Brassavola tuberculata Hook: in vitro growth and ex vitro establishment as a function of the micropropagation system and sucrose / Brassavola tuberculata Hook: crescimento in vitro e estabelecimento ex vitro em função do sistema de micropropagação e da sacarose

This study examines the in vitro growth and ex vitro establishment of Brassavola tuberculata in relation to the micropropagation system and sucrose concentration employed in the in vitro culture. A completely randomized experimental design was utilized, employing a 2 x 5 factorial arrangement. The experimental period began with seedlings cultivated in vitro for 180 days, which were subsequently transferred to Murashige and Skoog culture media containing sucrose concentrations of 0, 15, 30, 45, or 60 g L-1. The cultures were subjected to two micropropagation systems: conventional and gas exchange. After 90 days of in vitro cultivation, the plants were evaluated, transplanted into a substrate, and placed in a screened nursery for ex vitro cultivation. After 300 days of ex vitro cultivation, the survival and initial characteristics of the plants were assessed. The micropropagation system allowing gas exchange and sucrose concentrations up to 30 g L-1 enhanced the shoot and root growth of in vitro propagated plants. No noticeable anatomical differences were observed after 90 days of in vitro culture among the different sucrose concentrations and micropropagation systems used. In the ex vitro establishment, irrespective of sucrose concentration, the micropropagation system facilitating gas exchange positively influenced all evaluated characteristics.

Objetivou-se com este trabalho avaliar o crescimento in vitro e estabelecimento ex vitro de Brassavola tuberculata em função do sistema de micropropagação e da concentração de sacarose utilizados no cultivo in vitro. Foi utilizado o delineamento inteiramente casualizado e os tratamentos arranjados em esquema fatorial 2 x 5. Para o início do período experimental, foram utilizadas plântulas cultivadas in vitro por 180 dias, sendo transferidas para meios de cultivo Murashige e Skoog contendo 0, 15, 30, 45 ou 60 g L-1 de sacarose, e as culturas submetidas a dois sistemas de micropropagação: convencional ou com troca gasosa. Após 90 dias de cultivo in vitro, as plantas foram avaliadas e na sequência plantadas em substrato e acondicionadas em viveiro telado para o cultivo ex vitro. Após 300 dias de cultivo ex vitro, as plantas foram avaliadas quanto à sobrevivência e às mesmas características iniciais. A utilização do sistema de micropropagação que permite trocas gasosas, em conjunto com concentrações de sacarose de até 30 g L-1, proporcionou aumento no crescimento de parte aérea e do sistema radicular das plantas propagadas in vitro. As diferentes concentrações de sacarose e os sistemas de micropropagação utilizados não apresentaram diferenças anatômicas perceptíveis aos 90 dias de cultivo in vitro. Já no estabelecimento ex vitro, independente da utilização de sacarose, o sistema de micropropagação que permite trocas gasosas influenciou positivamente todas as características avaliadas.

Isolation and amplification of Anaplasma marginale in chicken embryo fibroblast cell culture / Isolamento e amplificação de Anaplasma marginale em cultivos celulares de fibroblastos de embriões de galinhas

Anaplasma marginale (A. marginale) is a worldwide pathogen that infects a variety of ruminants, but mostly cattle. The present study aimed to describe an isolation technique for A. marginale, using chicken embryo Þ broblast (CEF) cell culture. Blood and tick samples were collected from 5 calves from 2 to 3 months old, which were considered to be infected with A.marginale due to anemia, jaundiced mucous membranes, and prostration. DNA extraction and PCR were performed for diagnosis using blood and tick samples. All tick and blood samples tested positive in PCR. Additionally, ticks were crushed with the aid of a blender for inoculation in CEF cell culture. After inoculation, the cultures were kept at 37ºC and 5% CO2 for 15 days. The cell supernatant of cell cultures was again analyzed using PCR and Wright stain method to conÞ rm A. marginale isolation. Cell cultures tested positive in PCR, and the presence of the agent was demonstrated by Wright stain. Therefore, by using CEF cell culture it was possible to isolate and amplify the A. marginale in a concentration of 1.3 x 107.2 bodies per mL. The CEF cells are undemanding and easy to preserve; they are an option for isolation and production of A. marginale under laboratory conditions.(AU)

Anaplasma marginale (A. marginale) é um patógeno mundial que infecta uma variedade de ruminantes, mas principalmente bovinos. O presente estudo teve como objetivo descrever uma técnica de isolamento para A. marginale, utilizando cultivo celular de Þ broblastos de embriões (CFE) de galinhas. Para isso, foram coletadas amostras de sangue e de carrapatos de 5 bezerros, entre 2 e 3 meses de idade, os quais, devido a anemia, icterícia de mucosas e prostração, foram considerados supostamente infectados com A. marginale. Ethics Approval This study was approved by Credenciamento Institucional para Atividades com Animais em Ensino ou Pesquisa (CIAEP: 02.0420.2021). Consent to participate Not applicable Consent to publish Not applicable Data availability Not applicable Para o diagnóstico, realizaram-se extração de DNA e posterior PCR a partir das amostras de sangue e de carrapatos coletados. Todos os carrapatos e amostras de sangue foram positivas para o teste de PCR. Além disso, os carrapatos foram triturados com o auxílio de um liquidiÞ cador para inoculação em CFE. Após a inoculação, as culturas foram mantidas a 37ºC e a 5% de CO2 durante 15 dias. O sobrenadante celular das culturas foi novamente analisado por PCR e pela técnica de coloração de Wright para conÞ rmar o isolamento de Anaplasma marginale. As culturas celulares foram po sitivas por PCR, e a presença do agente foi comprovada por meio da coloração de Wright. Portanto, utilizando CFE, foi possível isolar e ampliÞ car o A. marginale em uma concentração de 1,3x107,2 bactérias por ml. As células da CEF são pouco exigentes, de fácil manutenção e uma boa opção para isolamento e produção de A. marginale em condição laboratorial.(AU)

