Toxicity evaluation of Dolichandrone serrulata flower extract on vital and reproductive organs in adult male rats

Abstract Although Dolichandrone serrulata flower (DSF) aqueous extract has been shown to possess pharmacological properties, its systemic toxicity has still to be evaluated. The present study aimed to investigate the sub-chronic toxicity effect of DSF extract on biochemical parameters and histological structures of liver, kidney, testis, and epididymis plus vas deferens. Adult male rats were administered DSF at 100, 300, and 600 mg/kgBW via oral gavage for 48 consecutive days while control rats received distilled water. At the end of the experiment, blood, liver, kidney, testis, and epididymis plus vas deferens samples were collected to determine any changes to serum biochemical components including ALT, ALP, and creatinine levels and histological structures. The results revealed no significant difference in body weight and food or water consumption between control and the DSF-treated groups. It was found that DSF significantly increases the weight of epididymis plus vas deferens, while the kidney and liver showed a decrease in the high dose group (P value 0.05). Histological changes in these vital and reproductive tissues including fibrosis were not observed after administration but ALT, ALP, and creatinine levels were significantly altered in the treated groups (P value 0.05). These altered levels, however, were still within normal ranges. In conclusion, these findings demonstrated that D. serrulata flower extract had no sub-chronic toxicity on vital and reproductive structures but slightly altered some liver and kidney functions.

Resumo Como o extrato aquoso da flor de Dolichandrone serrulata (DSF) demonstrou ter algumas propriedades farmacológicas, sua toxicidade sistêmica ainda não foi avaliada. Este estudo teve como objetivo investigar o efeito da toxicidade subcrônica do extrato de DSF em parâmetros bioquímicos e estruturas histológicas do fígado, rim, testículo e epidídimo mais os vasos deferentes. Ratos machos adultos foram administrados com DSF em 100, 300 e 600 mg / kg de peso corporal por meio de gavagem oral por 48 dias consecutivos, enquanto os ratos controle receberam água destilada. No final do experimento, amostras de sangue, fígado, rim, testículo e epidídimo mais canais deferentes foram coletados para determinar as alterações dos componentes bioquímicos séricos, incluindo ALT, ALP e níveis de creatinina e estruturas histológicas. Os resultados revelaram que o peso corporal e o consumo de comida ou água do controle e de todos os grupos tratados com DSF não foram significativamente diferentes. Verificou-se que o DSF aumentou significativamente o peso do epidídimo mais os canais deferentes, mas o rim e o fígado diminuíram no grupo de alta dose (P valor 0,05). As alterações histológicas, incluindo fibrose de tais tecidos vitais e reprodutivos, não foram encontradas após a administração, mas os níveis de ALT, ALP e creatinina foram significativamente alterados nos grupos tratados (valor P 0,05). No entanto, seus níveis alterados ainda estavam em intervalos normais. Em conclusão, esses achados demonstraram que o extrato da flor de D. serrulata não apresentou toxicidade subcrônica nas estruturas vitais e reprodutivas, mas alterou ligeiramente algumas funções hepáticas e renais.

Application of lectins for detection of glycomic differences in the epididymal duct in water buffalo (Bubalus bubalis) and dromedary camel (Camelus dromedarius) / Aplicación de lectinas para la detección de diferencias glucómicas en el conducto epididimario en búfalos de agua (Bubalus bubalis) y dromedarios (Camelus dromedarius)

SUMMARY: The present study was conducted to detect the differences in glycohistochemical features in the epididymal duct of the dromedary camel and the water buffalo. Epididymal sections (caput, corpus and cauda) from both species were stained with fluorescein isothiocyanate (FITC) conjugated lectins. Binding sites for five lectins (DBA, GSA-1, HPA, PNA and WGA) have been found in both species. The binding sites of different lectins showed significant variations in the pattern of distribution in both a species. This included both species-specific and region-specific order. Additionally, only three (GSA-1, PNA and WGA) out the five lectins studied exhibited binding sites in all epididymal regions in both species. The other two lectins (DBA and HPA) followed the same order recorded for the other three (GSA-1, PNA and WGA) in buffalo, but failed to show any binding sites in cauda epididymis in camel. In conclusion, the variable regional and species-specific distribution features of lectins revealed that both species have diverse glycomic characteristics that may be related to their different reproductive patterns. However, the glycome-associated functional capacities remain obscured and need further profound investigations.

RESUMEN: El presente estudio se realizó para detectar las diferencias en las características glicohistoquímicas del conducto epididimal del dromedario y el búfalo de agua. Las secciones del epidídimo (cabeza, cuerpo y cola) de ambas especies se tiñeron con lectinas conjugadas con isotiocianato de fluoresceína (FITC). Se encontraron sitios de unión para cinco lectinas (DBA, GSA-1, HPA, PNA y WGA) en ambas especies. Los sitios de unión de diferentes lectinas mostraron variaciones significativas en el patrón de distribución en ambas especies. Esto incluía tanto el orden específico de la especie como el específico de la región. Además, solo tres (GSA-1, PNA y WGA) de las cinco lectinas estudiadas exhibieron sitios de unión en todas las regiones del epidídimo en ambas especies. Las otras dos lectinas (DBA y HPA) siguieron el mismo orden registrado para las tres restantes (GSA-1, PNA y WGA) en búfalos, pero no mostraron ningún sitio de union en la cola del epidídimo en camellos. En conclusión, las características de distribución regionales y específicas de especies variables de las lectinas revelaron que ambas especies tienen características glucómicas diversas que pueden estar relacionadas con sus diferentes patrones reproductivos. Sin embargo, las capacidades funcionales asociadas con el glicoma permanecen desconocidas y requieren mayor investigación.

Morphological aspects of epididymal microscopy and rete testis in greater Rhea Americana / Aspectos morfológicos da microscopia do epitélio do epidídimo da Rhea americana

The purpose of this research was to study the histology and describe the microscopy findings of the epididymis epithelium of greater Rhea americana at three time periods: November 2005 (n=14), December 2006 (n= 20), and May 2007 (n= 20), to observe and compare the differences that occurred. We studied the epididymis from 54 rheas, bred in Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brazil. The epididymis were collected during commercial slaughter and fixed in bouin. Optical microscopy was used to measure the cellular structure, types of cells, tubules, and stereological values like the epididymis epithelium diameters, lumen, thickness, and relative volume of the tissue structure. Additionally, electron microscopy was studied. In December 2006 and May 2007, the means of the epididymis tubular diameter were: 79.1 and 58.1 µm, epithelium thickness: 24.0 and 52.2 µm, and lumen diameter: 55.0 and 5.8 µm, respectively. Regarding the volumetric proportion, we reported the following values: epithelium volume 36.2 and 80.4%, lumen without spermatozoon 19.6 and 3.0%, lumen with spermatozoon 5.4 and 0.0%, interstitium 35.4 and 12.0%, blood vessels 3.5 and 4.6%, structures in cellular superficies 1.4 and 0%, lamina 1.4 and 3.2%, and artifacts 0.3 and 1.3%, respectively. The epididymis ducts had a circular form in transverse sections with spermatozoon only in November 2005 and December 2006. The Rheas epididymis morphology was found to be similar to ostriches, roosters, and Japanese quail. Here, we present data from stereological microscopy (tubular diameter, epithelium thickness, and lumen diameter), volumetric proportion (epithelium, lumen without spermatozoon, lumen with spermatozoon, interstitium, blood vessels, structures in cellular superficies; cilium, estereocilium, and lamina) in this species during the repose and sexual activity period (reproductive season).(AU)

