Comparação entre diferentes concentrações de gema de ovo na qualidade de espermatozoides epididimários caninos resfriados a 4°C / Comparison between different egg yolk concentrations on canine epipdidymal spermatozoa cooled at 4ºC

The epididymal spermatozoa recovering allow reproduction even with the death of a breeder. Using aproper extender is important and ACP-106c®extender presented good results for canine ejaculate. Egg yolk hasbeen used as a protective membrane against thermal shock, being necessary to determine optimal concentrationfor dog epididymal spermatozoa using ACP-106c®. Thirteen pairs of epididymis were used and spermatozoawere recovered by epididymal tail compression by glass blade. ACP-106® was used as extender and the sampleswere divided into 3 different concentrations of egg yolk (0, 10 or 20%), then analyzes of motility (%) and vigour(0-5) were made at times 0, 60, 120 and 180 minutes as well as after 24 hours. There was no difference in theevaluation of motility and vigour between the three egg yolk concentrations. The concentration of 20% egg yolkshowed higher number of functional membrane.(AU)

Comparação entre diferentes concentrações de gema de ovo na qualidade de espermatozoides epididimários caninos resfriados a 4°C / Comparison between different egg yolk concentrations on canine epipdidymal spermatozoa cooled at 4ºC

The epididymal spermatozoa recovering allow reproduction even with the death of a breeder. Using aproper extender is important and ACP-106c®extender presented good results for canine ejaculate. Egg yolk hasbeen used as a protective membrane against thermal shock, being necessary to determine optimal concentrationfor dog epididymal spermatozoa using ACP-106c®. Thirteen pairs of epididymis were used and spermatozoawere recovered by epididymal tail compression by glass blade. ACP-106® was used as extender and the sampleswere divided into 3 different concentrations of egg yolk (0, 10 or 20%), then analyzes of motility (%) and vigour(0-5) were made at times 0, 60, 120 and 180 minutes as well as after 24 hours. There was no difference in theevaluation of motility and vigour between the three egg yolk concentrations. The concentration of 20% egg yolkshowed higher number of functional membrane.

Recovery of sperm after epididymal refrigeration from domestic cats using ACP-117c and Tris extenders / Recuperação de espermatozoides após refrigeração do epidídimo de gatos domésticos utilizando os diluidores ACP-117c e Tris

We aimed to compare fresh sperm and sperm cooled to 4ºC that had been recovered from the epididymides of cats using powdered coconut water (ACP-117c) and Tris extenders. Sixty epididymides were divided into 6 groups: 10 fresh epididymides were recovered using Tris (T0h); 10 were kept at 4°C/2h and recovered using Tris (T2h); 10 were kept at 4°C/4h and recovered using Tris (T4h); 10 fresh were recovered using ACP-117c (A0h); 10 were kept at 4°C/2h and recovered using ACP-117c (A2h), and 10 were kept at 4°C/4h and recovered using ACP-117c (A4h). The testis-epididymis complexes (TEC) control were not cooled. The others were cooled at 4°C for 2 or 4h. The epididymis was separated and the sperm was recovered by the modified flotation method. Sperm kinetic parameters were evaluated by a computer-system analysis, and vigor, viability, concentration, membrane function and morphology of the sperm were assessed under a light microscope. The progressive motility with ACP-117c declined after 2h of cooling, but did not differ between fresh and 4h. The vigor and membrane function were higher in A4h than A0h. The vigor at T2h and T4h were decreased compared to T0h. T0h was higher than A0h for vigor and sperm membrane function. However, after 4h of cooling, ACP-117c maintained a higher percentage of living cells. Feline epididymal sperm quality can be maintained to the degree necessary for artificial breeding programs following cooling and ACP-117c may be successfully used to recover cat sperm that have been cooled for up to 4h.(AU)