Baru (Dipteryx alata Vogel), a woody species characteristic of Cerrado and its phytoremediation potential.

Baru (Dipteryx alata Vogel) is a native tree plant, widely distributed in Brazil, and has a growth and development in acidic soils like Cerrado, indicating a probable tolerance to adverse soil conditions, such as the high concentration of metals and the acidic pH. Due to the lack of information about the tolerance of this species to metals and the possibility of being used in the recovery of degraded areas and/or in phytoremediation, this work was developed with the objective of evaluating the in vitro germination and growth capacity of baru in medium supplemented with different concentrations of aluminum, iron, and manganese, as well as through chemical analysis, to determine the concentration of metals accumulated in cultivated plants in these conditions. The treatments consisted in different concentrations of metals: aluminum, Al3+ (0, 3.5, 7.0, 10.5, 21.0, or 42.0 mg L-1); iron, Fe3+ (0, 2.5, 4.9, 7.4, 14.7, or 29.4 mg L-1); and manganese, Mn2+ (0, 0.4, 0.8, 1.2, 2.4, or 4.8 mg L-1) added to the medium WPM. The tested values were based on using the lower concentration as the limit value, calculated based on risk to human health in accordance with CONAMA resolution 420/2009 for groundwater. At 60 days of cultivation, the percentage of germination, the average number of leaves, the length of the main root and the aerial part, the fresh and dry mass of the aerial part and the root system and the cations concentration Al3+, Fe3+ and Mn2+ in the plant biomass, were evaluated. The results showed that under the conditions in which the experiment was conducted, germination and in vitro growth of baru were not affected by the presence in high concentrations of any of the evaluated metals, with no differences in the percentage of germination and plant growth, as well as typical toxicity characteristics were not observed, such as changes in root morphology, chlorosis, or tissue oxidation. The absence of toxicity symptoms in baru plants, in the presence of Al3+, Fe3+, and Mn2+, indicate that the species is tolerant to these metals. The accumulation of Al3+ and Fe3+ in the plant biomass at the beginning of growth, simultaneously with the increase in the concentrations of these elements in the culture medium, indicates that this species can be used for phytoremediation, because it is a probable accumulator of these elements throughout its development, given the presence in significant concentrations of these elements also in the seeds.

Liver infusion tryptose (LIT): the best choice for growth, viability, and infectivity of Leishmania infantum parasites.

Leishmania spp. parasites have a complex biological cycle presenting basically two different morphological stages, the amastigote and promastigote forms. In vitro cultivation allows a more complete study of the biological aspects of these parasites, indicating better conditions for infection, immunoassay tests, drug evaluations, and vaccines. Thus, we evaluated the three most used culture media for Leishmania spp., Grace's insect cell culture medium (Grace's), liver infusion tryptose (LIT), and Schneider's insect medium (Schneider's), without supplementation or supplemented with fetal calf serum (FCS) and bovine serum albumin (Albumin) to evaluate the growth, viability, and infectivity of the L. infantum promastigotes. It was observed that promastigote forms have a better growth in LIT and Schneider's with or without FCS when compared to that in Grace's. The supplementation with albumin promoted greater viability of the parasites independent of the medium. For in vitro infection of J774.A1 macrophages using light microscopy and flow cytometry analyses, FCS-supplemented LIT and Grace's promoted higher percentage of infected macrophages and parasite load compared with Schneider's media. Taken together, our results demonstrated that the supplementation of LIT culture medium with FCS is the most suitable strategy to cultivate Leishmania infantum parasites enabling the maintenance of growth and infective parasites for research uses.

In vitro performance of Zebu (Bos indicus) and Taurus (Bos taurus) donor cow embryos / Desempenho de vacas doadoras zebuínas (Bos indicus) e taurinas (Bos taurus) na produção de embrião in vitro

In this study, the in vitro production of bovine embryos from zebu and taurine donors was compared. Cumulus-oocyte complexes (COCs) were obtained from 167 Bos taurus and 161 Bos indicus donors by ovum pick-up. COCs were classified based on their morphological quality, matured in incubators for 22 to 24 h in maturation medium, and then fertilized for 18 to 22 h. The zygotes were transferred to the culture medium for seven days. The embryos were classified as morula (OM), initial blastocyst (BI), blastocyst (BL), and expanded blastocyst (BX), before being transferred to synchronized recipient cows. Pregnancy was diagnosed 30-45 days post-transfer. The Bos indicus donors had a higher oocyte yield (n = 2556) than Bos taurus donors (n = 1903) (P = 0.008). The COCs from zebu donors had a better morphological quality than those from taurine donors (n = 689 vs. 444 for grade 1 COC, P < 0.0001; n = 681 vs. 509 for grade 2 COC, P = 0.010, for zebu and taurine donors, respectively). There were differences in embryo production percentages obtained from OM (0.44% from zebu and 6.42% from taurine, P = 0.017), BL (14.18% from zebu and 3.74% from taurine, P < 0.0001), and BX (81.43% from zebu and 75.13% from taurine, P < 0.0001). No significant difference was observed for embryo production from BI and pregnancy rate (P > 0.05). The Bos indicus cows showed greater oocyte recovery, number of viable oocytes, and production of viable embryos than the Bos taurus cows.(AU)

