas graves de saúde resultante da mordida por serpentes. No Brasil, a serpente Crotalus durissus popularmente conhecida como cascavel é a única espécie do gênero Crotalus representada em todo o território. Essa serpente é a mais letal e a segunda maior responsável pelos acidentes na população. A subespécie Crotalus durissus terrificus é encontrada predominantemente nas regiões Sul e Sudeste do país e possui uma peçonha conhecida por apresentar efeitos neurotóxicos, nefrotóxicos, miotóxicos, cardiotóxicos e por causar distúrbios hemolíticos e quadros de coagulopatias. Na literatura são encontrados muitos relatos que descrevem os aspectos patológicos, clínicos, toxicológicos, fisiológicos e bioquímicos dos efeitos do envenenamento em vários órgãos, contudo existem poucos registros descrevendo o efeito do envenenamento a nível molecular. Dessa forma, neste projeto foram avaliados os efeitos da peçonha da serpente C. d. terrificus no coração de camundongos de linhagem Swiss 1 h, 6 h, 12 h e 24 h após a aplicação de 0,5 DL50 da peçonha no músculo gastrocnêmio. O coração dos animais foi dissecado e lisado com tampão PTS. As proteínas cardíacas foram então extraídas, modificadas quimicamente (reduzidas e alquiladas), digeridas com tripsina e os peptídeos trípticos resultantes foram marcados com formaldeído leve (grupo controle) e pesado (grupo tratado com a peçonha) e submetidos à análise por espectrometria de massas de alta resolução. Foram identificadas mais de 1300 proteínas das quais várias delas apresentaram alterações no perfil quantitativo ao longo do tempo após o tratamento com a peçonha. A análise do perfil proteico mostrou os efeitos tóxicos da peçonha no coração do camundongo modulando várias proteínas associadas às mitocôndrias e relacionadas com cardiomiopatias hipertrófica e dilatada. As mudanças na abundância dessas proteínas sugerem como elas podem atuar sinergicamente sobre um quadro de envenenamento no tecido cardíaco por meio de distintos efeitos imunológicos e bioquímicos

Every year, approximately 2.7 million individuals are bitten by venomous snakes worldwide. Among them, about 490,000 amputations and 130,000 deaths are reported, as well as other serious health problems resulting from snake bites. In Brazil, Crotalus durissus, popularly known as rattlesnake is the only species of the Crotalus genus found in the entire country. This snake is the most lethal and the second most responsible for accidents in the population. Crotalus durissus terrificus is found predominantly in the South and Southeast of Brazil. Its venom is known for presenting neurotoxic, nephrotoxic, myotoxic and cardiotoxic effects and for causing hemolytic disorders and coagulopathies. Several reports in the literature describe the pathological, clinical, toxicological, physiological, and biochemical aspects of the effects of the envenomation in various organs, however there are few works describing the effect of the venom at the molecular level. In this project, we analyzed the effects of the C. d. terrificus snake venom in the heart of mice of the Swiss strain at 1 h, 6 h, 12 h and 24 h, after the application of 0.5 DL50 of the venom in the gastrocnemius muscle. The animals' hearts were dissected and lysed with PTS buffer. Cardiac proteins were extracted, chemically modified (reduced and alkylated), digested with trypsin and the resulting tryptic peptides were labeled with light (control group) and heavy (venom treated group) dimethyl reagent and subjected to high-resolution mass spectrometry analysis. More than 1300 proteins were identified, several of them showed changes in the quantitative profile over the time after the venom treatment. The venom modulated several proteins associated with mitochondria and related to hypertrophic and dilated cardiomyopathies. Changes in the protein abundance suggests how proteins act synergistically upon envenomation in cardiac tissue, through distinct immunological and biochemical effects.

Association of polypropylene scaffolds and mesenchymal stem cells for use in tissue engineering / Associação de arcabouço de polipropileno e células tronco mesenquimais para uso em engenharia de tecido

Tissue engineering replaces injured tissues by manipulating cells, making scaffolds, and using molecules that stimulate the tissue. Mesenchymal stem cells (MSCs) are good candidates for tissue engineering, as this is one of the cell types which are recruited to repair injured tissues. Scaffolds are structural devices that allow cell fixation and migration, with polypropylene meshes being an example. This study aims to evaluate the culture of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ADSCs), isolated from C57Bl/6 GFP + mice, in two types of polypropylene meshes (macroporous and microporous) in conventional culture plates and plates coated with methacrylate, over a period of fifteen days. The objective was to obtain the best interaction protocol between the mesh and the cells. The choice of the best method was based on adherence, maintenance of adherence and viability during culture. The amount of ADSCs adhering was checked daily by counting in a Neubauer Chamber and by using a growth curve performed with the MTT assay. The ADSCs adhering to the meshes were visualized with DAPI, panotic, hematoxylin and eosin, immunohistochemistry (integrin), and immunofluorescence (actin). ADSCs adhere to all forms of culture and to the two types of polypropylene mesh. ADSCs adhered more to the microporous mesh, within the seven day period of culture and in the plates without methacrylate. Thus, polypropylene meshes offer a good scaffold for ADSCs to adhere to.