Objetivou-se comparar a qualidade de espermatozoides recuperados a fresco e após refrigeração a 4ºC do epidídimo de gatos domésticos utilizando-se os diluidores ACP-117c e Tris. Sessenta epidídimos foram distribuídos em seis grupos: 10 epidídimos a fresco com o Tris (T0h), 10 a 4°C/2h e recuperados com Tris (T2h), 10 a 4°C/4h e recuperados com Tris (T4h), 10 epidídimos a fresco com o ACP-117c (A0h), 10 a 4 °C/2h e recuperados com ACP-117c (A2h), 10 a 4°C/4h e recuperados com ACP-117c (A4h). Os complexos testículo-epidídimo (CTE) do controle não foram refrigerados. Os outros foram refrigerados a 4°C durante duas e quatro horas. Os epidídimos foram separados das demais estruturas, e os espermatozoides recuperados pela técnica de flutuação modificada. Os parâmetros cinéticos foram avaliados em um sistema computadorizado, e o vigor, a viabilidade, a concentração, a funcionalidade de membrana e a morfologia celular foram avaliados em microscopia de luz. A motilidade progressiva com ACP-117c declinou após duas horas de refrigeração, mas não diferiu entre a recuperação a fresco e após refrigeração por quatro horas. Vigor e integridade funcional da membrana celular foram significativamente superiores no grupo A4h em comparação ao A0h. O vigor espermático em T2h e T4h reduziu significativamente em comparação com T0h. T0h foi significativamente superior ao A0h quanto aos parâmetros de vigor e integridade funcional da membrana espermática, entretanto, após quatro horas de refrigeração, o ACP-117c apresentou um maior percentual de células vivas. Os espermatozoides epididimários de felinos domésticos conseguem manter a qualidade necessária para serem utilizados em programas de reprodução artificial após serem refrigerados e recuperados por meio da técnica de flutuação modificada, e o diluidor ACP-117c pode ser utilizado com sucesso para recuperação de células espermáticas refrigeradas de gatos por até quatro horas.(AU)

Recovery of sperm after epididymal refrigeration from domestic cats using ACP-117c and Tris extenders / Recuperação de espermatozoides após refrigeração do epidídimo de gatos domésticos utilizando os diluidores ACP-117c e Tris

We aimed to compare fresh sperm and sperm cooled to 4ºC that had been recovered from the epididymides of cats using powdered coconut water (ACP-117c) and Tris extenders. Sixty epididymides were divided into 6 groups: 10 fresh epididymides were recovered using Tris (T0h); 10 were kept at 4°C/2h and recovered using Tris (T2h); 10 were kept at 4°C/4h and recovered using Tris (T4h); 10 fresh were recovered using ACP-117c (A0h); 10 were kept at 4°C/2h and recovered using ACP-117c (A2h), and 10 were kept at 4°C/4h and recovered using ACP-117c (A4h). The testis-epididymis complexes (TEC) control were not cooled. The others were cooled at 4°C for 2 or 4h. The epididymis was separated and the sperm was recovered by the modified flotation method. Sperm kinetic parameters were evaluated by a computer-system analysis, and vigor, viability, concentration, membrane function and morphology of the sperm were assessed under a light microscope. The progressive motility with ACP-117c declined after 2h of cooling, but did not differ between fresh and 4h. The vigor and membrane function were higher in A4h than A0h. The vigor at T2h and T4h were decreased compared to T0h. T0h was higher than A0h for vigor and sperm membrane function. However, after 4h of cooling, ACP-117c maintained a higher percentage of living cells. Feline epididymal sperm quality can be maintained to the degree necessary for artificial breeding programs following cooling and ACP-117c may be successfully used to recover cat sperm that have been cooled for up to 4h.(AU)