O objetivo desta pesquisa foi estudar a histologia e descrever os achados microscópicos do epitélio epidídimo de ema em três períodos: novembro/2005 (n = 14), dezembro/2006 (n = 20) e maio/2007 (n = 20), para observação e comparação das diferenças que ocorreram nesses tempos distintos. Estudamos o epidídimo de 54 animais, criados em Santa Maria, RS. Durante o abate comercial, os epidídimos foram coletados e fixados em Bouin. A microscopia óptica mede a estrutura celular, tipos de células, túbulos e valores estereológicos, como os diâmetros do epitélio do epidídimo, lúmen, espessura, volume relativo da estrutura do tecido. Em dezembro/2006 e maio/2007, as médias do diâmetro tubular do epidídimo foram: 79,1 e 58,1µm, espessura do epitélio: 24,0 e 52,2µm, diâmetro do lúmen: 55,0 e 5,8µm, respectivamente. Em relação à proporção volumétrica, encontramos os seguintes valores: volume epitelial 36,2 e 80,4%, lúmen sem espermatozoide 19,6 e 3,0%, lúmen com espermatozoide 5,4 e 0,0%, intestínio 35,4 e 12,0%, vasos sanguíneos 3,5 e 4,6%, estruturas celulares superfícies 1,4 e 0%, lâmina 1,4 e 3,2%, artefatos 0,3 e 1,3%, respectivamente. Os ductos do epidídimo apresentaram forma circular em cortes transversais com espermatozoide apenas em novembro/2005 e dezembro/2006. A morfologia do epidídimo de Rhea foi semelhante ao avestruz, galo e codornas japonesas. Apresentamos dados de microscopia estereológica (diâmetro tubular, espessura do epitélio, diâmetro do lúmen), proporção volumétrica, em porcentagem (epitélio, lúmen sem espermatozóide, lúmen com espermatozoide, intestório, vasos sanguíneos, estruturas em superfícies celulares - cílio - estereocílio, lâmina e artefatos) nesta espécie nos períodos de repouso e atividade sexual (estação reprodutiva).(AU)

Descrição e variação sazonal na histomorfometria epididimária de Dermanura cinerea (Chiroptera: Phyllostomidae) em um fragmento de Mata Atlântica no Nordeste do Brasil / Description and seasonal variation in epididymal histomorphometry of Dermanuracinerea (Chiroptera: Phyllostomidae) in a fragment of the Atlantic Forest in the Northeastern Brazil

Description and seasonal variation in epididymal histomorphometry of Dermanuracinerea (Chiroptera: Phyllostomidae) in a fragment of the Atlantic Forest in the Northeastern Brazil. This study aimed to evaluate seasonal patterns in the histomorphometry of the epididymis of Dermanura cinerea (Gervais, 1856) in a fragment of the Atlantic Forest in the Northeastern Brazil. Eighteen adult male specimens captured by mist net were used. The field-work occurred monthly over 18 months, during two consecutive nights. Meteorological data (precipitation) were obtained from the National Institute of Meteorology. After euthanasia, specimens had the epididymis collected, which were fixed and processed. The histological slides produced were stained by Hematoxylin - Eosin and analyzed by optical microscopy. The morphometric parameters analyzed were the tubular, lumen and epithelium areas, of the regions of the initial segment, caput, corpus and cauda of the epididymis. The histomorphometric data were submitted to the Mann-Whitney U test analyzes. The results showed that D. cinerea presented spermatozoa in all regions of the epididymis, except in the initial segment. The highest averages of the tubular, lumen and epithelial areas in the four regions were observed during the dry months. Therefore, D cinerea presented greater sensibility in the region of the cauda of the epididymis, during the months with low rainfall indices. This indicates that environmental conditions have considerable influence on the epididymal morphophysiology of this species, especially in relation to the storage of sperm in the tail of this organ, in area of Atlantic forest in northeastern Brazil.(AU)

Esse estudo objetivou avaliar sazonalmente a histomorfometria do epidídimo de Dermanura cinerea (Gervais, 1856) em um fragmento de Mata Atlântica no nordeste do Brasil. Foram utilizados 18 espécimes machos adultos capturados por redes de neblina. As coletas ocorreram mensalmente ao longo de dezoito meses, durante duas noites consecutivas e os dados meteorológicos foram fornecidos pelo Instituto Nacional de Meteorologia. Depois de eutanasiados, os espécimes tiveram os epidídimos coletados e esses órgãos foram fixados e processados. As lâminas histológicas foram coradas por Hematoxilina - Eosina e analisadas em microscopia óptica. Os parâmetros morfométricos analisados foram as áreas do túbulo, do lúmen e do epitélio das regiões do segmento inicial, cabeça, corpo e cauda do epidídimo. Os dados histomorfométricos obtidos foram submetidos às análises no teste U de Mann-Whitney. Os resultados revelaram que D. cinerea apresentou espermatozoides em todas as regiões do epidídimo, exceto no segmento inicial. As maiores médias das áreas tubular, do lúmen e do epitélio nas quatro regiões, foram constatadas durante os meses secos. Portanto, D cinerea apresentou maior sensibilidade na região da cauda do epidídimo, ao longo dos meses com baixos índices pluviométricos. Isso indica que as condições ambientais apresentam considerável influência sobre a morfofisiologia epidídimária dessa espécie, sobretudo, em relação ao armazenamento de espermatozoides na cauda desse órgão, em área de Mata atlântica do nordeste brasileiro.(AU)

Morphological aspects of epididymal microscopy and rete testis in greater Rhea Americana / Aspectos morfológicos da microscopia do epitélio do epidídimo da Rhea americana

ABSTRACT: The purpose of this research was to study the histology and describe the microscopy findings of the epididymis epithelium of greater Rhea americana at three time periods: November 2005 (n=14), December 2006 (n= 20), and May 2007 (n= 20), to observe and compare the differences that occurred. We studied the epididymis from 54 rheas, bred in Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brazil. The epididymis were collected during commercial slaughter and fixed in bouin. Optical microscopy was used to measure the cellular structure, types of cells, tubules, and stereological values like the epididymis epithelium diameters, lumen, thickness, and relative volume of the tissue structure. Additionally, electron microscopy was studied. In December 2006 and May 2007, the means of the epididymis tubular diameter were: 79.1 and 58.1 µm, epithelium thickness: 24.0 and 52.2 µm, and lumen diameter: 55.0 and 5.8 µm, respectively. Regarding the volumetric proportion, we reported the following values: epithelium volume 36.2 and 80.4%, lumen without spermatozoon 19.6 and 3.0%, lumen with spermatozoon 5.4 and 0.0%, interstitium 35.4 and 12.0%, blood vessels 3.5 and 4.6%, structures in cellular superficies 1.4 and 0%, lamina 1.4 and 3.2%, and artifacts 0.3 and 1.3%, respectively. The epididymis ducts had a circular form in transverse sections with spermatozoon only in November 2005 and December 2006. The Rhea's epididymis morphology was found to be similar to ostriches, roosters, and Japanese quail. Here, we present data from stereological microscopy (tubular diameter, epithelium thickness, and lumen diameter), volumetric proportion (epithelium, lumen without spermatozoon, lumen with spermatozoon, interstitium, blood vessels, structures in cellular superficies; cilium, estereocilium, and lamina) in this species during the repose and sexual activity period (reproductive season).

RESUMO: O objetivo desta pesquisa foi estudar a histologia e descrever os achados microscópicos do epitélio epidídimo de ema em três períodos: novembro/2005 (n = 14), dezembro/2006 (n = 20) e maio/2007 (n = 20), para observação e comparação das diferenças que ocorreram nesses tempos distintos. Estudamos o epidídimo de 54 animais, criados em Santa Maria, RS. Durante o abate comercial, os epidídimos foram coletados e fixados em Bouin. A microscopia óptica mede a estrutura celular, tipos de células, túbulos e valores estereológicos, como os diâmetros do epitélio do epidídimo, lúmen, espessura, volume relativo da estrutura do tecido. Em dezembro/2006 e maio/2007, as médias do diâmetro tubular do epidídimo foram: 79,1 e 58,1µm, espessura do epitélio: 24,0 e 52,2µm, diâmetro do lúmen: 55,0 e 5,8µm, respectivamente. Em relação à proporção volumétrica, encontramos os seguintes valores: volume epitelial 36,2 e 80,4%, lúmen sem espermatozoide 19,6 e 3,0%, lúmen com espermatozoide 5,4 e 0,0%, intestínio 35,4 e 12,0%, vasos sanguíneos 3,5 e 4,6%, estruturas celulares superfícies 1,4 e 0%, lâmina 1,4 e 3,2%, artefatos 0,3 e 1,3%, respectivamente. Os ductos do epidídimo apresentaram forma circular em cortes transversais com espermatozoide apenas em novembro/2005 e dezembro/2006. A morfologia do epidídimo de Rhea foi semelhante ao avestruz, galo e codornas japonesas. Apresentamos dados de microscopia estereológica (diâmetro tubular, espessura do epitélio, diâmetro do lúmen), proporção volumétrica, em porcentagem (epitélio, lúmen sem espermatozóide, lúmen com espermatozoide, intestório, vasos sanguíneos, estruturas em superfícies celulares - cílio - estereocílio, lâmina e artefatos) nesta espécie nos períodos de repouso e atividade sexual (estação reprodutiva).

