Transferrina como marcador de maturação pulmonar em cordeiros nascidos a termo ou prematuros / Transferrin as a marker of pulmonary maturation in lambs born at term or premature

O objetivo do estudo foi procurar proteínas de fase aguda que possam indicar sinais de maturação no neonato prematuro, por meio da quantificação sérica delas. Identificou-se a imunoglobulina A, a ceruloplasmina, a haptoglobina, a glicoproteína ácida, a transferrina, a albumina e as imunoglobulinas G de cadeias leve e pesada, pela comparação do perfil dos proteinogramas de cordeiros nascidos a termo com os prematuros submetidos a diferentes protocolos terapêuticos, a fim de estimular a atividade respiratória. Constituíram-se seis grupos: PN (n= 9): nascidos de parto normal; CN (n= 7): nascidos de cesariana em tempo normal de gestação; CP (n= 6): nascidos de cesariana prematura sem nenhum tipo de tratamento; DEX (n= 9): prematuros cujas mães receberam dexametasona pré-parto; SURF (n= 6): prematuros tratados com surfactante; e DEXSURF (n= 6): prematuros tratados com surfactante cujas mães receberam dexametasona pré-parto. As avaliações foram realizadas nos momentos imediatamente após o nascimento (M0), após 24 (M24) e após 48 horas (M48). As amostras foram processadas por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). A albumina, as imunoglobulinas e a proteína total dos cordeiros tiveram elevação após a ingestão de colostro. Maiores valores séricos de transferrina são referentes a maior período gestacional, podendo essa proteína ser utilizada como marcador de maturação neonatal.(AU)

The aim of this study was to search for acute phase proteins that could indicate signs of maturation in the premature neonate by quantifying them in serum. Immunoglobulin A, ceruloplasmin, haptoglobin, acid glycoprotein, tranferrin, albumin, light and heavy chain immunoglobulin G were quantified, comparing the profile of proteinograms from term to preterm lambs submitted to different protocols that stimulate respiratory activity. Six groups were used: PN (n= 9): born from normal birth; CN (n= 7): born from caesarean section at normal time of gestation; CP (n= 6): born from premature cesarean without any type of treatment; DEX (n= 9) preterm whose mothers received prepartum dexamethasone; SURF (n= 6) preterm treated with surfactant; DEXSURF (n= 6): preterm treated with surfactant whose mothers received prepartum dexamethasone. The evaluations were performed immediately after birth (M 0), after 24 and 48 hours (M 24 and M 48). Samples were processed with sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Albumin, immunoglobulins, and serum total protein of the lambs were elevated, after colostrum ingestion. Higher serum transferrin values refer to a longer gestational period, and this protein may be used as a marker of neonatal maturation.(AU)

Transferrina como marcador de maturação pulmonar em cordeiros nascidos a termo ou prematuros / Transferrin as a marker of pulmonary maturation in lambs born at term or premature

O objetivo do estudo foi procurar proteínas de fase aguda que possam indicar sinais de maturação no neonato prematuro, por meio da quantificação sérica delas. Identificou-se a imunoglobulina A, a ceruloplasmina, a haptoglobina, a glicoproteína ácida, a transferrina, a albumina e as imunoglobulinas G de cadeias leve e pesada, pela comparação do perfil dos proteinogramas de cordeiros nascidos a termo com os prematuros submetidos a diferentes protocolos terapêuticos, a fim de estimular a atividade respiratória. Constituíram-se seis grupos: PN (n= 9): nascidos de parto normal; CN (n= 7): nascidos de cesariana em tempo normal de gestação; CP (n= 6): nascidos de cesariana prematura sem nenhum tipo de tratamento; DEX (n= 9): prematuros cujas mães receberam dexametasona pré-parto; SURF (n= 6): prematuros tratados com surfactante; e DEXSURF (n= 6): prematuros tratados com surfactante cujas mães receberam dexametasona pré-parto. As avaliações foram realizadas nos momentos imediatamente após o nascimento (M0), após 24 (M24) e após 48 horas (M48). As amostras foram processadas por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). A albumina, as imunoglobulinas e a proteína total dos cordeiros tiveram elevação após a ingestão de colostro. Maiores valores séricos de transferrina são referentes a maior período gestacional, podendo essa proteína ser utilizada como marcador de maturação neonatal.(AU)