A engenharia de tecidos substitui tecidos danificados com a manipulação de células, confecção de arcabouços e a utilização de moléculas que estimulem o tecido. As células-tronco mesenquimais (MSCs) são boas candidatas para engenharia de tecido, pois são um dos tipos celulares recrutadas para a reparação de tecidos lesionados. O arcabouço deve ser um dispositivo estrutural que forneça uma estrutura para o crescimento e a diferenciação celular no sítio, sendo a tela de polipropileno um exemplo. O objetivo deste estudo foi avaliar o cultivo de células-tronco mesenquimais de tecido de adiposo (ADSCs), isoladas de camundongos C57Bl/6 GFP+, em dois tipos de telas de polipropileno (macroporosa e microporosa) em placas de cultura convencionais e revestidas com metacrilato, durante quinze dias, para obter o melhor protocolo de interação entre a tela e as células. A escolha do melhor método foi baseada na adesão, manutenção da adesão e viabilidade durante cultivo. A quantidade de ADSCs aderidas foi verificada diariamente em contagem em Câmara de Neubauer e através de uma curva de crescimento realizada através de ensaio de MTT. As ADSCs aderidas nas telas foram visualizadas com a marcação de DAPI, panótico, hematoxilina e eosina, imumo-histoquímica (integrina) e imunofluorescência (actina). Nas duas formas de cultivo e nos dois tipos de telas de polipropileno houve aderência das ADSCs. Houve maior aderência na tela microporosa, no período de sete dias de cultivo e em placas sem metacrilato. Conclui-se que a tela de polipropileno oferece um bom arcabouço para as ADSCs se aderirem.

Associação de arcabouço de polipropileno e células tronco mesenqimais para uso em engenharia de tecido / Association of polypropylene scaffolds and mesenchymal stem cells for use in tissue engineering

A engenharia de tecidos tem como objetivo substituir tecidos danificados, manipulando células, confecção de arcabouços e a utilização de moléculas que estimulem o tecido. A proposta deste estudo foi avaliar duas técnicas de cultivo de células-tronco mesenquimais (MSC) em diferentes placas de cultura, utilizando dois tipos de telas de polipropileno (macroporoso e microporoso), para obter as melhores condições de interação entre a tela e as células, e definir uma proposta de protético para engenharia de tecidos. As telas de polipropileno foram cultivadas com células-tronco mesenquimais de tecido adiposo (ADSCs) isoladas de camundongos C57B1/6 GFP+ durante quinze dias em placas revestidas com metacrilato ou não revestidas com metacrilato. A quantidade de ADSCs aderidas foram verificadas diariamente em Câmara de Neubauer e através de uma curva de crescimento realizada pelo ensaio MTT. As ADSCs aderidas às malhas foram visualizadas com marcação de DAPI, panóticas, hematoxilina e eosina imuno-histoquímica e imunofluorescência. O melhor protocolo foi na tela microporosa, no o período de sete dias de cultivo e em placas sem metacrilato. Conclui-se que a tela de polipropileno fornece um bom suporte para as ADSCs se aderirem podendo ser utilizada na engenharia de tecidos.

Tissue engineering replaces injured tissues by manipulating cells, making scaffolds, and using molecules that stimulate the tissue. Mesenchymal stem cells (MSCs) are good candidates for tissue engineering, as this is one of the cell types which are recruited to repair injured tissues. Scaffolds are structural devices that allow cell fixation and migration, with polypropylene meshes being an example. This study aims to evaluate the culture of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ADSCs), isolated from C57Bl/6 GFP + mice, in two types of polypropylene meshes (macroporous and microporous) in conventional culture plates and plates coated with methacrylate, over a period of fifteen days. The objective was to obtain the best interaction protocol between the mesh and the cells. The choice of the best method was based on adherence, maintenance of adherence and viability during culture. The amount of ADSCs adhering was checked daily by counting in a Neubauer Chamber and by using a growth curve performed with the MTT assay. The ADSCs adhering to the meshes were visualized with DAPI, panotic, hematoxylin and eosin, immunohistochemistry (integrin), and immunofluorescence (actin). ADSCs adhere to all forms of culture and to the two types of polypropylene mesh. ADSCs adhered more to the microporous mesh, within the seven day period of culture and in the plates without methacrylate. Thus, polypropylene meshes offer a good scaffold for ADSCs to adhere to.

The effect of 1-methyl-4-phenyl-1, 2, 3, 6-tetrahydropyridine (MPTP) on mice myocardial morphology / O efeito do 1-metil-4-fenil-1, 2, 3, 6 tetrahidropiridina (MPTP) na morfologia do miocárdio de camundongo

Studies have demonstrated sympathetic cardiac denervation in the MPTP mouse model. MPTP toxicity causes sympathetic nerve damage and depletion of heart norepinephrine. Previous evaluations of impairments in heart innervation have been based on imaging, electrophysiological and biochemical methods. However, these studies lacked information that can be obtained from morphoquantitative analyses. Thus, this study aimed to apply a design-based stereological method for evaluating the morphoquantitative alterations of myocardium following treatment with the neurotoxin MPTP in the C57/BL mouse. Our results showed that MPTP reduced the number of cardiomyocytes in the left ventricle.(AU)

Estudos têm demonstrado a desnervação simpática cardíaca no modelo da administração do MPTP em camundongo. A toxicidade do MPTP causa lesão ao nervo simpático e depleção da norepinefrina. As avaliações dos danos na inervação do coração são baseadas em métodos de imagem, eletrofisiológico e bioquímico. Contudo, estes estudos carecem de informações provenientes de análises morfoquantitativas. Assim, objetivou-se aplicar métodos estereológicos para avaliar as alterações morfoquantitativas do miocárdio após o tratamento com a neurotoxina MPTP no camundongo C57/BL. Nossos resultados mostraram que o MPTP causa redução no número de cardiomiócitos no ventrículo esquerdo.(AU)