Descrição e variação sazonal na histomorfometria epididimária de Dermanura cinerea (Chiroptera: Phyllostomidae) em um fragmento de Mata Atlântica no Nordeste do Brasil / Description and seasonal variation in epididymal histomorphometry of Dermanuracinerea (Chiroptera: Phyllostomidae) in a fragment of the Atlantic Forest in the Northeastern Brazil

Description and seasonal variation in epididymal histomorphometry of Dermanuracinerea (Chiroptera: Phyllostomidae) in a fragment of the Atlantic Forest in the Northeastern Brazil. This study aimed to evaluate seasonal patterns in the histomorphometry of the epididymis of Dermanura cinerea (Gervais, 1856) in a fragment of the Atlantic Forest in the Northeastern Brazil. Eighteen adult male specimens captured by mist net were used. The field-work occurred monthly over 18 months, during two consecutive nights. Meteorological data (precipitation) were obtained from the National Institute of Meteorology. After euthanasia, specimens had the epididymis collected, which were fixed and processed. The histological slides produced were stained by Hematoxylin - Eosin and analyzed by optical microscopy. The morphometric parameters analyzed were the tubular, lumen and epithelium areas, of the regions of the initial segment, caput, corpus and cauda of the epididymis. The histomorphometric data were submitted to the Mann-Whitney U test analyzes. The results showed that D. cinerea presented spermatozoa in all regions of the epididymis, except in the initial segment. The highest averages of the tubular, lumen and epithelial areas in the four regions were observed during the dry months. Therefore, D cinerea presented greater sensibility in the region of the cauda of the epididymis, during the months with low rainfall indices. This indicates that environmental conditions have considerable influence on the epididymal morphophysiology of this species, especially in relation to the storage of sperm in the tail of this organ, in area of Atlantic forest in northeastern Brazil.

Esse estudo objetivou avaliar sazonalmente a histomorfometria do epidídimo de Dermanura cinerea (Gervais, 1856) em um fragmento de Mata Atlântica no nordeste do Brasil. Foram utilizados 18 espécimes machos adultos capturados por redes de neblina. As coletas ocorreram mensalmente ao longo de dezoito meses, durante duas noites consecutivas e os dados meteorológicos foram fornecidos pelo Instituto Nacional de Meteorologia. Depois de eutanasiados, os espécimes tiveram os epidídimos coletados e esses órgãos foram fixados e processados. As lâminas histológicas foram coradas por Hematoxilina - Eosina e analisadas em microscopia óptica. Os parâmetros morfométricos analisados foram as áreas do túbulo, do lúmen e do epitélio das regiões do segmento inicial, cabeça, corpo e cauda do epidídimo. Os dados histomorfométricos obtidos foram submetidos às análises no teste U de Mann-Whitney. Os resultados revelaram que D. cinerea apresentou espermatozoides em todas as regiões do epidídimo, exceto no segmento inicial. As maiores médias das áreas tubular, do lúmen e do epitélio nas quatro regiões, foram constatadas durante os meses secos. Portanto, D cinerea apresentou maior sensibilidade na região da cauda do epidídimo, ao longo dos meses com baixos índices pluviométricos. Isso indica que as condições ambientais apresentam considerável influência sobre a morfofisiologia epidídimária dessa espécie, sobretudo, em relação ao armazenamento de espermatozoides na cauda desse órgão, em área de Mata atlântica do nordeste brasileiro.

Descrição e variação sazonal na histomorfometria epididimária de Dermanura cinerea (Chiroptera: Phyllostomidae) em um fragmento de Mata Atlântica no Nordeste do Brasil

ABSTRACT Description and seasonal variation in epididymal histomorphometry of Dermanuracinerea (Chiroptera: Phyllostomidae) in a fragment of the Atlantic Forest in the Northeastern Brazil. This study aimed to evaluate seasonal patterns in the histomorphometry of the epididymis of Dermanura cinerea (Gervais, 1856) in a fragment of the Atlantic Forest in the Northeastern Brazil. Eighteen adult male specimens captured by mist net were used. The field-work occurred monthly over 18 months, during two consecutive nights. Meteorological data (precipitation) were obtained from the National Institute of Meteorology. After euthanasia, specimens had the epididymis collected, which were fixed and processed. The histological slides produced were stained by Hematoxylin - Eosin and analyzed by optical microscopy. The morphometric parameters analyzed were the tubular, lumen and epithelium areas, of the regions of the initial segment, caput, corpus and cauda of the epididymis. The histomorphometric data were submitted to the Mann-Whitney U test analyzes. The results showed that D. cinerea presented spermatozoa in all regions of the epididymis, except in the initial segment. The highest averages of the tubular, lumen and epithelial areas in the four regions were observed during the dry months. Therefore, D cinerea presented greater sensibility in the region of the cauda of the epididymis, during the months with low rainfall indices. This indicates that environmental conditions have considerable influence on the epididymal morphophysiology of this species, especially in relation to the storage of sperm in the tail of this organ, in area of Atlantic forest in northeastern Brazil.

RESUMO Esse estudo objetivou avaliar sazonalmente a histomorfometria do epidídimo de Dermanura cinerea (Gervais, 1856) em um fragmento de Mata Atlântica no nordeste do Brasil. Foram utilizados 18 espécimes machos adultos capturados por redes de neblina. As coletas ocorreram mensalmente ao longo de dezoito meses, durante duas noites consecutivas e os dados meteorológicos foram fornecidos pelo Instituto Nacional de Meteorologia. Depois de eutanasiados, os espécimes tiveram os epidídimos coletados e esses órgãos foram fixados e processados. As lâminas histológicas foram coradas por Hematoxilina - Eosina e analisadas em microscopia óptica. Os parâmetros morfométricos analisados foram as áreas do túbulo, do lúmen e do epitélio das regiões do segmento inicial, cabeça, corpo e cauda do epidídimo. Os dados histomorfométricos obtidos foram submetidos às análises no teste U de Mann-Whitney. Os resultados revelaram que D. cinerea apresentou espermatozoides em todas as regiões do epidídimo, exceto no segmento inicial. As maiores médias das áreas tubular, do lúmen e do epitélio nas quatro regiões, foram constatadas durante os meses secos. Portanto, D cinerea apresentou maior sensibilidade na região da cauda do epidídimo, ao longo dos meses com baixos índices pluviométricos. Isso indica que as condições ambientais apresentam considerável influência sobre a morfofisiologia epidídimária dessa espécie, sobretudo, em relação ao armazenamento de espermatozoides na cauda desse órgão, em área de Mata atlântica do nordeste brasileiro.