O objetivo foi avaliar a produção in vitro de embriões bovinos a partir de doadoras zebuína e taurina. Os complexos cumulus oócitos (COCs) foram obtidos de 167 doadoras Bos taurus e 161 Bos indicus, por meio de Ovum pick-up. Os COCs foram classificados quanto à qualidade morfológica, maturados em incubadora por 22 a 24h em meio de maturação, e encaminhados à fertilização entre 18 e 22h. Os zigotos foram transferidos para meio de cultivo, onde permaneceram durante sete dias. Os embriões foram classificados em mórula (MO), blastocisto inicial (BI), blastocisto (BL) e blastocisto expandido (BX), envasados em palhetas contendo meio de cultivo, e inovulados em receptoras sincronizadas. Após 30 e 45 dias da inovulação, realizou-se o diagnóstico de gestação. Os animais Bos indicus apresentaram maior produção oocitária (n = 2556) em comparação aos Bos taurus (n = 1903) (P = 0,008). Os COCs das doadoras zebu apresentaram melhor qualidade morfológica do que das doadoras taurina (n = 689 vs. 444 para COCs grau I, P < 0,0001; n = 681 vs. 509 para COCs grau II, P = 0,010, para doadoras zebu e taurina, respectivamente). Quanto à produção de embriões, houve diferença nas porcentagens obtidas de MO (0,44% zebuínas e 6,42% taurinas, P = 0,017), BL (14,18% zebuínas e 3,74% taurinas, P < 0,0001) e BX (81,43% zebuínas e 75,13% taurinas, P < 0,0001). Não foi observado diferença para BI e taxa de prenhez (P > 0,05). Os animais Bos indicus apresentaram maior recuperação oocitária e maior número de oócitos viáveis em comparação às vacas Bos taurus, como também, maior produção de embriões viáveis.(AU)

An Overview of Current Knowledge on in vitro Babesia Cultivation for Production of Live Attenuated Vaccines for Bovine Babesiosis in Mexico.

The instrumentation of the in vitro culture system has allowed researchers to learn more about the metabolic and growth behavior of Babesia spp. The various applications for in vitro cultivation of Babesia include obtaining attenuated strains for vaccination or pre-munition, the selection of pure lines with different degrees of virulence, studies on biological cloning, ultrastructure, antigen production for diagnostics, drug sensitivity assessments, and different aspects of parasite biology. Although there are different types of vaccines that have been tested against bovine babesiosis, so far, the only procedure that has offered favorable results in terms of protection and safety has been the use of live attenuated vaccines. In countries, such as Australia, Argentina, Brazil, Uruguay and Israel, this type of vaccine has been produced and used. The alternative to live vaccines other than splenectomized calf-derived biological material, has been the in vitro cultivation of Babesia bovis and B. bigemina. The development of in vitro culture of Babesia spp. strains in a defined medium has been the basis for the initiation of a source of parasites and exoantigens for a variety of studies on the biochemistry and immunology of babesiosis. The use of live immunogens from attenuated strains derived from in vitro culture is highlighted, which has been proposed as an alternative to control bovine babesiosis. In several studies performed in Mexico, this type of immunogen applied to susceptible cattle has shown the induction of protection against the experimental heterologous strain challenge with both, Babesia-infected blood and animal exposure to confrontations on tick vector-infested farms. The combination of transfection technologies and the in vitro culture system as integrated methodologies would eventually give rise to the generation of genetically modified live vaccines. However, a greater challenge faced now by researchers is the large-scale cultivation of Babesia parasites for mass production and vaccine distribution.

In vitro performance of Zebu (Bos indicus) and Taurus (Bos taurus) donor cow embryos / Desempenho de vacas doadoras zebuínas (Bos indicus) e taurinas (Bos taurus) na produção de embrião in vitro

In this study, the in vitro production of bovine embryos from zebu and taurine donors was compared. Cumulus-oocyte complexes (COCs) were obtained from 167 Bos taurus and 161 Bos indicus donors by ovum pick-up. COCs were classified based on their morphological quality, matured in incubators for 22 to 24 h in maturation medium, and then fertilized for 18 to 22 h. The zygotes were transferred to the culture medium for seven days. The embryos were classified as morula (OM), initial blastocyst (BI), blastocyst (BL), and expanded blastocyst (BX), before being transferred to synchronized recipient cows. Pregnancy was diagnosed 30-45 days post-transfer. The Bos indicus donors had a higher oocyte yield (n = 2556) than Bos taurus donors (n = 1903) (P = 0.008). The COCs from zebu donors had a better morphological quality than those from taurine donors (n = 689 vs. 444 for grade 1 COC, P 0.05). The Bos indicus cows showed greater oocyte recovery, number of viable oocytes, and production of viable embryos than the Bos taurus cows.