The aim of this study was to search for acute phase proteins that could indicate signs of maturation in the premature neonate by quantifying them in serum. Immunoglobulin A, ceruloplasmin, haptoglobin, acid glycoprotein, tranferrin, albumin, light and heavy chain immunoglobulin G were quantified, comparing the profile of proteinograms from term to preterm lambs submitted to different protocols that stimulate respiratory activity. Six groups were used: PN (n= 9): born from normal birth; CN (n= 7): born from caesarean section at normal time of gestation; CP (n= 6): born from premature cesarean without any type of treatment; DEX (n= 9) preterm whose mothers received prepartum dexamethasone; SURF (n= 6) preterm treated with surfactant; DEXSURF (n= 6): preterm treated with surfactant whose mothers received prepartum dexamethasone. The evaluations were performed immediately after birth (M 0), after 24 and 48 hours (M 24 and M 48). Samples were processed with sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Albumin, immunoglobulins, and serum total protein of the lambs were elevated, after colostrum ingestion. Higher serum transferrin values refer to a longer gestational period, and this protein may be used as a marker of neonatal maturation.(AU)

Capillary electrophoresis reveals polyamine metabolism modulation in Leishmania (Leishmania) amazonensis wild-type and arginase-knockout mutants under arginine starvation.

l-Arginine is an essential amino acid in Leishmania (Leishmania) amazonensis metabolism. A key enzyme for parasite l-arginine metabolism is arginase (ARG) that uses arginine to produce urea and ornithine, a precursor of polyamine pathway guaranteeing parasite replication in both insect and mammal hosts. There is an alternative pathway to produce ornithine via l-proline and glutamate, but this mechanism is not described in Leishmania. In the mammal host, two enzymes can use l-arginine as substrate, the host ARG and the induced nitric oxide synthase that produces nitric oxide. The competition between induced nitric oxide synthase and both parasite and host ARG can favor the success of the infection or its control. Here, we established the metabolomics profile of the polyamine pathway of wild type (WT) L. (L.) amazonensis, submitted or not to l-arginine starvation, and compared to the ARG-knockout mutant (arg- ). Our results indicated that arginine starvation induces a decrease in arginine, ornithine, and putrescine, but we could not detect the significative level changes of spermidine, spermine, or agmatine. However, the absence of ARG on the arg- induced an increase of arginine and citrulline levels, but decreased the levels of ornithine and putrescine. Similarly to the WT arginine-starved parasites, the arg- parasites presented lower levels of proline when compared to the WT ones. This could be indicative of an alternative pathway to surpass the enzyme or its substrate absence.

Perfil proteico do líquido folicular coletado de ovários em diferentes fases do ciclo estral de bovinos / Proteic profile of follicular fluid from ovaries in different phases of bovine estrous cycle

O microambiente do gameta feminino é o líquido folicular e, portanto, as proteínas ali presentes devem interferir na qualidade do oócito. Este experimento foi delineado com o objetivo de verificar o perfil proteico do líquido folicular de folículos em diferentes fases do ciclo estral de bovinos. Para tanto, os líquidos foliculares provenientes de ovários de vacas de abatedouro foram alocados em 5 diferentes fases do ciclo estral, levando em conta a presença ou ausência do corpo lúteo (CL) e sua caracterização morfológica. “Pools” de líquido folicular foram coletados de folículos de 2 a 7 mm de ovários em 5 diferentes fases do ciclo estral (1=CL inicial, hemorrágico; 2=CL em desenvolvimento; 3=CL maduro; 4=CL em regressão e 5=ausência de CL). O perfil proteico foi avaliado por eletroforese em gel de poliacrilamida e determinado em porcentagens nas amostras de cada fase. Os polipeptídeos de 35, 32, 30 e 18 KDa variaram consideravelmente nas amostras. O polipeptídeo de mesmo peso molecular que o IGFBP-2 está mais presente nas amostras de líquido folicular ao final do ciclo estral. Maior número de polipeptídeos foi observado em folículos antrais pequenos de ovários em que o CL está em regressão.(AU)