Influence of age, body weight and season on testicular and epididymis biometrics in donkeys (Equus asinus) / Influencia de la edad, el peso corporal y la estación en la biometría testicular y el epidídimo en burros (Equus asinus)

SUMMARY: The objective of this present investigation was undertaken to study the testicular and epididymal biometrical characteristics in Algerian donkeys throughout the year according to age, body weight and seasonal changes. The study was conducted from February 2019 to January 2020. A total of 24 sexually mature donkeys (Equus asinus) were selected randomly. The testis and epididymis were collected after slaughter of donkeys and separated from the conjunctive and adherent tissues. The epididymis has been carefully removed at the testicular junction. In total, 10 biometric measures were selected and performed. Our results revealed that there are significant differences (P<0.05) between groups in most biometrics values. All biometric parameters varied throughout the year and were affected by the season. Significant differences of the GSI and SC values (P<0.05) were observed in different age groups and seasons. On the other hand, no significant differences were observed between the body weight categories of donkeys. The analysis of the correlation coefficients between the biometric values shows high positive correlations, ranged between 0.98 and 0.72 (P<0.001). There was a high positive correlation between age and all the parameters, ranged from 0.85 to 0.61 (P<0.001). However, there were low negative correlations between season and; testicular and epididymal biometrics. It is the first investigation that describes the male reproductive organs in donkeys of the Algerian race (Equus asinus), on the basis of biometric testicular and epididymal measurements. Our results showed that the essential differences were noted between some biometric parameters and the age, season and body weight of donkeys. In addition, the correlation coefficients were supported between biometric measurements and these factors. However, other approaches are necessary to undertake, such as histology of reproductive organs and hormone measurement, for a deeper understanding of the physiology of reproduction in donkeys.

RESUMEN: El objetivo de esta investigación fue estudiar las características biométricas testiculares y epididimarias en burros Argelinos durante todo el año de acuerdo con la edad, el peso corporal y los cambios estacionales. El estudio se realizó entre febrero de 2019 y enero de 2020. Se seleccionó al azar un total de 24 burros sexualmente maduros (Equus asinus). Los testículos y el epidídimo se recogieron después del sacrificio de los burros y se separaron de los tejidos conjuntivos y adherentes. El epidídimo se eliminó cuidadosamente en la unión testicular. En total, se seleccionaron y realizaron 10 medidas biométricas. Nuestros resultados revelaron que existen diferencias significativas (P <0,05) entre los grupos en la mayoría de los valores biométricos. Todos los parámetros biométricos variaron a lo largo del año y se vieron afectados por la temporada. Se observaron diferencias significativas de los valores de GSI y SC (P <0,05) en diferentes grupos de edad y estaciones. Por otra parte, no se observaron diferencias significativas entre las categorías de peso corporal de los burros. El análisis de los coeficientes de correlación entre los valores biométricos muestra altas correlaciones positivas, entre 0,98 y 0,72 (P <0,001). Hubo una alta correlación positiva entre la edad y todos los parámetros, que varió de 0,85 a 0,61 (P <0,001). Sin embargo, hubo bajas correlaciones negativas entre temporada y biometría testicular y epididimaria. Es la primera investigación que describe los órganos reproductores machos en burros de la raza Argelina (Equus asinus), sobre la base de mediciones biométricas testiculares y epididimarias. Nuestros resultados mostraron que se observaron las diferencias esenciales entre algunos parámetros biométricos y la edad, la estación y el peso corporal de los burros. Además, los coeficientes de correlación fueron compatibles entre las mediciones biométricas y estos factores. Sin embargo, son necesarios otros enfoques, como la histología de los órganos reproductivos y la medición de hormonas, para una mayor comprensión de la fisiología de la reproducción en burros.

Eficiência de duas técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães e avaliação seminal pós-criopreservação / [Efficiency of two techniques for recovering epididymal spermatozoids from dogs and seminal evaluation post cryopreservation]

O objetivo deste trabalho foi avaliar a recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, utilizando as técnicas de fluxo retrógrado (FR) e flutuação (FL) em diluidor Tris-gema, antes e após a criopreservação. Foram coletados 30 complexos testículo-epididímos (CTE), sendo 15 para FR e 15 para FL, e, logo após a recuperação dos espermatozoides, foram analisadas as alterações morfológicas nessas células espermáticas. Após a adição do diluidor, foram avaliados os parâmetros de motilidade total (MOT) e vigor (V) espermáticos. O sêmen pós-criopreservado foi submetido ao teste de termorresistência nos tempos T0, T30, T60 e T90 minutos, além da avaliação das membranas plasmática e acrossomal por sondas fluorescentes. Não houve diferença estatística entre as técnicas quanto à MOT e ao vigor no sêmen diluído (FR-MOT: 82,3% e V: 3,4; FL-MOT: 79,6% e V: 3,2) e pós-criopreservado (FR-MOT: 34% e V: 2,8; FL-MOT: 30% e V: 2,7). A partir do T30, houve diferença significativa quanto à MOT e ao vigor nas técnicas utilizadas, e o tempo também prejudicou o acrossoma espermático a partir do T30. Conclui-se que as técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, testadas neste trabalho, podem ser utilizadas para refrigeração e criopreservação de sêmen.(AU)

The objective of this work was to evaluate the recovery of epididymal spermatozoa from castrated dogs using retrograde flow (FL) and flotation (FL) techniques in Tris-egg yolk diluent, before and after cryopreservation. Thirty testicle-epididymal complexes (CTE) were collected, 15 for FR and 15 for FL and soon after spermatozoid recovery, morphological changes in these spermatic cells were analyzed. After addition of the diluent, the parameters of total motility (MOT) and vigor (V) were evaluated. The post-cryopreserved semen was submitted to thermoresistance (TTR) test at T0, T30, T60 and T90 minutes, as well as the plasma and acrosomal membrane evaluation by fluorescent probes. There was no statistically significant difference between techniques tested for MOT and vigor in the diluted semen (FR-MOT: 82.3% and V: 3.4, FL-MOT: 79.6% and V: 3.2) and post-cryopreserved (FR-MOT: 34% and V: 2.8, FL-MOT: 30% and V: 2.7). From the T30 there was a significant difference regarding MOT and vigor in the used techniques, and the time also damaged the spermatic acrosome from the T30. It is concluded that the epididymal spermatozoa recovering techniques from castrated dogs, tested in this study, can be used for semen refrigeration and cryopreservation.(AU)

Reporte del primer caso de cistoadenoma papilar de epidídimo en Colombia, Hospital Universitario de Santander / Report of the first case of papillary cystadenoma of the epididymis in Colombia

Resumen La presencia de una masa en la región escrotal comprende un amplio espectro de patologías, unas con mayor urgencia para el manejo que otras, dado el riesgo asociado de pérdida testicular o desarrollo de cáncer. Dentro de las posibilidades diagnósticas se encuentran las neoplasias, destacando las originadas en el epidídimo, con un 75% de casos de etiología benigna, correspondiendo un 9% al cistoadenoma papilar de epidídimo que sobresale por su baja frecuencia dado que en la literatura mundial existen aproximadamente 70 reportes publicados con escasos provenientes de literatura médica en castellano, en los que se incluye el presente caso expuesto en el que se confirma histopatológicamente un cistoadenoma papilar de epidídimo y se presenta una revisión del tema acerca del enfoque de un paciente con masa escrotal. Asimismo se resalta el hecho de que esta lesión puede asociarse con la enfermedad de Von Hippel Lindau, sobre todo en presentaciones bilaterales. MÉD.UIS. 2020;33(2):95-100.

Abstract The presence of a mass in the scrotal region comprises a wide spectrum of pathologies, some with greater urgency for management than others, given the associated risk of testicular loss or cancer development. Among the diagnostic possibilities are the neoplasms, highlighting those originating in the epididymis, with 75% of cases of benign etiology, 9% corresponding to the papillary cystadenoma of the epididymis that stands out for its low frequency given that in the world literature there are approximately 70 published reports with few from medical literature in Spanish, which include the present case presented in which a papillary cystadenoma of the epididymis is confirmed histopathologically and a review of the topic about the approach of a patient with scrotal mass is presented. Also the fact that this lesion can be associated with von Hippel Lindau disease, especially in bilateral presentations is highlighted. MÉD.UIS. 2020;33(2):95-100.