Impacto do tempo de isquemia na análise de expressão gênica global em tecidos criopreservados / Impact of cold ischemia on global gene expression in cryopreserved tissues

O perfil de expressão gênica tem passado do cenário da pesquisa básica para a prática clínica, sendo cada vez mais utilizado como ferramenta na classificação de subtipos moleculares do câncer. No entanto, deve-se ter cautela ao interpretar as assinaturas gênicas, uma vez que os métodos de manuseio e preservação da amostra podem afetar a expressão gênica. "Isquemia fria", quando aplicada à coleta e preservação de tecidos para pesquisa, refere-se ao período transcorrido desde a retirada do órgão do corpo e coleta da amostra, até o momento do seu congelamento em nitrogênio líquido. O objetivo geral deste trabalho foi avaliar o impacto do tempo de isquemia fria na expressão gênica global pela técnica de microarray em um modelo animal. Avaliamos 3 órgãos (pulmão, fígado e rim) de 52 camundongos (Mus musculus C57Bl/6), gerando 312 tecidos submetidos a diferentes tempos de isquemia (zero ou referência, 15, 30, 45 e 60 minutos). A expressão gênica global foi avaliada na plataforma SurePrint G3 Mouse GE 8x60K Microarray, que cobre o genoma completo do camundongo. Como resultado deste trabalho, os RNA totais extraídos tiveram alta qualidade (RIN médio de 9,4) e observamos alterações em genes que podem ser atribuídas ao processo isquêmico per se (p<0.05 e fold-change |2|). Alguns desses genes são conhecidamente relacionados ao câncer: fatores de transcrição (Fos, Hif3A), oncogenes (Ret, Srsf3), supressores tumorais (Btg1, Hnf1a), genes envolvidos no reparo do DNA, diferenciação e atividades de quinase. Esses genes devem ser olhados com cautela nas assinaturas genômicas para um desempenho analítico mais confiável. Foram encontradas variações de expressão gênica relacionadas a processos de controle de íons intracelulares e controle do pH. Evidenciou-se a importância da criopreservação imediata do tecido, ou, pelo menos, o mais rápido possível após a coleta, visando minimizar os efeitos de variação da expressão gênica decorrentes da isquemia (AU)

Gene expression profile has been moved from basic research to clinical practice, and it is increasingly being used as a tool in the classification of molecular subtypes in cancer. However, caution should be exercised when interpreting gene signatures, as sample handling and preservation methods may affect gene expression. "Cold ischemia", when applied to tissue collection and preservation for research, refers to the period from organ removal from the body and sample collection until it is frozen in liquid nitrogen. The general objective of this work was to evaluate the impact of cold ischemia time on global gene expression by microarray technique in an animal model. We evaluated 3 organs (lung, liver and kidney) from 52 mice (Mus musculus C57Bl / 6), generating 312 tissues submitted to different ischemia times (zero or reference, 15, 30, 45 and 60 minutes). Global gene expression was evaluated on the SurePrint G3 Mouse GE 8x60K Microarray platform that covers the complete mouse genome. As a result of this work, the extracted total RNAs had high quality (mean RIN of 9.4) and we evidenced changes in genes that can be attributed to the ischemic process per se (p <0.05 and fold-change | 2 |). Some of these genes are known to be related to cancer: transcription factors (Fos, Hif3A), oncogenes (Ret, Srsf3), tumor suppressors (Btg1, Hnf1a), genes involved in DNA repair, differentiation and kinase activities. These genes should be viewed with caution in genomic signatures for more reliable analytical performance. Gene expression variations related to intracellular ion control and pH control processes were observed. The importance of immediate tissue cryopreservation, or at least as soon as possible after collection, was evidenced in order to minimize the effects of gene expression variation resulting from ischemia (AU)

Potencial do treinamento físico aeróbio para minimizar os efeitos da deficiência de leptina em um modelo experimental de camundongos fêmeas / Potential of aerobic physicaltrainingto minimize the effects of leptin deficiency in an experimental model of female mice