O objetivo foi avaliar a produção in vitro de embriões bovinos a partir de doadoras zebuína e taurina. Os complexos cumulus oócitos (COC’s) foram obtidos de 167 doadoras Bos taurus e 161 Bos indicus, por meio de Ovum pick-up. Os COC’s foram classificados quanto à qualidade morfológica, maturados em incubadora por 22 a 24h em meio de maturação, e encaminhados à fertilização entre 18 e 22h. Os zigotos foram transferidos para meio de cultivo, onde permaneceram durante sete dias. Os embriões foram classificados em mórula (MO), blastocisto inicial (BI), blastocisto (BL) e blastocisto expandido (BX), envasados em palhetas contendo meio de cultivo, e inovulados em receptoras sincronizadas. Após 30 e 45 dias da inovulação, realizou-se o diagnóstico de gestação. Os animais Bos indicus apresentaram maior produção oocitária (n = 2556) em comparação aos Bos taurus (n = 1903) (P = 0,008). Os COCs das doadoras zebu apresentaram melhor qualidade morfológica do que das doadoras taurina (n = 689 vs. 444 para COCs grau I, P 0,05). Os animais Bos indicus apresentaram maior recuperação oocitária e maior número de oócitos viáveis em comparação às vacas Bos taurus, como também, maior produção de embriões viáveis.

Application of tissue culture techniques in potato / Aplicação da cultura de tecidos vegetais em batata

Potato is the world's most important non-cereal food crop, and therefore, it is considered one of the major food sources for humankind. Its conventional propagation is asexual, by using the tuber, which allows the accumulation and dissemination of pathogens to new cultivation areas. This fact not only impairs the yield of this solanaceous plant, but also threatens the maintenance of genotypes for commercial or breeding purposes. Due to the impossibility of using botanical seed, conservation and exchange of germplasm of this species by means of conventional methods are not feasible. In all potato-producing regions, the demand for high-quality tubers has been paramount to ensure crops production. Thus, biotechnological techniques based on tissue culture are very important. Plant tissue culture offers alternative methods of propagation by in vitro techniques that provide production and multiplication of material with high sanity. Thus, this literature review summarizes the history and current situation of tissue culture techniques applied to potato crop. Besides clonal multiplication, this biotechnological tool makes available initial indexed material to breeding programs and certified seed potato, and facilitates the exchange and conservation of germplasm. For all these reasons, the use of these techniques in potato production chain directly benefits producers by providing high-quality propagules.

A batata é a cultura não-cereal mais importante do mundo e, portanto, uma das principais fontes de alimento para a humanidade. Sua multiplicação convencional é assexuada utilizando o próprio tubérculo, o que permite o acúmulo e a difusão de patógenos para novas áreas de cultivo, comprometendo a produtividade desta solanácea e ameaçando a manutenção de genótipos de interesse comercial ou para fins de melhoramento. Devido à inviabilidade de utilização das sementes botânicas, a conservação e o intercâmbio de germoplasma dessa espécie por meio de métodos convencionais torna-se inviável. Em todas as regiões produtoras de batata, a demanda por tubérculos de alta qualidade tem sido primordial para garantir a produção das lavouras. Dessa forma, técnicas biotecnológicas baseadas na cultura de tecidos são de suma importância. A cultura de tecidos vegetais oferece métodos alternativos de propagação através das técnicas in vitro que proporcionam a produção e multiplicação de material com alta sanidade. Dessa maneira, esta revisão visa sumarizar o histórico e panorama atual das aplicações da cultura de tecidos em batata. Além da multiplicação clonal, essa ferramenta biotecnológica fornece material inicial indexado para programas de melhoramento e de produção certificada de batata-semente e facilita o intercâmbio e a conservação de germoplasma. Por tudo isso, o emprego destas técnicas na cadeia produtiva da batata proporciona benefícios diretos aos produtores, uma vez que fornece material propagativo com elevada qualidade genética e fitossanitária.

Three-Dimensional Cellular Arrangement in Epithelial Ovarian Cancer Cell Lines TOV-21G and SKOV-3 is Associated with Apoptosis-Related miRNA Expression Modulation.