Effect of refrigeration at -1°C on spermatozoa quality of domestic cats / Efeito da refrigeração a -1°C na qualidade de espermatozoides de gatos domésticos

The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. In order to compare the two refrigeration temperatures, the first stage was to analyze if there was a difference between the harvesting techniques. After this, two experiments were conducted: in the first, sperm sample from 14 cats were used and the cooling was performed at -1°C; and in the second, sample from 15 cats were used and the sperm were refrigerated at 4°C. Sperm kinetics were evaluated by computerized analysis (CASA) and concentration by Neubauer chamber, spermatic morphology was evaluated by modified Karras staining, and membrane integrity was evaluated by eosin nigrosine. The results obtained were analyzed in R software, version 3.2.5 using the Mann-Whitney test for variables with abnormal distributions, considering significance at the level of 5%...(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade espermática de gatos domésticos obtidos por eletroejaculação e recuperação da cauda do epidídimo após a refrigeração a -1°C e a 4°C por 24 e 48 horas. Vinte e nove gatos adultos (2 a 6kg) foram utilizados. A colheita de espermatozoides foi realizada por eletroejaculação (EEJ) e, após 48 horas, os gatos foram orquiectomizados, e as amostras espermáticas foram obtidas a partir do ducto deferente e da cauda do epidídimo (EPD). As amostras foram diluídas em ACP-117® e as características espermáticas foram avaliadas em três momentos distintos: fresco, 24 e 48 horas após a refrigeração. Para ser possível comparar as duas temperaturas de refrigeração, a primeira etapa foi analisar se havia diferença entre as técnicas de colheita. Após isto, dois experimentos foram conduzidos: no primeiro, espermatozoides de 14 gatos foram utilizados e a refrigeração foi realizada a -1°C; e no segundo, amostras de 15 gatos foram utilizados e os espermatozoides foram refrigerados a 4°C. A cinética espermática foi avaliada por análise computadorizada (CASA), a concentração por câmara de Neubauer, a morfologia espermática foi avaliada pela coloração de Karras modificada, e a integridade da membrana foi avaliada por eosina nigrosina. Os resultados obtidos foram analisados no software R, versão 3.2.5, utilizando o teste de Mann-Whitney para variáveis com distribuições anormais, considerando significância ao nível de 5%...(AU)

Effect of refrigeration at -1°C on spermatozoa quality of domestic cats / Efeito da refrigeração a -1°C na qualidade de espermatozoides de gatos domésticos

The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. In order to compare the two refrigeration temperatures, the first stage was to analyze if there was a difference between the harvesting techniques. After this, two experiments were conducted: in the first, sperm sample from 14 cats were used and the cooling was performed at -1°C; and in the second, sample from 15 cats were used and the sperm were refrigerated at 4°C. Sperm kinetics were evaluated by computerized analysis (CASA) and concentration by Neubauer chamber, spermatic morphology was evaluated by modified Karras staining, and membrane integrity was evaluated by eosin nigrosine. The results obtained were analyzed in R software, version 3.2.5 using the Mann-Whitney test for variables with abnormal distributions, considering significance at the level of 5%. In ejaculate samples, higher values of total morphological defects were observed after 24 and 48 hours of refrigeration at 4°C (P<0.022) compared to refrigeration at -1°C, using Friedman test. To quantify the decrease in sperm quality, parameter reductions were calculated among time points (F-24h/F-48h/24h-48h). In EPD samples, a greater reduction in sperm quality was detected after 24 hours of refrigeration at 4°C, both in motility and sperm kinetics and in the movement and velocity indices, compared to refrigeration at -1°C. Based on the results, it can be concluded that cooling of feline spermatozoa at -1°C for up to 48 hours was efficient in maintaining spermatic quality collected by EEJ and EPD, and it could be an alternative to spermatozoa cryopreservation in domestic felines.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade espermática de gatos domésticos obtidos por eletroejaculação e recuperação da cauda do epidídimo após a refrigeração a -1°C e a 4°C por 24 e 48 horas. Vinte e nove gatos adultos (2 a 6kg) foram utilizados. A colheita de espermatozoides foi realizada por eletroejaculação (EEJ) e, após 48 horas, os gatos foram orquiectomizados, e as amostras espermáticas foram obtidas a partir do ducto deferente e da cauda do epidídimo (EPD). As amostras foram diluídas em ACP-117® e as características espermáticas foram avaliadas em três momentos distintos: fresco, 24 e 48 horas após a refrigeração. Para ser possível comparar as duas temperaturas de refrigeração, a primeira etapa foi analisar se havia diferença entre as técnicas de colheita. Após isto, dois experimentos foram conduzidos: no primeiro, espermatozoides de 14 gatos foram utilizados e a refrigeração foi realizada a -1°C; e no segundo, amostras de 15 gatos foram utilizados e os espermatozoides foram refrigerados a 4°C. A cinética espermática foi avaliada por análise computadorizada (CASA), a concentração por câmara de Neubauer, a morfologia espermática foi avaliada pela coloração de Karras modificada, e a integridade da membrana foi avaliada por eosina nigrosina. Os resultados obtidos foram analisados no software R, versão 3.2.5, utilizando o teste de Mann-Whitney para variáveis com distribuições anormais, considerando significância ao nível de 5%. No ejaculado, maiores valores de defeitos morfológicos totais foram observados após 24 e 48 horas de refrigeração a 4°C (P<0,022) em comparação com refrigeração a -1°C, usando o teste de Friedman. Para quantificar a diminuição na qualidade espermática, as reduções dos parâmetros foram calculadas entre os pontos de tempo (F-24h/F-48h/24h-48h). Na EPD, uma maior redução na qualidade espermática foi detectada após 24 horas de refrigeração a 4°C, tanto na motilidade e na cinética espermática quanto nos índices de movimento e velocidade, em comparação com a refrigeração a -1°C. Com base nos resultados, pode concluir-se que a refrigeração dos espermatozoides felino a -1°C, até 48 horas, foi eficaz na manutenção da qualidade espermático colhidos por EEJ e EPD, e pode ser uma alternativa para a criopreservação de espermatozoides em felinos domésticos.(AU)

Morphology, morphometry, and membrane integrity of epididymal spermatozoa of spotted pacas (Cuniculus paca, Linnaeus 1766) / Morfologia, morfometria e integridade da membrana de espermatozoides epididimários de paca (Cuniculus paca, Linnaeus 1766)

The objective of this study was to evaluate the morphology, morphometry, and membrane integrity of epididymal spermatozoa of spotted pacas using spermatic cells collected from the epididymal tails of five animals. The flotation method using the ACP-123® and Botusemen Special® extenders was performed, and samples were stained in Diff-Quick and eosin-nigrosine. Descriptive statistics of data were obtained and Students t-test was performed. The morphology of 200 Diff-Quick-stained spermatozoa showed that they had an oval head with three vesicles in the acrosomal region, a midpiece, an elongated tail; moreover, 27% of the spermatozoa exhibited cellular defects. The morphometry of 100 sperm cells (analyzed with an optical microscope and the EZ Leica LAS software for Windows) presented the following measurements (mean ± SD): total length 43.87 ± 4.91 μm, head 7.54 ± 0.82 μm, midpiece 5.35 ± 0.83 μm, tail 30.72 ± 2.55 μm, and head width 5.30 ± 0.68 μm. Of the 2,000 cells stained with eosin-nigrosine for membrane integrity evaluation, 83.8% diluted in ACP-123® and 72.9% diluted in Botusemen® had intact membranes. The results of this study suggest that epididymal spermatozoa of pacas can be used in assisted reproduction programs; moreover, our study adds knowledge to the reproductive biology of wild animals, and encourages further research on the role of the three acrosomal vesicles present in this species.(AU)

Com o objetivo de avaliar a morfologia, a morfometria e a integridade de membrana dos espermatozoides epididimários de paca, células espermáticas oriundas da cauda do epidídimo foram obtidas de cinco animais pelo método de flutuação, utilizando os diluidores ACP-123 ® e Botusemen Special®, coradas em Panótico rápido e Eosina-Nigrosina. Os dados foram analisados por estatística descritiva e teste t de Student. A morfologia de 200 espermatozoides corados em Panótico rápido evidenciou que os mesmos possuíam: cabeça ovalada com três vesículas na região acrossomal, peça intermediária, cauda alongada, sendo os defeitos celulares de 27%. A morfometria de 100 células espermáticas (efetuada com microscópio óptico e softwares EZ Leica LAS de aquisição de imagens para sistemas operacionais Windows) apresentou as seguintes medidas (média ± d.p): comprimento total 43,87 ± 4,91 µm, cabeça 7,54 ± 0,82 µm, peça intermediária 5,35 ± 0,83 µm, cauda 30,72 ± 2,55 µm e largura da cabeça 5,30 ± 0,68 µm. Das 2.000 células coradas em Eosina-Nigrosina para avaliação da integridade da membrana, 83,8 % das diluídas em ACP 123 ® e 72,9 % das diluídas em Botusemen® estavam com as membranas intactas. Os resultados sugerem que espermatozoides epididimários de pacas podem ser utilizados em técnicas de reprodução assistida, agregam conhecimentos a esta área e suscitam novos estudos sobre o papel das três vesículas acrossomais características nesta espécie.(AU)