The female gametes microenvironment is the follicular fluid. The proteins in the follicular fluid must interfere in the oocyte quality. The objective of this study was to verify the protein profile in the follicular fluid of different phases of bovine estrous cycle. The follicular fluid was taken from follicles of bovine ovaries obtained at slaughterhouse. The ovaries were classified into five different phases of estrous cycle, according to presence or absence of corpus luteum (CL) and the morphologic characteristics. Pools of follicular fluid were collected from follicles ranging from 2 to 7mm in diameter from ovaries in five different phases of estrous cycle (1=initial CL, hemorrhagic; 2= developing CL; 3= mature CL; 4=regressing CL and 5=absence CL). The protein profile was evaluated by poliacrilamide eletrophoresis and determined by percentages of samples from each phase. The polypeptides with molecular weigh of 35, 32, 30 and 18 KDa changed considerably in samples from different phases of estrous cycle. The polypeptide with the same molecular weight of IGFBP-2 is more observed in samples from follicular fluid in the end of estrous cycle. The most polypeptides were observed in small follicles from ovaries with regressing CL.(AU)

Perfil proteico do líquido folicular coletado de ovários em diferentes fases do ciclo estral de bovinos / Proteic profile of follicular fluid from ovaries in different phases of bovine estrous cycle

O microambiente do gameta feminino é o líquido folicular e, portanto, as proteínas ali presentes devem interferir na qualidade do oócito. Este experimento foi delineado com o objetivo de verificar o perfil proteico do líquido folicular de folículos em diferentes fases do ciclo estral de bovinos. Para tanto, os líquidos foliculares provenientes de ovários de vacas de abatedouro foram alocados em 5 diferentes fases do ciclo estral, levando em conta a presença ou ausência do corpo lúteo (CL) e sua caracterização morfológica. “Pools” de líquido folicular foram coletados de folículos de 2 a 7 mm de ovários em 5 diferentes fases do ciclo estral (1=CL inicial, hemorrágico; 2=CL em desenvolvimento; 3=CL maduro; 4=CL em regressão e 5=ausência de CL). O perfil proteico foi avaliado por eletroforese em gel de poliacrilamida e determinado em porcentagens nas amostras de cada fase. Os polipeptídeos de 35, 32, 30 e 18 KDa variaram consideravelmente nas amostras. O polipeptídeo de mesmo peso molecular que o IGFBP-2 está mais presente nas amostras de líquido folicular ao final do ciclo estral. Maior número de polipeptídeos foi observado em folículos antrais pequenos de ovários em que o CL está em regressão.

The female gamete’s microenvironment is the follicular fluid. The proteins in the follicular fluid must interfere in the oocyte quality. The objective of this study was to verify the protein profile in the follicular fluid of different phases of bovine estrous cycle. The follicular fluid was taken from follicles of bovine ovaries obtained at slaughterhouse. The ovaries were classified into five different phases of estrous cycle, according to presence or absence of corpus luteum (CL) and the morphologic characteristics. Pools of follicular fluid were collected from follicles ranging from 2 to 7mm in diameter from ovaries in five different phases of estrous cycle (1=initial CL, hemorrhagic; 2= developing CL; 3= mature CL; 4=regressing CL and 5=absence CL). The protein profile was evaluated by poliacrilamide eletrophoresis and determined by percentages of samples from each phase. The polypeptides with molecular weigh of 35, 32, 30 and 18 KDa changed considerably in samples from different phases of estrous cycle. The polypeptide with the same molecular weight of IGFBP-2 is more observed in samples from follicular fluid in the end of estrous cycle. The most polypeptides were observed in small follicles from ovaries with regressing CL.

Contribution and perspectives of the impact of proteomics in study of placentas and embryonic and fetal membranes / Contribuição e perspectivas do impacto da proteômica em estudo de placentas e membranas embrionárias e fetais

Proteomic approaches have revolutionized the analysis of biological samples by allowing the identification of non-characterized protein expression and its role on protein interactions and post-translational modifications during embryonic development or as a consequence of pathological states. This new frontier of knowledge is, nowadays, an essential contribution to the elucidation of biological problems, by providing information that cannot be obtained by other target driven methods. This review highlights the new perspectives of proteomics studies based on bidimensional eletrophoresis (2D-PAGE) associated to mass spectrometry (MS) analytical methods of placenta, embryonic membranes and embryo evaluation, with emphasis on comparisons between normal and diseased tissues consequence of reproductive biotechnology manipulation.