Epithelial ovarian cancer (EOC) is the most lethal gynecological malignancy, and the lack of chemoresistance biomarkers contributes to the poor prognosis. Cancer stem cells (CSC) have been investigated in EOC to understand its relationship with chemoresistance and recurrence. In this context, in vitro cultivation-models are important tools for CSC studies. MicroRNAs (miRNAs) play key roles in cancer, CSC regulation and apoptosis. Thus, this study aims to evaluate the tumorsphere model as CSC-enrichment method in EOC studies and investigate apoptosis-related miRNAs in tumorspheres-derived EOC cell lines. TOV-21G and SKOV-3 were cultured in monolayer and tumorspheres. Genetic profiles of cell lines were obtained using COSMIC database. CD24/CD44/CD146/CD177 and ALDH1 markers were evaluated in cell lines and tumorspheres-derived by flow cytometry. Eleven miRNAs were selected by in silico analysis for qPCR analysis. According to COSMIC, TOV-21G and SKOV-3 have eight and nine cancer-related mutations, respectively. TOV-21G showed a CD44+/high/CD24-/low/CD117-/low/CD146-/low/ALDH1low profile in both culture models; thus, no significant difference between cultivation models was identified. SKOV-3 showed a CD44+/high/CD24+/high/ CD117-/low/CD146-/low/ALDH1low profile in both culture models, although the tumorsphere model showed a significant increase in CD24+/high subpopulation (ovarian CSC-like). Among eleven miRNAs, we observed differences in miRNA expression between culture models. MiR-26a was overexpressed in TOV-21G tumorspheres, albeit downregulated in SKOV-3 tumorspheres. MiR-125b-5p, miR-17-5p and miR-221 was downregulated in tumorsphere model in both cell lines. Given that tumorsphere-derived SKOV-3 had a higher ratio of CD24+/high cells, we suggest that miR-26a, miR-125b-5p, miR-17-5p and miR-221 downregulation could be related to poor EOC prognosis.

Chemical sterilization of culture medium for in vitro multiplication of Cochlospermum regium / Esterilização química do meio de cultura para a multiplicação in vitro de Cochlospermum regium

ABSTRACT: Cochlospermum regium roots are used in popular medicine and its extract has diverse phytochemical molecules some with antimicrobial activity, consequently exposing this specie to genetic erosion risks. Thus, the objective of this study was to develop an in vitro multiplication protocol using chemical sterilization of culture medium. Therefore, explants obtained from apical buds of C. regium seedlings were inoculated into with 0.05mg L-1 NAA and 1mg L-1 BAP sterilized by chemical agent sodium hypochlorite (NaOCl) at 0.001%, 0.003% and 0.005% of active chlorine (Cl). Autoclaved culture medium was used as control. Result showed that the contamination by bacterial at 91 days of cultivation was significantly (P<0.05) controlled by autoclaving, 0.001% and 0.005% Cl. Moreover, the callus induction in the culture medium with 0.001% and 0.005% Cl was, respectively, 30% and 20% major than autoclaving sterilization. There was not significant (P<0.05) in the percentage of shoot induction among the sterilization preparations methods, and 65% of the explants survived in the presence of culture medium with 0.005% Cl. Histological analyses indicated that the Cl did not have any deleterious effects on morphogenic events. These results indicated that the chemical sterilization using 0.001% - 0.005% Cl controlled the fungal and bacterial multiplication in the culture medium and no affected the C. regium explants development, becoming it an alternative to autoclaving method.

RESUMO: As raízes de Cochlospermum regium são usadas na medicina popular, pois seu extrato apresenta diversas moléculas fitoquímicas, algumas com atividade antimicrobiana, que, consequentemente, expõe esta espécie ao risco de erosão genética. Assim, o objetivo deste estudo foi elaborar um protocolo de multiplicação in vitro para explantes de C. regium usando esterilização química do meio de cultura. Gemas apicais obtidas de plântulas de C. regium germinadas in vitro foram inoculadas em meio de cultivo MS suplementado com 0,05mg L-1 de ANA e 1mg L-1 de BAP e esterilizado pela adição do agente químico hipoclorito de sódio (NaOCl) nas concentrações de cloro ativo de 0,001%, 0,003% e 0,005%. O meio autoclavado foi utilizado como controle. Os resultados mostraram que a contaminação por bactérias aos 91 dias de cultivo foi significativamente (P<0,05) controlada pela autoclavagem, 0,001% e 0,005% de cloro ativo. Além disso, a indução de calos no meio de cultura com 0,001% e 0,005% de cloro ativo foi, respectivamente, 30% e 20% maior do que na esterilização por autoclavagem. Não houve diferença significativa (P<0,05) da porcentagem de indução de brotos entre os métodos de esterilização e 65% dos explantes sobreviveram na presença de 0,005% de cloro ativo. Análises histológicas indicaram que o cloro ativo não afetou os eventos morfogênicos. Os resultados indicaram que a esterilização química por meio do uso de 0,001% - 0,005% de cloro ativo auxiliou no controle da proliferação de bactérias e fungos no meio de cultura e não afetou o desenvolvimento dos explantes de C. regium, tornando-a uma alternativa em relação a autoclavagem.

Chemical sterilization of culture medium for in vitro multiplication of Cochlospermum regium

ABSTRACT: Cochlospermum regium roots are used in popular medicine and its extract has diverse phytochemical molecules some with antimicrobial activity, consequently exposing this specie to genetic erosion risks. Thus, the objective of this study was to develop an in vitro multiplication protocol using chemical sterilization of culture medium. Therefore, explants obtained from apical buds of C. regium seedlings were inoculated into with 0.05mg L-1 NAA and 1mg L-1 BAP sterilized by chemical agent sodium hypochlorite (NaOCl) at 0.001%, 0.003% and 0.005% of active chlorine (Cl). Autoclaved culture medium was used as control. Result showed that the contamination by bacterial at 91 days of cultivation was significantly (P 0.05) controlled by autoclaving, 0.001% and 0.005% Cl. Moreover, the callus induction in the culture medium with 0.001% and 0.005% Cl was, respectively, 30% and 20% major than autoclaving sterilization. There was not significant (P 0.05) in the percentage of shoot induction among the sterilization preparations methods, and 65% of the explants survived in the presence of culture medium with 0.005% Cl. Histological analyses indicated that the Cl did not have any deleterious effects on morphogenic events. These results indicated that the chemical sterilization using 0.001% - 0.005% Cl controlled the fungal and bacterial multiplication in the culture medium and no affected the C. regium explants development, becoming it an alternative to autoclaving method.