Morphology, morphometry, and membrane integrity of epididymal spermatozoa of spotted pacas (Cuniculus paca, Linnaeus 1766) / Morfologia, morfometria e integridade da membrana de espermatozoides epididimários de paca (Cuniculus paca, Linnaeus 1766)

The objective of this study was to evaluate the morphology, morphometry, and membrane integrity of epididymal spermatozoa of spotted pacas using spermatic cells collected from the epididymal tails of five animals. The flotation method using the ACP-123® and Botusemen Special® extenders was performed, and samples were stained in Diff-Quick and eosin-nigrosine. Descriptive statistics of data were obtained and Students t-test was performed. The morphology of 200 Diff-Quick-stained spermatozoa showed that they had an oval head with three vesicles in the acrosomal region, a midpiece, an elongated tail; moreover, 27% of the spermatozoa exhibited cellular defects. The morphometry of 100 sperm cells (analyzed with an optical microscope and the EZ Leica LAS software for Windows) presented the following measurements (mean ± SD): total length 43.87 ± 4.91 μm, head 7.54 ± 0.82 μm, midpiece 5.35 ± 0.83 μm, tail 30.72 ± 2.55 μm, and head width 5.30 ± 0.68 μm. Of the 2,000 cells stained with eosin-nigrosine for membrane integrity evaluation, 83.8% diluted in ACP-123® and 72.9% diluted in Botusemen® had intact membranes. The results of this study suggest that epididymal spermatozoa of pacas can be used in assisted reproduction programs; moreover, our study adds knowledge to the reproductive biology of wild animals, and encourages further research on the role of the three acrosomal vesicles present in this species.

Com o objetivo de avaliar a morfologia, a morfometria e a integridade de membrana dos espermatozoides epididimários de paca, células espermáticas oriundas da cauda do epidídimo foram obtidas de cinco animais pelo método de flutuação, utilizando os diluidores ACP-123 ® e Botusemen Special®, coradas em Panótico rápido e Eosina-Nigrosina. Os dados foram analisados por estatística descritiva e teste t de Student. A morfologia de 200 espermatozoides corados em Panótico rápido evidenciou que os mesmos possuíam: cabeça ovalada com três vesículas na região acrossomal, peça intermediária, cauda alongada, sendo os defeitos celulares de 27%. A morfometria de 100 células espermáticas (efetuada com microscópio óptico e softwares EZ Leica LAS de aquisição de imagens para sistemas operacionais Windows) apresentou as seguintes medidas (média ± d.p): comprimento total 43,87 ± 4,91 µm, cabeça 7,54 ± 0,82 µm, peça intermediária 5,35 ± 0,83 µm, cauda 30,72 ± 2,55 µm e largura da cabeça 5,30 ± 0,68 µm. Das 2.000 células coradas em Eosina-Nigrosina para avaliação da integridade da membrana, 83,8 % das diluídas em ACP 123 ® e 72,9 % das diluídas em Botusemen® estavam com as membranas intactas. Os resultados sugerem que espermatozoides epididimários de pacas podem ser utilizados em técnicas de reprodução assistida, agregam conhecimentos a esta área e suscitam novos estudos sobre o papel das três vesículas acrossomais características nesta espécie.

Congelação de espermatozoides recuperados do epidídimo de cão (Canis familiares) / Spermatozoa freezing recovered from dog epididymis (Canis familiares)

O presente estudo tem como objetivo avaliar o espermatozoide recuperado do epidídimo congelado/descongelado em diferentes diluidores. O experimento foi realizado no Laboratório de Reprodução Animal do Setor Palotina no período de julho de 2017 a julho de 2019. Um mínimo de 40 CTE (complexo testículo epidídimo) de cães foi obtido de animais orquiectomizados. A recuperação dos espermatozoides da cauda do epidídimo foi realizada pela técnica de flutuação e submetida ao teste de swin-up para remoção dos resíduos celulares e espermatozoides inviáveis. Após a avaliação da concentração e motilidade, os espermatozoides foram diluidos pelo método “One Step” em Tris gema e/ou citrato gema e logo envazados em palhetas de 0,25mL numa concentração de 25 x 106 de espermatozoides viáveis. Logo as mesmas permaneceram em estabilização por 2 horas a temperatura de 5°C. Após foram colocadas em vapor de nitrogênio por 15 minutos, e por fim, mergulhadas no nitrogênio líquido e armazenadas em botijão criobiológico. A descongelação foi realizada em banho maria a 37°C por um minuto, e após avaliou-se a motilidade e vigor em microscopia de Contraste de Fase 100x. Para avaliação da viabilidade espermática, foi utilizada a coloração vital Azul de Tripan/Giemsa. Na análise do sêmen descongelado, o diluente Tris-gema foi estatisticamente superior ao Citratogema nas variáveis motilidade, vigor e morfologia de espermatozoides epididimarios de cão. O presente estudo, mostra que é possível recuperar e preservar espermatozoides provenientes do epidídimo de canídeos utilizando meio crioprotetor a base de tris-gema.(AU)

The present study aims to evaluate sperm recovered from frozen / thawed epididymis in different extenders. The experiment was carried out in Animal Reproduction Laboratory at the Veterinary Hospital at the Palotina Sector from July 2017 to July 2019. A minimum of 40 ETC (epididymis testis complex) from dogs was obtained from orchiectomized animals. Epididymis tail sperm retrieval was performed by flotation technique and then submitted to the swin-up test to remove the unfeasible sperm and cellular waste. After evaluation of concentration and motility, the sperm were diluted by the “One Step” method in Tris yolk and / or citrate yolk and then packed in previously identified 0.25mL straws at a concentration of 25 x 106 viable sperm. Soon they remained in stabilization for 2 hours at 5 ° C. After that they were placed in nitrogen vapor for 15 minutes, and finally, dipped in liquid nitrogen and stored in cryogenic cylinder. The thawing was performed in a 37 ° C water bath for one minute, and then motility and vigor were evaluated by x100 magnification Phase Contrast microscopy. For sperm viability evaluation, the Tripan Blue/Giemsa vital stain was used. In the analysis of thawed semen, Tris-yolk extender was statistically superior to Yolk Citrate in the motility, vigor and morphology of dog epididymis sperm variables. The present study shows that it is possible to recovery and preserve sperm from the canid epididymis using tris-yolk cryoprotectant extender.(AU)

Congelação de espermatozoides recuperados do epidídimo de cão (Canis familiares) / Spermatozoa freezing recovered from dog epididymis (Canis familiares)

O presente estudo tem como objetivo avaliar o espermatozoide recuperado do epidídimo congelado/descongelado em diferentes diluidores. O experimento foi realizado no Laboratório de Reprodução Animal do Setor Palotina no período de julho de 2017 a julho de 2019. Um mínimo de 40 CTE (complexo testículo epidídimo) de cães foi obtido de animais orquiectomizados. A recuperação dos espermatozoides da cauda do epidídimo foi realizada pela técnica de flutuação e submetida ao teste de swin-up para remoção dos resíduos celulares e espermatozoides inviáveis. Após a avaliação da concentração e motilidade, os espermatozoides foram diluidos pelo método “One Step” em Tris gema e/ou citrato gema e logo envazados em palhetas de 0,25mL numa concentração de 25 x 106 de espermatozoides viáveis. Logo as mesmas permaneceram em estabilização por 2 horas a temperatura de 5°C. Após foram colocadas em vapor de nitrogênio por 15 minutos, e por fim, mergulhadas no nitrogênio líquido e armazenadas em botijão criobiológico. A descongelação foi realizada em banho maria a 37°C por um minuto, e após avaliou-se a motilidade e vigor em microscopia de Contraste de Fase 100x. Para avaliação da viabilidade espermática, foi utilizada a coloração vital Azul de Tripan/Giemsa. Na análise do sêmen descongelado, o diluente Tris-gema foi estatisticamente superior ao Citratogema nas variáveis motilidade, vigor e morfologia de espermatozoides epididimarios de cão. O presente estudo, mostra que é possível recuperar e preservar espermatozoides provenientes do epidídimo de canídeos utilizando meio crioprotetor a base de tris-gema.