O treinamento físico aeróbio (TFA) tem sido cada vez mais recomendado para a prevenção e tratamento de comorbidades, que podem ter em comum a resistência periférica à insulina (RI), como o diabetes tipo 2 (DM2) ea obesidade. Caracterizada pelo acúmulo excessivo de tecido adiposo, a obesidade também implica a disfunção endócrina desse tecido. Leptina e adiponectina são hormônios secretados pelos adipócitos que desempenham importante função no metabolismo energético, cujo desequilíbrio está fortemente relacionado à obesidade e à RI. Fisiologicamente, mulheres apresentam maiores níveis de leptina e adiponectina comparados aos de homens. Contudo, em condições como a obesidade e/ou DM2 esses níveis diminuem, deixando o organismo de fêmeas sem os efeitos protetores dessas adipocinas. Assim, o presente estudo teve como objetivo investigar os efeitos do TFA sobre as características morfofuncionais de TAB e pâncreas de camundongos fêmeas com deficiência de leptina. Para isso, camundongos fêmeas com oitosemanas de idade C57BL/J6 selvagem (C57) ou com deficiência de leptina ob/ob (Lepob) foram separadas nos grupos sedentárias (S) e treinadas (T): C57S (n=6), C57T (n=6), LepobS (n=5) e LepobT (n=8). O TFA foi realizadodurante oito semanas, com corrida a 60% da capacidade máxima, 1h/dia, 5x/semana. Água e ração foram administradas ad libitum. Os procedimentos foram aprovados pelo CEUA da EACH-USP (#001/2017). O acompanhamento do peso corporal e consumo de ração foi realizado semanalmente. Na 7ª semana de protocolo foram realizados os testesde tolerância àglicose (TTG) e à insulina (TTI). Ao final do protocolode treinamento foram avaliados parâmetros metabólicos de repouso e de esforço através da calorimetria indireta. A eutanásia dos animais foi realizada cominjeção intraperitoneal de anestésico e, em seguida, foram coletados os tecidos adiposos branco (TAB) subcutâneo e retroperitoneal e a porção esplênica do pâncreas, utilizados, posteriormente, para análises morfológicas. A determinação de adiponectinasérica foi realizada através de kit ELISA. Os resultados foram analisados por ANOVA de duas vias mais o teste post-hoc de Bonferroni. O protocolo de TFA não foi eficaz em reduzir a adiposidade e hiperfagia dos animais LepobS e LepobT, contudo o grupo LepobT apresentou tamanho reduzido de adipócitos doTAB-SC comparado ao grupo LepobS.O TFA não afetouo metabolismo glicêmico dos animais. Os parâmetros metabólicos derepouso não apresentaram alteração, contudo, noteste de esforço físico máximo, o grupo LepobT apresentou maiores tempo em teste até a exaustão e iVO2 comparado ao grupo LepobS. Por fim, embora o TFA não tenha aumentadoa secreção de adiponectina, o que poderia regular positivamente o metabolismo glicêmico de camundongos deficientes em leptina, melhorou a condição metabólica desses animais e reduziu a hipertrofia dos adipócitos do TAB-SC

Aerobic physical training (APT) has become an important strategy for the prevention and treatment of comorbidities, which may have in common the peripheral resistance to insulin(RI), such as type 2 diabetes and obesity. Characterized by the excessive accumulation of adipose tissue, obesity also implies endocrine dysfunction of this tissue.Leptin and adiponectin are hormones secreted by adipocytes that play an important role in energy metabolism, whose imbalance is strongly related to obesity and RI. Physiologically, women have higher levels of leptin and adiponectin compared to men.However,in conditions such as obesity and/or type 2 diabetes these levels decrease, leaving the body of females without the protective effects of these adipokines.Thus, the present study aimed to investigate the effects of APTon the morphofunctional characteristics of white adipose tissue (WAT)and pancreas in leptin-deficientfemale mice. For this, 8-week-old wild C57BL/J6 (C57) or leptin-deficient ob/ob (Lepob) female mice were separated into the groups sedentary (S) and trained (T): C57S (n = 6), C57T (n = 6), LepobS (n = 5) and LepobT (n = 8). Mice were housed in a temperature-controlled (22 ± 2°C) and 12-h light/12-h dark cycle, with free access to tap water and food ad libitum. The APT was performed for 1 h/day at 60% of maximal velocity achieved in the running capacity test, five times per week for eight weeks. The procedures were performed in accordance with the guidelines of the Brazilian College for Animal Experimentation and were approved by the Ethics Committee of the School of Arts, Sciences and Humanities of University of Sao Paulo (Process number001/2017). Body weight and feed intake were evaluated weekly. In the 7th week of protocol, the glucose and insulin tolerance tests (GTT and ITT) were performed. At the end of the training protocol, metabolic parameters of resting and maximal exertion were evaluated through indirect calorimetry. The euthanasia of the animals was performed by intraperitoneal injection of anaesthetic and thenthe subcutaneous and retroperitoneal WAT and the splenic portion of the pancreas were collected, and subsequentlyused for morphological analysis. Serum adiponectin quantification was performed by ELISA kit. The results were analyzed by two-way ANOVA plus the Bonferroni post-hoc test. The APT protocol was not effective in reducing the adiposity and hyperphagia of the animals LepobS and LepobT, however the LepobT group presented a reduced size of WAT-SC adipocytes compared to the LepobS group. Also, APT did not affectthe glycemic metabolism of theseanimals. Although the resting metabolic parameters were not different, in the maximal physical exercise test, the LepobT group had longer time to exhaustion test and iVO2 compared to the LepobS group.Finally, although APTdid not increase adiponectin plasma concentration, which could positively regulate the glycemic metabolism of leptin-deficient mice, it improved the metabolic condition of these animals and reduced the adipocyte hypertrophy of WAT-SC

Three-dimensional assessment of enamel and dentine in mouse molar teeth during masseter muscle hypofunction / Evaluación tridimensional del esmalte y la dentina de dientes molares de ratones durante la hipofunción del músculo masetero