RESUMO: As raízes de Cochlospermum regium são usadas na medicina popular, pois seu extrato apresenta diversas moléculas fitoquímicas, algumas com atividade antimicrobiana, que, consequentemente, expõe esta espécie ao risco de erosão genética. Assim, o objetivo deste estudo foi elaborar um protocolo de multiplicação in vitro para explantes de C. regium usando esterilização química do meio de cultura. Gemas apicais obtidas de plântulas de C. regium germinadas in vitro foram inoculadas em meio de cultivo MS suplementado com 0,05mg L-1 de ANA e 1mg L-1 de BAP e esterilizado pela adição do agente químico hipoclorito de sódio (NaOCl) nas concentrações de cloro ativo de 0,001%, 0,003% e 0,005%. O meio autoclavado foi utilizado como controle. Os resultados mostraram que a contaminação por bactérias aos 91 dias de cultivo foi significativamente (P 0,05) controlada pela autoclavagem, 0,001% e 0,005% de cloro ativo. Além disso, a indução de calos no meio de cultura com 0,001% e 0,005% de cloro ativo foi, respectivamente, 30% e 20% maior do que na esterilização por autoclavagem. Não houve diferença significativa (P 0,05) da porcentagem de indução de brotos entre os métodos de esterilização e 65% dos explantes sobreviveram na presença de 0,005% de cloro ativo. Análises histológicas indicaram que o cloro ativo não afetou os eventos morfogênicos. Os resultados indicaram que a esterilização química por meio do uso de 0,001% - 0,005% de cloro ativo auxiliou no controle da proliferação de bactérias e fungos no meio de cultura e não afetou o desenvolvimento dos explantes de C. regium, tornando-a uma alternativa em relação a autoclavagem.

Chemical sterilization of culture medium for in vitromultiplication of Cochlospermum regium / Esterilização química do meio de cultura para a multiplicação in vitro de Cochlospermum regium

Cochlospermum regium roots are used in popular medicine and its extract has diverse phytochemical molecules some with antimicrobial activity, consequently exposing this specie to genetic erosion risks. Thus, the objective of this study was to develop an in vitro multiplication protocol using chemical sterilization of culture medium. Therefore, explants obtained from apical buds of C. regium seedlings were inoculated into with 0.05mg L-1 NAA and 1mg L-1 BAP sterilized by chemical agent sodium hypochlorite (NaOCl) at 0.001%, 0.003% and 0.005% of active chlorine (Cl). Autoclaved culture medium was used as control. Result showed that the contamination by bacterial at 91 days of cultivation was significantly (P<0.05) controlled by autoclaving, 0.001% and 0.005% Cl. Moreover, the callus induction in the culture medium with 0.001% and 0.005% Cl was, respectively, 30% and 20% major than autoclaving sterilization. There was not significant (P<0.05) in the percentage of shoot induction among the sterilization preparations methods, and 65% of the explants survived in the presence of culture medium with 0.005% Cl. Histological analyses indicated that the Cl did not have any deleterious effects on morphogenic events. These results indicated that the chemical sterilization using 0.001% - 0.005% Cl controlled the fungal and bacterial multiplication in the culture medium and no affected the C. regium explants development, becoming it an alternative to autoclaving method.(AU)

As raízes de Cochlospermum regium são usadas na medicina popular, pois seu extrato apresenta diversas moléculas fitoquímicas, algumas com atividade antimicrobiana, que, consequentemente, expõe esta espécie ao risco de erosão genética. Assim, o objetivo deste estudo foi elaborar um protocolo de multiplicação in vitro para explantes de C. regium usando esterilização química do meio de cultura. Gemas apicais obtidas de plântulas de C. regium germinadas in vitro foram inoculadas em meio de cultivo MS suplementado com 0,05mg L-1 de ANA e 1mg L-1 de BAP e esterilizado pela adição do agente químico hipoclorito de sódio (NaOCl) nas concentrações de cloro ativo de 0,001%, 0,003% e 0,005%. O meio autoclavado foi utilizado como controle. Os resultados mostraram que a contaminação por bactérias aos 91 dias de cultivo foi significativamente (P<0,05) controlada pela autoclavagem, 0,001% e 0,005% de cloro ativo. Além disso, a indução de calos no meio de cultura com 0,001% e 0,005% de cloro ativo foi, respectivamente, 30% e 20% maior do que na esterilização por autoclavagem. Não houve diferença significativa (P<0,05) da porcentagem de indução de brotos entre os métodos de esterilização e 65% dos explantes sobreviveram na presença de 0,005% de cloro ativo. Análises histológicas indicaram que o cloro ativo não afetou os eventos morfogênicos. Os resultados indicaram que a esterilização química por meio do uso de 0,001% - 0,005% de cloro ativo auxiliou no controle da proliferação de bactérias e fungos no meio de cultura e não afetou o desenvolvimento dos explantes de C. regium, tornando-a uma alternativa em relação a autoclavagem.(AU)