The present study aims to evaluate sperm recovered from frozen / thawed epididymis in different extenders. The experiment was carried out in Animal Reproduction Laboratory at the Veterinary Hospital at the Palotina Sector from July 2017 to July 2019. A minimum of 40 ETC (epididymis testis complex) from dogs was obtained from orchiectomized animals. Epididymis tail sperm retrieval was performed by flotation technique and then submitted to the swin-up test to remove the unfeasible sperm and cellular waste. After evaluation of concentration and motility, the sperm were diluted by the “One Step” method in Tris yolk and / or citrate yolk and then packed in previously identified 0.25mL straws at a concentration of 25 x 106 viable sperm. Soon they remained in stabilization for 2 hours at 5 ° C. After that they were placed in nitrogen vapor for 15 minutes, and finally, dipped in liquid nitrogen and stored in cryogenic cylinder. The thawing was performed in a 37 ° C water bath for one minute, and then motility and vigor were evaluated by x100 magnification Phase Contrast microscopy. For sperm viability evaluation, the Tripan Blue/Giemsa vital stain was used. In the analysis of thawed semen, Tris-yolk extender was statistically superior to Yolk Citrate in the motility, vigor and morphology of dog epididymis sperm variables. The present study shows that it is possible to recovery and preserve sperm from the canid epididymis using tris-yolk cryoprotectant extender.

Cinética de espermatozoides criopreservados de cães obtidos por técnicas de recuperação epididimária / Kinetics of cryopreserved dog spermatozoa obtained by epididymal recovering techniques

Técnicas de coleta de espermatozoides epididimários são utilizadas em diversas espécies animais, sendo ferramentas de biotecnologias importantes aplicadas em casos de animais que precisam ser castrados ou que vieram a óbito. O objetivo deste trabalho foi avaliar a cinética de espermatozoides criopreservados de cães obtidos por meio de técnicas de recuperação epididimária. Foram coletados 30 complexos testículo-epidídimos (CTE) de cães saudáveis, sendo que cada CTE de determinado animal foi destinado para cada técnica utilizada, 15 direcionados para a técnica de recuperação de espermatozoides epididimários por fluxo retrógrado (FR) e 15 por flutuação (FL). Os CTE foram acondicionados em sacos plásticos identificados, contendo solução salina e levados ao Laboratório de Biotecnologia da Reprodução Animal da Universidade Federal do Piauí (LBRA/UFPI) para a realização da diluição e criopreservação espermática após a recuperação epididimária. A congelação foi realizada por meio de uma rampa manual, com as amostras refrigeradas a 5 °C, mantidas em vapor de nitrogênio por 5 minutos e, posteriormente, colocadas no botijão. A análise computadorizada do sêmen (CASA) nas amostras descongeladas foi realizada na Universidade Estadual do Ceará (UECE), sendo avaliados dez parâmetros seminais. Foi empregada a análise de variância, aplicando o teste de Tukey. Nessas amostras, houve diferença significativa quanto à motilidade progressiva entre as técnicas testadas e a motilidade total apresentou valores superiores a 30%, não havendo influência das técnicas nos demais parâmetros seminais. Concluise que a cinética de espermatozoides de cães obtidos por recuperação epididimária avaliados pelo CASA apresentou resultados satisfatórios após a criopreservação.(AU)

Epididymal sperm collection techniques are used in several animal species and are important biotechnology tools applied to animals that needed to be castrated or that died. The objective of this study was to evaluate the kinetics of cryopreserved dog sperm obtained by epididymal recovery techniques. Thirty testicular-epididymal complexes (CTE) were collected from healthy dogs, with each CTE of a given animal being assigned to each technique used, 15 of them directed to the retrograde flow epididymal sperm recovery technique and 15 by fluctuation technique. The CTE were placed in identified plastic bags, containing saline solution and taken to the Animal Reproduction Biotechnology Laboratory of the Federal University of Piauí (LBRA/UFPI) for sperm dilution and cryopreservation after epididymal recovery. The freezing was carried out using a manual ramp, with the samples refrigerated at 5 °C, maintained in nitrogen vapor exposition five minutes and, later, placed in the container. Computer Assisted Sperm Analysis (CASA) was performed in the thawed samples at the State University of Ceará (UECE) and ten seminal parameters were evaluated. Analysis of variance was applied by the Tukey test. In thawed samples, there was a significant difference in progressive motility between the tested techniques and total motility presented values greater than 30%, with no influence of the recovery technique on remaining parameters. It was concluded that the sperm kinetics of dogs obtained by epididymal recovery evaluated by CASA presented satisfactory results after cryopreservation.(AU)

Cinética de espermatozoides criopreservados de cães obtidos por técnicas de recuperação epididimária / Kinetics of cryopreserved dog spermatozoa obtained by epididymal recovering techniques

Técnicas de coleta de espermatozoides epididimários são utilizadas em diversas espécies animais, sendo ferramentas de biotecnologias importantes aplicadas em casos de animais que precisam ser castrados ou que vieram a óbito. O objetivo deste trabalho foi avaliar a cinética de espermatozoides criopreservados de cães obtidos por meio de técnicas de recuperação epididimária. Foram coletados 30 complexos testículo-epidídimos (CTE) de cães saudáveis, sendo que cada CTE de determinado animal foi destinado para cada técnica utilizada, 15 direcionados para a técnica de recuperação de espermatozoides epididimários por fluxo retrógrado (FR) e 15 por flutuação (FL). Os CTE foram acondicionados em sacos plásticos identificados, contendo solução salina e levados ao Laboratório de Biotecnologia da Reprodução Animal da Universidade Federal do Piauí (LBRA/UFPI) para a realização da diluição e criopreservação espermática após a recuperação epididimária. A congelação foi realizada por meio de uma rampa manual, com as amostras refrigeradas a 5 °C, mantidas em vapor de nitrogênio por 5 minutos e, posteriormente, colocadas no botijão. A análise computadorizada do sêmen (CASA) nas amostras descongeladas foi realizada na Universidade Estadual do Ceará (UECE), sendo avaliados dez parâmetros seminais. Foi empregada a análise de variância, aplicando o teste de Tukey. Nessas amostras, houve diferença significativa quanto à motilidade progressiva entre as técnicas testadas e a motilidade total apresentou valores superiores a 30%, não havendo influência das técnicas nos demais parâmetros seminais. Concluise que a cinética de espermatozoides de cães obtidos por recuperação epididimária avaliados pelo CASA apresentou resultados satisfatórios após a criopreservação.

Epididymal sperm collection techniques are used in several animal species and are important biotechnology tools applied to animals that needed to be castrated or that died. The objective of this study was to evaluate the kinetics of cryopreserved dog sperm obtained by epididymal recovery techniques. Thirty testicular-epididymal complexes (CTE) were collected from healthy dogs, with each CTE of a given animal being assigned to each technique used, 15 of them directed to the retrograde flow epididymal sperm recovery technique and 15 by fluctuation technique. The CTE were placed in identified plastic bags, containing saline solution and taken to the Animal Reproduction Biotechnology Laboratory of the Federal University of Piauí (LBRA/UFPI) for sperm dilution and cryopreservation after epididymal recovery. The freezing was carried out using a manual ramp, with the samples refrigerated at 5 °C, maintained in nitrogen vapor exposition five minutes and, later, placed in the container. Computer Assisted Sperm Analysis (CASA) was performed in the thawed samples at the State University of Ceará (UECE) and ten seminal parameters were evaluated. Analysis of variance was applied by the Tukey test. In thawed samples, there was a significant difference in progressive motility between the tested techniques and total motility presented values greater than 30%, with no influence of the recovery technique on remaining parameters. It was concluded that the sperm kinetics of dogs obtained by epididymal recovery evaluated by CASA presented satisfactory results after cryopreservation.