Background: Mouse molar is a widely used model for teeth development. However, the effect of masticatory function on enamel and dentine in adult individuals remains poorly understood. As reported, the unilateral masseter hypofunction induced by botulinum toxin type A (BoNTA) resulted in mandibular bone damage and signs of unilateral chewing in adult mice. Objective: We aimed to assess the amount of enamel and dentine in the first molar (M1) during the unilateral masseter hypofunction in mice, using high-resolution X-ray microtomography (µCT) as threedimensional approach. Materials and methods: Mandibles of adult BALB/c mice, located either in a Control-group (without intervention) or a BoNTA-group, were ex-vivo scanned using µCT. Treated individuals received each one BoNTA intervention in the right masseter, and saline solution in the left masseter (intra-individual control). Enamel and dentine from M1 were segmented, and volume, thickness and mesial root length were quantified. Results: Enamel volume from treated side resulted unchanged after 2 weeks of unilateral masseter hypofunction. No differences for enamel volume were found between both sides of control individuals, and between these and samples from hypofunctional side in BoNTA-group. Enamel volume from saline-injected side was reduced when compared with experimental side (p<0,01). No differences in dentine volume, thickness of enamel and dentine, and mesial root length were found for any group. Conclusion: The amount of enamel in hypofunctional molars remains unaffected after unilateral BoNTA intervention in the masseter, but contralateral side showed reduced enamel volume. Therefore, increased functional wearing during unilateral chewing after BoNTA intervention should be considered.

Introducción: El molar de ratón es utilizado como modelo de estudio en el desarrollo dental. El efecto de la función masticatoriasobre el tejido dental en individuos adultos aún se comprende. En ratones adultos, la hipofunción unilateral del masetero inducida por toxina botulínica tipo A (BoNTA) resultó en daño óseo mandibular y signos de masticación unilateral. Objetivo: Evaluamos la cantidad de esmalte y dentina en el primer molar (M1) durante la hipofunción unilateral del músculo masetero en ratones mediante análisis con microtomografía (µCT). Materiales y métodos: Las mandíbulas de ratones BALB/c adultos, del grupo Control (sin intervención) o el grupo BoNTA, fueron escaneadas ex-vivo con µCT. Los individuos tratados se inyectaron con BoNTA en el masetero derecho y con solución salina en el masetero izquierdo (control intra-individuo). El volumen y grosor de esmalte y dentina del M1, y la longitud de la raíz mesial fueron medidos. Resultados: No hubo cambios en el volumen del esmalte del lado tratado con BoNTA y en ambos lados del grupo Control, 2 semanas post-intervención. El esmalte del lado control intra-individuo se redujo comparado con el lado experimental (p< 0,01). No hubo cambios en el volumen de dentina, el grosor de esmalte y dentina o en longitud de la raíz mesial de ambos grupos. Conclusión: La cantidad de esmalte en los molares hipofuncionales no se afecta después de la inyección unilateral de BoNTA en masetero, pero si se reduce en el lado contralateral. Por lo tanto, se debe considerar un desgaste dental asimétrico durante esta intervención.

Protección de la Spirulina maxima sobre la citotoxicidad de la hidroxiurea en células embrionarias de ratón / Protection of Spirulina maxima on cytotoxicity of hydroxyurea in mouse embryonic cells / Proteção de Spirulina maxima em citotoxicidade de hidroxiureia em células embrionárias de camundongo

La Spirulina maxima (SP) tiene efectos farmacológicos protectores por su contenido de ficobiliproteínas que están relacionados con su actividad antioxidante. La hidroxiurea (HU) es un fármaco antineoplásico, citotóxico y teratógeno que implica la inducción del estrés oxidativo. El objetivo de este trabajo fue determinar si la SP y su extracto acuoso de proteína (SPE) protegen contra el efecto citotóxico de HU en cultivos celulares primarios a partir de embriones de ratón de once días. Los efectos de SP, SPE e HU sobre la viabilidad celular se determinaron por el ensayo de fluorescencia de resazurina en cultivos celulares de embriones completos de ratones de once días, de encéfalo y de brotes de extremidades anteriores. Se demostró que ni SP ni su extracto provocaron efectos citotóxicos en ninguna concentración ensayada, por lo que se aumentaba la viabilidad celular. Se encontró que las células expuestas a HU de embriones completos y encéfalo mostraron mayor toxicidad que las células de los miembros anteriores. La SP y el SPE protegieron contra la citotoxicidad de HU de una manera dependiente de la concentración hasta 48 h después de la exposición al fármaco. Este efecto podría ser adecuado para prevenir la muerte celular que deriva en un proceso teratogénico, atribuido a sus propiedades antioxidantes.

Spirulina maxima (SP) has protective pharmacological effects that are related to the antioxidant activity due to its phycobiliprotein content. Hydroxyurea (HU) is an antineoplastic, cytotoxic and teratogenic drug, which involves the induction of oxidative stress. The aim of this study was to determine whether SP and its aqueous protein extract (SPE) protect against the cytotoxic effect of HU in primary cell cultures from mouse embryos. The effects of SP, SPE, and HU on cell viability were determined by resazurin fluorescence assay in whole embryo cell cultures, encephalon, and eleven-day-old forehead bud outbreaks. It was shown that neither SP nor its extract caused cytotoxic effects at any concentration tested, increasing cell viability. It was found that cells exposed to HU of whole embryos and encephalon showed higher toxicity than cells of the previous limbs. SP and SPE protected HU cytotoxicity in a concentration-dependent manner up to 48 hours after exposure to the drug. This effect could be adequate to prevent cell death resulting in a teratogenic process attributed to its antioxidant properties.