Abordagens proteômicas revolucionaram a análise de amostras biológicas por permitir a identificação de padrões ainda não caracterizados de expressão de proteínas e/ou suas interações e modificações pós-traducionais em diferentes tecidos, como a placenta ou em embriões e fetos em diferentes estágios de desenvolvimento. Esta nova fronteira de conhecimento se constitui atualmente numa ferramenta fundamental para a elucidação de problemas biológicos, por fornecer informações que não podem ser obtidas por métodos mais focalizados, ou com alvos específicos. Essa revisão salienta as novas perspectivas geradas pela contribuição da proteômica baseada na eletroforese bidimensional (2D-PAGE) associada à espectrometria de massas (MS) para o estudo da placenta, das membranas embrionárias e do embrião, com ênfase nas comparações entre condições normais e aqueles provenientes de estados patológicos ou conseqüentes ao uso de biotecnologias reprodutivas.

Detecção de Leptospira pomona em sêmen bovino por eletroforese capilar fluorescente / Detection of Leptospira pomona in bovine semen by fluorescent capillary eletrophoresis

Este estudo pretendeu avaliar o limiar de detecção da técnica de PCR aliada à eletroforese capilar para diagnóstico da Leptospira pomona em sêmen bovino. Doses inseminantes livres de patógenos foram contaminadas experimentalmente com Leptospira pomona em escalas que variavam de 10(elevado a 0) a 10(elevado a 7) bactérias/ml e submetidas à extração de DNA pelo método de fenol/clorofórmio. Após a reação de PCR, a visualização dos fragmentos foi realizada em três tipos de eletroforese: agarose 2% sob luz UV, acrilamida 8% corado com prata e eletroforese capilar fluorescente. A detecção de DNA de Leptospira pomona em sêmen bovino através de eletroforese capilar fluorescente foi possível a partir de concentração de 10(elevado a 2 )bactérias/ml. Nos métodos de eletroforese em agarose 2%, observou-se limite de detecção de 10(elevado a 4 )bactérias/ml e em gel de poliacrilamida 8% o limite de detecção foi de 10(elevado a 2 )bactérias/ml. A eletroforese capilar demonstrou ser uma alternativa eficaz e rápida na detecção de DNA de Leptospira em sêmen bovino podendo ser uma valiosa ferramenta para controle de qualidade do sêmen produzido em centrais de inseminação artificial dada a facilidade de automação desse processo.(AU)

This study was performed in order to evaluate the detection limit of PCR with fluorescent capillary electrophoresis for Leptospira pomonadiagnosis in bovine semen. Negative bovine semen samples were artificially contaminated with Leptospira pomona 10(involution 0) to 10(involution 7 ) bacteria/ml) and DNA was extracted by phenol/chloroform protocol. DNA fragments visualization was done by three electrophoresis methods: under UV light in 2 % agarose gel, silver staining 8% polyacrylamide gel and fluorescent capillary electrophoresis. The detection limit of capillary electrophoresis for Leptospira pomona was 10(involution 2) bacteria/ml. Under UV light, in 2 % agarose gel, the detection limit was of 10(involution 4) bacteria/ml while for silver stained 8 % polyacrylamide gel it was 10(involution 2) bacteria/ml. PCR with fluorescent capillary electrophoresis is an efficient andrapid diagnostic test for DNA detection of Leptospira in bovine semen and this can be an important tool for herd and semen sanitary controlin artificial insemination centers.(AU)

Influência da forma de administração e da quantidade fornecida de colostro sobre a concentração de proteína total e de suas frações eletroforéticas no soro sangüíneo de bezerros da raça Holandesa