Influence of growth regulators on distribution of trichomes and the production of volatiles in micropropagated plants of Plectranthus ornatus

ABSTRACT The profile of volatile organic compounds, the glandular and non-glandular trichomes of Plectranthus ornatus, obtained by in vitro cultivation, was evaluated in plants grown in Murashide and Skoog medium supplemented with benylaminopurine at 4.5, 9.0, and 18.0 µM + naphthaleneacetic acid at 5.37 µM, kinetin at 4.7, 9.3 and 18.5 µM + naphthaleneacetic acid (5.37 µM) or Murashide and Skoog 0 medium (as a control). Scanning Electron Microscopy was performed on samples of the third leaf node of the 90 days old plants obtained from treatment with 4.5 or 9.0 µM benylaminopurine, and 4.7 or 9.3 µM kinetin. Headspace Solid Phase Micro-Extraction of the 30, 60 and 90 days old in vitro plants permitted to determinate by GC/MS the composition comprised of 62 compounds. The data were analyzed using Principal Component Analysis and Hierarchical Clustering Analysis and, the major constituents of these oils after treatment and aging were monoterpenes and sesquiterpenes. Morphoanatomical analysis of trichomes, by Scanning Electron Microscopy, enabled the identification of non-glandular trichomes and four types of glandular trichomes, which comprised capitate and peltate glandular trichomes that were distributed on both sides of the leaf. We observed that the regulators influenced qualitative and quantitative profiles of the volatile organic compounds and the number and distribution of hairs on the leaf surface.

INDUÇÃO E HISTOLOGIA DE EMBRIÕES SOMÁTICOS PRIMÁRIOS E SECUNDÁRIOS DO HÍBRIDO Phalaenopsis CLASSIC SPOTTED PINK (ORQUIDACEAE) / Induction and Histology of Primary and Secondary Somatic Embryos of Phalaenopsis Hybrid Classic Spotted Pink (Orquidaceae) / Inducción e histología de embriones somáticos primarios y secundarios del híbrido Classic Spotted Pink (Orquidaceae)

O presente trabalho teve como objetivos induzir a formação de embriões somáticos in vitro no híbrido Phalaenopsis Classic Spotted Pink, utilizando diferentes meios nutritivos e avaliar a morfologia interna desses embriões por meio de análises histológicas e histoquímicas. Folhas jovens de plantas cultivadas in vitro foram utilizadas como explantes para indução de embriões somáticos em diferentes meios nutritivos: New Dogashima Medium, contendo ANA (0,537μM) e BAP (4,440μM), acrescido de phytagel e com pH 5,8 (NDM) e o Murashige & Skoog com a metade da concentração dos sais, acrescido de ANA (0,537μM) e TDZ (13,621μM), gelificado com gelrite e o pH 5,2 (½ MS). Embriões somáticos primários foram obtidos aos 90 dias de cultivo no meio ½MS e foram transferidos para o mesmo meio para obtenção de embriões secundários. Os embriões somáticos primários e secundários foram subcultivados para meio MS com metade da concentração de sais, sem fitoregulador submetidos a fotoperíodo de 16 horas, o qual estimulou a produção de clorofila tanto nos embriões primários como secundários, promovendo o desenvolvimento desses em protocormos e posteriormente em plantas. As análises histológicas demonstraram que os embriões somáticos foram formados diretamente das camadas epidérmicas dos explantes, sem passar pela fase de calo, caracterizando embriogênese somática direta. Os métodos histoquímicos utilizados possibilitaram evidenciar a deposição de amido e lipídeos nas células embriogênicas em decorrência de mecanismos fisiológicos, permitindo o desenvolvimento dos embriões primários e secundários em plantas. Portanto, o meio ½ MS acrescido de ANA (0,537μM) e TDZ (13,621μM), gelificado com gelrite e o pH 5,2 promoveu a obtenção de embriões primários e secundários com capacidade para regenerar plantas apresentando características morfológicas semelhantes a planta matriz.

The present work had as objectives to induce the formation of somatic embryos in vitro on Phalaenopsis hybrid Classic Spotted Pink, using different nutrient medium and assess the internal morphology of these embryos by means of histological and histochemical analysis. Young leaves of plants grown in vitro were used as explants for induction of somatic embryos in different nutrient medium: New Dogashima Medium, containing ANA (0.537 μM) and BAP (4.440 μM) plus phytagel and with pH 5.8 (NDM) and the Murashige & Skoog with half the concentration of salts, plus NNA (0.537 μM) and TDZ (13.621 μM), jellied with gelrite and pH 5.2 (0.5 MS). Primary somatic embryos were obtained to 90 days of cultivation in half MS and have been transferred to the same means for obtaining of secondary embryos. The primary and secondary somatic embryos were subcultived for MS with half the concentration of salts, without fitoregulator subjected to photoperiod of 16 hours, which stimulated the production of chlorophyll in primary embryos as secondary, promoting the development of those in protocorms and later in plants. The histological analysis showed that the somatic embryos were formed directly from the epidermal layers of the explants, without going through the phase of callus, featuring direct somatic embryogenesis. The histochemical methods used made it possible to highlight the deposition of starch and lipids in cells embriogenics as a result of physiological mechanisms, enabling the development of primary and secondary embryos in plants. Therefore, the medium 0.5 MS Plus ANA (0.537 μM) and TDZ (13.621 μM), jellied with gelrite and pH 5.2 promoted to obtain primary and secondary embryos with ability to regenerate plants showing morphological similar the mother plant.