Objetivou-se comparar a qualidade de espermatozoides recuperados a fresco e após refrigeração a 4ºC do epidídimo de gatos domésticos utilizando-se os diluidores ACP-117c e Tris. Sessenta epidídimos foram distribuídos em seis grupos: 10 epidídimos a fresco com o Tris (T0h), 10 a 4°C/2h e recuperados com Tris (T2h), 10 a 4°C/4h e recuperados com Tris (T4h), 10 epidídimos a fresco com o ACP-117c (A0h), 10 a 4 °C/2h e recuperados com ACP-117c (A2h), 10 a 4°C/4h e recuperados com ACP-117c (A4h). Os complexos testículo-epidídimo (CTE) do controle não foram refrigerados. Os outros foram refrigerados a 4°C durante duas e quatro horas. Os epidídimos foram separados das demais estruturas, e os espermatozoides recuperados pela técnica de flutuação modificada. Os parâmetros cinéticos foram avaliados em um sistema computadorizado, e o vigor, a viabilidade, a concentração, a funcionalidade de membrana e a morfologia celular foram avaliados em microscopia de luz. A motilidade progressiva com ACP-117c declinou após duas horas de refrigeração, mas não diferiu entre a recuperação a fresco e após refrigeração por quatro horas. Vigor e integridade funcional da membrana celular foram significativamente superiores no grupo A4h em comparação ao A0h. O vigor espermático em T2h e T4h reduziu significativamente em comparação com T0h. T0h foi significativamente superior ao A0h quanto aos parâmetros de vigor e integridade funcional da membrana espermática, entretanto, após quatro horas de refrigeração, o ACP-117c apresentou um maior percentual de células vivas. Os espermatozoides epididimários de felinos domésticos conseguem manter a qualidade necessária para serem utilizados em programas de reprodução artificial após serem refrigerados e recuperados por meio da técnica de flutuação modificada, e o diluidor ACP-117c pode ser utilizado com sucesso para recuperação de células espermáticas refrigeradas de gatos por até quatro horas.(AU)

Efeito da centrifugação e do líquido prostático homólogo na criopreservação de espermatozoides epididimários caninos / Effect of centrifugation and homologous prostatic fluid on canine epydidimal spermatozoa cryopreservation

Realizaram-se dois experimentos de criopreservação de espermatozoides epididimários caninos, investigando-se o efeito da centrifugação e da adição do líquido prostático sobre as características físicas do espermatozoide pós-descongelação. No experimento I, foi testado o efeito da centrifugação. As amostras congeladas sem centrifugação apresentaram pós-descongelação: motilidade total (MT) de 26,7±21,2 por cento, motilidade progressiva (MP) de 21,2±20,1 por cento e vigor espermático (V) de 2,2±1,3, e as congeladas após a centrifugação: MT de 23,9±17,9 por cento, MP de 20,6±17,4 por cento e V de 2,2±1,0. No teste de termorresistência, o período médio de duração com MT mínima de 10 por cento foi de 165±21,2 minutos sem centrifugação e de 77,5±63,6 minutos para as centrifugadas, indicando maior longevidade espermática das amostras não centrifugadas. No experimento II, foi avaliado o efeito da adição de líquido prostático homólogo no meio diluidor. As amostras congeladas sem líquido prostático no meio diluidor apresentaram MT de 13,3±13,1 por cento, MP de 10,9±11,4 por cento e V de 2,1±1,2, e as congeladas com líquido prostático MT de 14,1±12,6 por cento, MP de 12,2±11,6 por cento e V de 2,2±1,3. Os resultados sugerem que a centrifugação e a adição de 10 por cento de líquido prostático ao diluidor não tiveram efeito sobre as características físicas do espermatozoide epididimário canino pós-descongelamento.(AU)