Spirulina maxima (SP) tem efeitos farmacológicos protetores devido a seu conteúdo de ficobiliproteínas, que estão relacionadas com sua atividade antioxidante. A hidroxiureia (HU) é uma droga antineoplásica, citotóxica e teratogênica, que envolve a indução do estresse oxidativo. O objetivo deste estudo foi determinar se a SP e seu extrato aquoso de proteína (SPE) protegem contra o efeito citotóxico da HU em culturas celulares primárias a partir de embriões de camundongo de onze dias. Os efeitos de SP, SPE e HU na viabilidade celular foram determinados pelo ensaio de fluorescência de resazurina em culturas celulares de embriões inteiros de camundongos de onze dias, de encéfalo e de surtos de extremidades anteriores. Demonstrou-se que nem a SP nem seu extrato causaram efeitos citotóxicos em qualquer concentração testada, aumentando a viabilidade celular. Verificou-se que as células expostas à HU de embriões completos e encéfalo mostraram maior toxicidade do que as células dos membros anteriores. SP e SPE protegem contra a citotoxicidade de HU de forma dependente da concentração até 48 h após a exposição ao medicamento. Esse efeito poderia ser adequado para prevenir a morte celular, que resulta em um processo teratogênico atribuído a suas propriedades antioxidantes.

Comparison between red wine and isolated trans-resveratrol in the prevention and regression of atherosclerosis in LDLr (-/-) mice / Comparação entre o vinho tinto e o trans-resveratrol isolado na prevenção e regressão da aterosclerose em camundongos LDLr (-/-)

Moderate consumption of red wine has been widely associated with reduced cardiovascular risk, mainly due to its composition in phenolic compounds with antioxidant activity, such as trans-resveratrol. Our aim was to compare the effect of red wine vs trans-resveratrol consumption on the prevention and regression of atherosclerosis in LDLr (-/-) mice. This study consisted of two protocols: "PREVENTION" (PREV) and "REGRESSION" (REGR). Both protocols included four groups: red wine (WINE), dealcoholized red wine (EXT), trans-resveratrol (RESV), and control (CONT). In PREV protocol, animals received a normal diet for 8 weeks and then switched to an atherogenic diet for the following 8 weeks, while the opposite was performed during REGR protocol. Animals that received atherogenic diet after an initial period on a normal diet (PREV) gained more body weight (39.25 ± 2.30%) than the opposite (29.27 ± 1.91%, p=0.0013), suggesting an interaction between age and weight gain. Trans-resveratrol showed the highest hypocholesterolemic effect in PREV protocol, reducing total cholesterol, LDL-C and VLDL-C, but also HDL-C. The supplementation with trans-resveratrol and dealcoholized red wine changed the fatty acids profile in the liver in both protocols, leading to an increase of MDA concentrations and SOD activity in PREV protocol. All three forms of supplementation altered biomarkers of oxidative stress and lipidemia but presented no effect on the prevention or regression of fatty streaks. These results suggest that the cardiovascular protection associated with the "French Paradox" may be a result of synergistic effects between wine and the Mediterranean diet

O consumo moderado de vinho tinto tem sido amplamente associado à redução do risco cardiovascular, principalmente devido à sua composição em compostos fenólicos com atividade antioxidante, como o trans-resveratrol. Nosso objetivo foi o de comparar o efeito do consumo de vinho tinto vs trans-resveratrol na prevenção e regressão da aterosclerose em camundongos LDLr (-/-). Este estudo consistiu em dois protocolos: "PREVENÇÃO" (PREV) e "REGRESSÃO" (REGR). Ambos os protocolos incluíram quatro grupos: vinho tinto (WINE), vinho tinto sem álcool (EXT), transresveratrol (RESV) e controle (CONT). No protocolo PREV, os animais receberam uma dieta normal durante 8 semanas e trocaram para uma dieta aterogênica durante as 8 semanas seguintes, enquanto o oposto foi realizado no protocolo REGR. Os animais que receberam dieta aterogênica após um período inicial em dieta normal (PREV) ganharam mais peso corporal (39.25 ± 2.30%) do que o oposto (29.27 ± 1.91%, p=0.0013), sugerindo uma interação entre idade e ganho de peso. O trans-resveratrol mostrou efeito hipocolesterolêmico mais elevado no protocolo PREV, reduzindo colesterol total, LDL-C e VLDL-C, mas também o HDL-C. A suplementação com trans-resveratrol e vinho tinto sem álcool alterou o perfil de ácidos graxos do fígado em ambos os protocolos, levando a um aumento das concentrações de MDA e da atividade da SOD no protocolo PREV. Todas as três formas de suplementação alteraram biomarcadores do estresse oxidativo e lipidemia, mas não apresentaram efeito sobre a prevenção ou regressão de estrias gordurosas. Esses resultados sugerem que a proteção cardiovascular associada ao "Paradoxo francês" pode ser resultado de efeitos sinérgicos entre o vinho e a dieta mediterrânea

Assessment of electrochemotherapy effects on the development of Ehrlich solid tumor in swiss mice using a novel electroporator device / Avaliação dos efeitos da eletroquimioterapia sobre o desenvolvimento do tumor sólido de Ehrlich em camundongos Swiss utilizando um novo eletroporador