Efeito da adição de plasma seminal oriundo de animais de alta e baixa fertilidade na criopreservação de espermatozoides da cauda do epidídimo e do ejaculado de garanhões subférteis / Effect of seminal plasma addition from high and low fertility animals on the cryopreservation of epididymal tail and ejaculated sperm from subfertile stallions

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição de plasma seminal de garanhões de alta e baixa fertilidade sobre a congelabilidade e a viabilidade de espermatozoides do ejaculado (EJ) e do epidídimo (EP) de garanhões subférteis. Foram utilizados seis garanhões com histórico de subfertilidade. Após coleta, espermatozoides do ejaculado foram divididos em três alíquotas: BotuSêmen® (EJ-CT); plasma seminal de alta qualidade espermática (EJ-PS1); e plasma seminal de baixa qualidade espermática (EJ-PS2). O mesmo protocolo foi realizado com espermatozoides da cauda do epidídimo após orquiectomia (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Foram realizadas avaliações da cinética espermática pelo CASA e análises de integridade de membrana, acrossoma, fragmentação de DNA, capacitação espermática e peroxidação espermática por citometria de fluxo. Não foram observadas diferenças na cinética espermática entre EJ e EP, logo após a descongelação. Porém, foi observada maior (P<0,05) porcentagem de células com membranas plasmática e acrossomal íntegras nos grupos EP (EP-CT:31,7±7,5b; EP-PS1:35,2±7,0b; EP-PS2:33,9±7,2b) em comparação aos grupos EJ (EJ-CT:15,1±4,9a; EJ-PS1:11,7±4,5a; EJ-PS2:13,1±5,2a). Adicionalmente, foram observadas diferenças no índice de fragmentação de DNA (EJ-CT:2,6±0,6a; EJ-PS1:2,4±0,8a; EJ-PS2:3,0±0,8a; EP-CT:1,4±0,4b; EP-PS1:1,2±0,3b; EP-PS2:1,3±0,2b). Concluiu-se que a adição de 20% de plasma seminal, oriundo de animais férteis ou subférteis, previamente à congelação de espermatozoides epidídimários de animais subférteis não interfere na qualidade espermática.(AU)

The aim of this study was to compare the effect of the addition of seminal plasma from high and low fertility stallions on sperm viability of frozen-thawed sperm cells from ejaculate and from epididymal tail of subfertile stallions. Six stallions with a history of subfertility were used. After collection, ejaculate spermatozoa were divided into three aliquots: Botu-Semen® (EJ-CT); High-quality seminal plasma (EJ-PS1); Low-quality seminal plasma (EJ-PS2). The same was done with sperm cells from epididymis tail after orchiectomy (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Evaluations of sperm kinetics were assessed by CASA and membrane and acrosome integrity, DNA fragmentation, sperm capacitation and sperm peroxidation were assessed by flow cytometry. After thawing, no differences were observed between ejaculated sperm (EJ) and epididymal sperm (EP) in any CASA evaluations. However, higher (P< 0.05) percentage of cells with intact plasma and acrossomal membranes was observed in EP groups (EP-CT:31.7±7.5b; EP-PS1:35.2±7.0b; EP-PS2:33.9±7.2b) compared to EJ groups (EJ-CT:15.1±4.9a, EJ-PS1:11.7±4.5a, EJ-PS2:13.1±5,2a). In addition, differences in DNA fragmentation index were observed (EJ-CT:2.6±0.6a; EJ-PS1:2.4±0.8a; EJ-PS2:3.0±0.8a; CT:1.4±0.4b; EP-PS1:1.2±0.3b; EP-PS2:1.3±0.2b). It was concluded that the addition of 20% seminal plasma from fertile or subfertile animals prior to the freezing of epididymal spermatozoa from subfertile animals does not interfere in sperm quality.(AU)

Efeito da adição de plasma seminal oriundo de animais de alta e baixa fertilidade na criopreservação de espermatozoides da cauda do epidídimo e do ejaculado de garanhões subférteis / Effect of seminal plasma addition from high and low fertility animals on the cryopreservation of epididymal tail and ejaculated sperm from subfertile stallions

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição de plasma seminal de garanhões de alta e baixa fertilidade sobre a congelabilidade e a viabilidade de espermatozoides do ejaculado (EJ) e do epidídimo (EP) de garanhões subférteis. Foram utilizados seis garanhões com histórico de subfertilidade. Após coleta, espermatozoides do ejaculado foram divididos em três alíquotas: BotuSêmen® (EJ-CT); plasma seminal de alta qualidade espermática (EJ-PS1); e plasma seminal de baixa qualidade espermática (EJ-PS2). O mesmo protocolo foi realizado com espermatozoides da cauda do epidídimo após orquiectomia (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Foram realizadas avaliações da cinética espermática pelo CASA e análises de integridade de membrana, acrossoma, fragmentação de DNA, capacitação espermática e peroxidação espermática por citometria de fluxo. Não foram observadas diferenças na cinética espermática entre EJ e EP, logo após a descongelação. Porém, foi observada maior (P<0,05) porcentagem de células com membranas plasmática e acrossomal íntegras nos grupos EP (EP-CT:31,7±7,5b; EP-PS1:35,2±7,0b; EP-PS2:33,9±7,2b) em comparação aos grupos EJ (EJ-CT:15,1±4,9a; EJ-PS1:11,7±4,5a; EJ-PS2:13,1±5,2a). Adicionalmente, foram observadas diferenças no índice de fragmentação de DNA (EJ-CT:2,6±0,6a; EJ-PS1:2,4±0,8a; EJ-PS2:3,0±0,8a; EP-CT:1,4±0,4b; EP-PS1:1,2±0,3b; EP-PS2:1,3±0,2b). Concluiu-se que a adição de 20% de plasma seminal, oriundo de animais férteis ou subférteis, previamente à congelação de espermatozoides epidídimários de animais subférteis não interfere na qualidade espermática.(AU)

The aim of this study was to compare the effect of the addition of seminal plasma from high and low fertility stallions on sperm viability of frozen-thawed sperm cells from ejaculate and from epididymal tail of subfertile stallions. Six stallions with a history of subfertility were used. After collection, ejaculate spermatozoa were divided into three aliquots: Botu-Semen® (EJ-CT); High-quality seminal plasma (EJ-PS1); Low-quality seminal plasma (EJ-PS2). The same was done with sperm cells from epididymis tail after orchiectomy (EP-CT; EP-PS1; EP-PS2). Evaluations of sperm kinetics were assessed by CASA and membrane and acrosome integrity, DNA fragmentation, sperm capacitation and sperm peroxidation were assessed by flow cytometry. After thawing, no differences were observed between ejaculated sperm (EJ) and epididymal sperm (EP) in any CASA evaluations. However, higher (P< 0.05) percentage of cells with intact plasma and acrossomal membranes was observed in EP groups (EP-CT:31.7±7.5b; EP-PS1:35.2±7.0b; EP-PS2:33.9±7.2b) compared to EJ groups (EJ-CT:15.1±4.9a, EJ-PS1:11.7±4.5a, EJ-PS2:13.1±5,2a). In addition, differences in DNA fragmentation index were observed (EJ-CT:2.6±0.6a; EJ-PS1:2.4±0.8a; EJ-PS2:3.0±0.8a; CT:1.4±0.4b; EP-PS1:1.2±0.3b; EP-PS2:1.3±0.2b). It was concluded that the addition of 20% seminal plasma from fertile or subfertile animals prior to the freezing of epididymal spermatozoa from subfertile animals does not interfere in sperm quality.(AU)