The effect of centrifugation and the prostatic fluid addition were evaluated on the physical characteristics of the cryopreserved canine epydidimal spermatozoa. In the first experiment, the effect of centrifugation was analysed. The samples without centrifugation showed 26.7±21.2 percent of total motility (TM), 21.2±20.1 percent of progressive motility (PM), and 2.2±1.3 of intensity of movement (I). In addition, the samples after centrifugation showed 23.9±17.9 percent of TM, 20.6±17.4 percent of PM, and 2.2±1 of I. The mean time of samples duration, at least with 10 percent of total motility, was 165±21.2min without centrifugation and 77.5±63.6min with centrifugation during the thermal resistance test. It suggests a better spermatic longevity in samples without centrifugation. In the second experiment, the effect of the prostatic fluid addition was evaluated. The samples cryopreserved without prostatic fluid showed 13.3±13.1 percent, 10.9±11.4 percent, and 2.1±1.2 percent of TM, PM, and I, respectively. Furthermore, the samples with prostatic fluid showed 14.1±12.6 percent, 12.2±11.6 percent, and 2.2±1.3 percent of TM, PM, and I, respectively. These data support that centrifugation and 10 percent of prostatic fluid addition does not induce any effect on the physical characteristics of canine epydidimal spermatozoa cryopreserved.(AU)

Efeito da centrifugação e do líquido prostático homólogo na criopreservação de espermatozoides epididimários caninos / Effect of centrifugation and homologous prostatic fluid on canine epydidimal spermatozoa cryopreservation

Realizaram-se dois experimentos de crio preservação de espermatozoides epididimários caninos, investigando-se o efeito da centrifugação e da adição do líquido prostático sobre as características físicas do espermatozoide pós-descongelação. No experimento I, foi testado o efeito da centrifugação. As amostras congeladas sem centrifugação apresentaram pós-descongelação: motilidade total (MT) de 26,7±21,2 por cento, motilidade progressiva (MP) de 21,2±20,1 por cento e vigor espermático (V) de 2,2±1,3, e as congeladas após a centrifugação: MT de 23,9±17,9 por cento, MP de 20,6±17,4 por cento e V de 2,2±1,0. No teste de termorresistência, o período médio de duração com MT mínima de 10 por cento foi de 165±21,2 minutos sem centrifugação e de 77,5±63,6 minutos para as centrifugadas, indicando maior longevidade espermática das amostras não centrifugadas. No experimento II, foi avaliado o efeito da adição de líquido prostático homólogo no meio diluidor. As amostras congeladas sem líquido prostático no meio diluidor apresentaram MT de 13,3±13,1 por cento, MP de 10,9±11,4 por cento e V de 2,1±1,2, e as congeladas com líquido prostático MT de 14,1±12,6 por cento, MP de 12,2±11,6 por cento e V de 2,2±1,3. Os resultados sugerem que a centrifugação e a adição de 10 por cento de líquido prostático ao diluidor não tiveram efeito sobre as características físicas do espermatozoide epididimário canino pós-descongelamento.

The effect of centrifugation and the prostatic fluid addition were evaluated on the physical characteristics of the cryopreserved canine epydidimal spermatozoa. In the first experiment, the effect of centrifugation was analysed. The samples without centrifugation showed 26.7±21.2 percent of total motility (TM), 21.2±20.1 percent of progressive motility (PM), and 2.2±1.3 of intensity of movement (I). In addition, the samples after centrifugation showed 23.9±17.9 percent of TM, 20.6±17.4 percent of PM, and 2.2±1 of I. The mean time of samples duration, at least with 10 percent of total motility, was 165±21.2min without centrifugation and 77.5±63.6min with centrifugation during the thermal resistance test. It suggests a better spermatic longevity in samples without centrifugation. In the second experiment, the effect of the prostatic fluid addition was evaluated. The samples cryopreserved without prostatic fluid showed 13.3±13.1 percent, 10.9±11.4 percent, and 2.1±1.2 percent of TM, PM, and I, respectively. Furthermore, the samples with prostatic fluid showed 14.1±12.6 percent, 12.2±11.6 percent, and 2.2±1.3 percent of TM, PM, and I, respectively. These data support that centrifugation and 10 percent of prostatic fluid addition does not induce any effect on the physical characteristics of canine epydidimal spermatozoa cryopreserved.