Electrochemotherapy is a local anticancer treatment in which non-permeant chemotherapeutic drugs are associated with electric pulses of well-established parameters. The electric pulses cause pores to open on the plasma membrane and facilitate drug transport, enhancing cytotoxicity and reducing side effects. Assessment of electrochemotherapy effects on Ehrlich solid tumor development in this work aims to evaluate in vivo usage of the electroporator device developed by the Department of Electrical Engineering of Engineering School of UFMG. Therefore, 40 Swiss mice were inoculated with Ehrlich tumor cells, and developed the tumor in solid form. After 21 days, mice were subjected to specific treatment protocols (control, bleomycin, electric pulses and electrochemotherapy); 17 days later they were euthanized and the tumors collected for histopathology analysis. Electrochemotherapy induced discrete weight loss and an inflammatory response in the tumor, which was not seen on the other treatment groups. Bleomycin alone induced necrosis. Both groups showed lower cellular proliferation rates. From this study, it was concluded that the animals tolerated electrochemotherapy treatment under anesthesia and the electroporator device developed by the Engineering School of UFMG was adequate when used in an electrochemotherapy protocol.(AU)

Eletroquimioterapia é uma modalidade de tratamento local contra o câncer em que a administração de quimioterápicos não penetrantes à membrana plasmática é associada à aplicação de pulsos elétricos com parâmetros bem estabelecidos, que abrem poros na membrana plasmática e facilitam a entrada desses fármacos nas células, aumentando sua citotoxicidade e reduzindo efeitos colaterais. A avaliação dos efeitos da eletroquimioterapia sobre o desenvolvimento do tumor sólido de Ehrlich em camundongos Swiss neste trabalho teve como objetivo testar o uso in vivo do aparelho eletroporador desenvolvido pelo Departamento de Engenharia Elétrica da Escola de Engenharia da UFMG. Para tanto, foram utilizados 40 camundongos fêmeas da linhagem Swiss, nos quais foram inoculadas células de tumor de Ehrlich, para o desenvolvimento do tumor na forma sólida. Após 21 dias, os camundongos foram submetidos ao protocolo de tratamento específico (controle, bleomicina, pulsos elétricos e eletroquimioterapia); 17 dias depois foram eutanasiados e seus tumores coletados para análise histopatológica e imuno-histoquímica. A eletroquimioterapia induziu perda de peso discreta e uma resposta inflamatória no tumor que não foi observada nos outros grupos. O grupo bleomicina apresentou maior porcentagem de necrose. Ambos os grupos apresentaram menor índice de proliferação celular. Com este estudo, pode-se concluir que o tratamento sob anestesia foi bem tolerado pelos animais e que o aparelho eletroporador desenvolvido pela Escola de Engenharia da UFMG é adequado para utilização em um protocolo de eletroquimioterapia.(AU)

Type C waterborne botulism outbreaks in buffaloes (Bubalus bubalis) in the Amazon region / Surtos de botulismo hídrico tipo C em búfalos (Bubalus bubalis) na região amazônica

Botulism is a poisoning caused by botulinum neurotoxins (BoNTs). BoNTs serotypes C and D are involved in botulism outbreaks in cattle in several countries. Despite the high number of buffaloes worldwide, the real impact of botulism in buffaloes is not known, because it is not a notifiable disease in Brazil and only few studies have evaluated the occurrence of the disease in buffaloes. Those studies did not conduct diagnostic tests to confirm the presence of BoNTs. The objective of the present study was to describe three outbreaks of botulism in buffaloes in the Brazilian Amazon region considering epidemiological and clinical data as well as laboratory diagnosis to confirm the presence of BoNTs. The results of the bioassay were negative in the tissues and in feed samples, but positive for BoNT C in water samples. Confirmation of the occurrence of botulism in buffaloes allows the implementation of preventive strategies in susceptible herds. Waterborne botulism in buffaloes is prevented by ensuring the constant circulation of water collections and restricting the presence of dead animals and bones in order to prevent the accumulation of organic matter and the development of anaerobic conditions, which might favor the replication of Clostridium botulinum. Another measure that can be adopted is the shading of the pasture, in order to maintain the thermal comfort for the buffaloes and to avoid the excess of permanence of them in the water pools.(AU)

Botulismo é uma intoxicação causada por neurotoxinas botulínicas (BoNTs). Os sorotipos C e D de BoNTs estão envolvidos em surtos de botulismo em bovídeos em vários países. Apesar do elevado número de búfalos em todo o mundo, o real impacto do botulismo em búfalos não é conhecido; pois não é uma doença de notificação obrigatória no Brasil e poucos estudos avaliaram a incidência desta doença em búfalos. Além disso, estes estudos não realizaram testes diagnósticos para confirmar a presença de BoNTs. O objetivo do presente estudo foi descrever três surtos de botulismo em búfalos na região amazônica brasileira, considerando dados epidemiológicos e clínicos, bem como o diagnóstico laboratorial para confirmar a presença de BoNTs. Os resultados do bioensaio em camundongos foram negativos em todos os tecidos e nas amostras de alimentos testados; no entanto foram positivos para BoNT C nas amostras de água. A confirmação da ocorrência de botulismo em búfalos permite a implementação de estratégias preventivas nos rebanhos. O botulismo hídrico nos búfalos pode ser prevenido assegurando-se que coleções de água fossem mantidas limpas, sem a presença de animais mortos e ossadas no seu interior e não permitindo o acúmulo de matéria orgânica e condições de anaerobiose favoráveis à multiplicação de Clostridium. botulinum. Outra medida que pode ser adotada é o sombreamento das pastagens, a fim de manter o conforto térmico dos búfalos e assim evitar o excesso de sua permanência dentro das fontes de água.(AU)