This study was carried out to evaluate the effect of the amount of colostrum (two and four liters) and methods of colostrum feeding (direct suckling from the cow, feeding colostrum using nipple bottle, and no feeding colostrum) on different blood traits. Thirty two Holstein calves (four groups of eight animals each) were randomly allotted to four treatments: treatment 1 - calves were hand fed four liters of colostrum; treatment 2 - calves were hand fed two liters of colostrum; treatment 3 - calves were fed colostrum directly from the cow, and treatment 4 - calves were not fed colostrum. Higher values of total serum protein, betaglobulins and gamaglobulins were observed in the calves after 24 hours of colostrum feeding. No differences among animals fed colostrum directly from the cow and hand fed two or four liters of colostrum were observed for total protein and eletrophoretic fractions. However lower values of total and eletrophoretic fractions were observed for calves that were not fed colostrum.

Alterações bioquímicas e fisiológicas em sementes de milho causadas pelo ao envelhecimento acelerado

In order to evaluate biochemical (total protein, acid phosphatase, peroxidase and malate dehydrogenase electrophoresis) and physiological (germination and seed vigor) alterations occurring during corn seed accelerated aging (41°C and 100%UR), four corn seed lots of the double hybrid (AG122) were submitted to zero, 24, 48, 72, 96 and 120 hours of accelerated aging. The biochemical assays carried out (isozyme electrophoretical patterns of acid phosphatase e peroxidase) are more sensitive than the physiological test used to monitorate corn seed physiological quality deterioration during corn seed accelerated aging.

Para avaliar possíveis alterações bioquímicas (análises eletroforéticas de proteínas totais e das isoenzimas peroxidase, fosfatase ácida e malato desidrogenase) e fisiológicas (germinação e vigor) que ocorrem nas sementes de milho durante a permanência das mesmas nas condições recomendadas na metodologia do teste de envelhecimento acelerado (41ºC e 100% UR), foi realizada a presente pesquisa. Utilizaram-se sementes de milho, híbrido AG122, provenientes de quatro lotes. Os períodos 0, 24, 48, 72, 96 e 120 horas de permanência das sementes na incubadora (envelhecimento acelerado) definiram os tratamentos. As alterações nos perfís isoenzimáticos (fosfatase ácida e peroxidase) detectadas nas sementes, a partir do período 72h de envelhecimento acelerado, revelaram o provável efeito deteriorativo provocado pela exposição das sementes às condições do teste, independentemente da qualidade do lote, apesar de a maioria dos testes determinantes da qualidade fisiológica das sementes não terem sido sensíveis para detectar tal efeito.

Alterações bioquímicas e fisiológicas em sementes de milho causadas pelo ao envelhecimento acelerado

In order to evaluate biochemical (total protein, acid phosphatase, peroxidase and malate dehydrogenase electrophoresis) and physiological (germination and seed vigor) alterations occurring during corn seed accelerated aging (41°C and 100%UR), four corn seed lots of the double hybrid (AG122) were submitted to zero, 24, 48, 72, 96 and 120 hours of accelerated aging. The biochemical assays carried out (isozyme electrophoretical patterns of acid phosphatase e peroxidase) are more sensitive than the physiological test used to monitorate corn seed physiological quality deterioration during corn seed accelerated aging.

Para avaliar possíveis alterações bioquímicas (análises eletroforéticas de proteínas totais e das isoenzimas peroxidase, fosfatase ácida e malato desidrogenase) e fisiológicas (germinação e vigor) que ocorrem nas sementes de milho durante a permanência das mesmas nas condições recomendadas na metodologia do teste de envelhecimento acelerado (41ºC e 100% UR), foi realizada a presente pesquisa. Utilizaram-se sementes de milho, híbrido AG122, provenientes de quatro lotes. Os períodos 0, 24, 48, 72, 96 e 120 horas de permanência das sementes na incubadora (envelhecimento acelerado) definiram os tratamentos. As alterações nos perfís isoenzimáticos (fosfatase ácida e peroxidase) detectadas nas sementes, a partir do período 72h de envelhecimento acelerado, revelaram o provável efeito deteriorativo provocado pela exposição das sementes às condições do teste, independentemente da qualidade do lote, apesar de a maioria dos testes determinantes da qualidade fisiológica das sementes não terem sido sensíveis para detectar tal efeito.