Videocâmeras em biotérios de experimentação: importante ferramenta no controle da contaminação ambiental na microbiota de camundongos / Interference of environmental contamination in microbiota of mice in experimental facilities

O objetivo do presente estudo foi verificar a influência da contaminação ambiental na microbiota dos animais utilizados em experimentação, usando-se videocâmera como ferramenta de controle, a partir da comparação de dois biotérios de experimentação, sendo um protegido com presença de videocâmeras (A) e o outro não (B), quanto ao padrão microbiológico dos camundongos. Para os testes bacteriológicos, foram utilizadas amostras de 222 animais do biotério A e 236 do biotério B; para os testes virológicos, 119 do biotério A e 236 do biotério B; já para os exames parasitológicos, 158 do biotério A e 316 do biotério B. Os dados foram submetidos à análise descritiva e ao teste do Qui-quadrado. Verificou-se uma maior ocorrência de microrganismos e de parasitas no biotério não protegido pelas videocâmeras. Klebsiella pneumoniae, Pasteurella sp. e Pseudomonas sp. foram encontradas nos animais de ambos os biotérios, ao passo que vírus e parasitos só foram detectados nos animais no biotério não protegido. Dentre os vírus, nos animais infectados, o de maior ocorrência foi o Vírus da Hepatite de Camundongos (MHV) e, dentre os parasitos, o de maior ocorrência foi Syphacia sp. Concluiu-se que o biotério protegido foi capaz de garantir padrões microbiológicos mais adequados para a experimentação animal, que as videocâmeras são importantes ferramentas de controle e que a prática da biossegurança deve ser constante nas instituições de pesquisa.

The aim of this study was to investigate the influence of environmental contamination in the microbiota of animals used in experimentation, from the comparison of two experimental animal facilities, one protected with video cameras (A) and one not protected with video cameras (B). Bacteria, viruses and endoparasites have been investigated in both facilities, according to the methodology proposed for each agent. For the bacteriological tests, a sample of 222 animals in facility A and 236 from facility B was used; for the virological tests, 119 from facility A and 236 from facility B; and for parasitological examination, 158 from facility A and 316 from facility B. The data were submitted to descriptive analysis and to the Chi-square test. The results indicated a higher occurrence of microrganisms and parasites in animals from the unprotected facility. Klebsiella pneumoniae, Pasteurella sp. and Pseudomonas sp. could be detected in the animals from both facilities, whereas viruses and parasites were found only in the unprotected housed mice. Among the viruses in infected animals the most common was the occurrence of Mice Hepatitis Virus (MHV) and among the parasites, the predominant was Syphacia sp. It was concluded that the protected facility was able to ensure microbiological standards more suitable for animal testing, video cameras are important control tools, and the practice of biosecurity must be constant in research institutions.

Effects of different extracts of the mushroom Agaricus blazei Murill on the hematologic profile of mice with Ehrlich tumor / Efeitos de diferentes extratos do cogumelo Agaricus blazei Murill sobre o perfil hematológico de camundongos com tumor de Ehrlich

The aim of this study was to investigate the effect of the mushroom Agaricus blazeii Murril (ABM) extracts on the hematological profile of Swiss mice bearing an Ehrlich solid tumor. Three fractions (total extract, polysaccharides, and supernatant) of ABM extracts obtained by four methods (ultrasonic or water bath, at pH 4 or pH 7) were administered to mice over 21 days. Polysaccharide solutions were analyzed by gas and liquid chromatography that showed both mannose and glucose concentrations. The method of extraction influenced the degree of glucose polymerization and the mannose/glucose relationship. The treatment with ABM supernatant at pH 7 and water bath was associated with reduced concentrations of leukocytes and lymphocytes and altered the percentage of CD4+ and CD8+ lymphocytes in Ehrlich tumor-bearing mice. The treatment with the ABM extract in water bath and ultrasound at pH 4 resulted in lower lymphocyte counts, regardless of tumor presence, and greater granulocyte values in mice with Ehrlich tumor than in controls. We concluded that different fractions and methods of extraction of A. blazei produced differing blood profiles in mice inoculated with the Ehrlich tumor.

O objetivo deste estudo foi investigar o efeito de diferentes extratos do cogumelo Agaricus blazeii Murril (ABM) sobre o perfil hematológico de camundongos Swiss portadores de tumor de Ehrlich sólido. Três frações (extrato total, polissacarídeos e sobrenadante) dos extratos de ABM foram obtidas por quatro métodos (sonificador, banho-maria, em pH 4 ou pH 7) e administradas para camundongos durante 21 dias. Soluções de polissacarídeos foram analisadas por cromatografia gasosa e líquida, que mostraram concentrações de glucose e manose. O método de extração influenciou o grau de polimerização da glicose e a relação manose/glucose. O tratamento com o sobrenadante de ABM (em pH 7 e banho-maria) estava associado com reduzidas concentrações de leucócitos e linfócitos, além de alterar a porcentagem de linfócitos CD4+ e CD8+ em camundongos portadores de tumor sólido de Ehrlich. O tratamento com extratos de ABM, obtidos tanto em banho-maria como no sonificador em pH 4, resultou nas mais baixas contagens de linfócitos, independentemente da presença do tumor, e nos maiores valores de granulócitos em camundongos com tumor de Ehrlich. Conclui-se que os diferentes métodos de extração com as respectivas frações de A. blazei são capazes de intereferir no perfil hematológico de camundongos com tumor sólido de Ehrlich.