El presente trabajo tuvo como objetivos inducir la formación de embriones somáticos in vitro en el híbrido Phalaenopsis Classic Spotted Pink, utilizando diferentes medios nutritivos, y evaluar la morfología interna de estos embriones mediante análisis histológico e histoquímico. Hojas jóvenes de plantas cultivadas in vitro se utilizaron como explantes para la inducción de embriones somáticos en diferentes medios nutritivos: New Dogashima Medium, contenido de ANA (0.537 mM) y BAP (4.440 μM) además de phytagel y con pH 5.8 (NDM) y el Murashige Skoog con la mitad de la concentración de sales, además de ANA (0.537 μM) y TDZ (13.621 μM), gelificado gelrite y pH 5.2 (½ MS). Se obtuvieron embriones somáticos primarios a los 90 días de cultivo en el medio ½ MS y a estos se les transfirió al mismo medio (½ MS) para la obtención de embriones secundarios. Los embriones somáticos primarios y secundarios fueron subcultivados para MS con la mitad de la concentración de sales, sin reguladores de crecimiento y sometidos a fotoperiodo de 16 horas, lo que estimuló la producción de clorofila tanto en los embriones primarios como en los secundarios, promoviendo el desarrollo de los protocormos y más tarde en las plantas. Los análisis histológicos demostraron que los embriones somáticos fueron formados directamente en las capas epidérmicas de los explantes, sin pasar por la fase de callo, vía embriogénesis somática directa. Los métodos histoquímicos hicieron posible destacar la deposición de almidón y lípidos en las células embriogénicas como resultado de mecanismos fisiológicos, que permiten el desarrollo de los embriones primarios y secundarios en las plantas. Por lo tanto, el medio ½ MS contenido de ANA (0.537 μM) y TDZ (13.621 μM), con gelrite y pH 5.2 permitió obtener embriones primarios y secundarios con capacidad para regenerar plantas con caracteres morfológicos similares a los dela planta matriz.

Light in intermediate acclimatization of in vitro germinated seedlings of Dendrobium phalaenopsis Deang Suree / Luz na aclimatização intermediária de mudas germinadas in vitro de Dendrobium phalaenopsis Deang Suree

The success in micropropagation of Dendrobium phalaenopsis Deang Suree is high, but when transplanted into the greenhouse, their survival is minimal. To increase survival in production in the present study it was evaluated the effect of intermediate acclimatization for 30 days in a grow room utilizing the following luminosity conditions: 1- white fluorescent light (B) (18.9µmol m-2 s-1); 2- white fluorescent light + red fluorescent light (GRO-LUX(r)) (BV) (14.85µmol m-2 s-1); 3- red fluorescent light (GRO-LUX(r)) (V) (9.45µmol m-2 s-1) and the control plants were accommodated directly in a greenhouse (162.0µmol m-2 s-1). After this the leaves were characterized anatomically and the plants transferred to the control greenhouse. It was evaluated survival percentage and final number of roots, and calculated the relations between the final and initial values of fresh weight, number of leaves, length and diameter of the largest pseudo bulb, number of pseudo bulbs and longest root length. Only plants submitted to red light, were statistically better than the control in relation to the survival percentage and in relation to fresh weight, while the control showed a higher number of roots that plants acclimatized in this luminosity conditions. Intermediate acclimatization, using red light or red + white light, is recommended for D. phalaenopsis Deang Suree.

O sucesso na micropropagação de Dendrobium phalaenopsis Deang Suree é alto, porém, quando transplantado para o viveiro, sua sobrevivência é mínima. Com o intuito de aumentar a sobrevivência na produção, no presente trabalho, avaliou-se o efeito da aclimatização intermediária, por 30 dias em sala de crescimento, sob as seguintes condições de luminosidade: 1- luz fluorescente branca (18,9µmol m-2 s-1); 2- luz fluorescente branca + luz fluorescente vermelha (14,85µmol m-2 s-1); e 3- luz fluorescente vermelha (9,45µmol m-2 s-1), o controle foi acondicionado diretamente em viveiro coberto (162,0µmol m-2 s-1). Na sequência, as folhas foram caracterizadas anatomicamente e as plantas foram transferidas para o viveiro que continha o controle. Foi avaliada a porcentagem de sobrevivência e o número final de raízes, sendo calculadas também as relações entre os valores finais e iniciais de massa fresca, número de folhas, comprimento e diâmetro do maior pseudobulbo, número de pseudobulbos e comprimento da maior raiz das plantas aclimatizadas. Apenas as plantas submetidas à luz vermelha foram estatisticamente superiores ao controle, em relação à porcentagem de sobrevivência e relação de massa fresca, enquanto que o controle apresentou maior número de raízes que plantas aclimatizadas nessa condição de luminosidade. Aclimatização intermediária, utilizando luz vermelha ou a luz vermelha + branca, é recomendada para D. phalaenopsis Deang Suree.

Light in intermediate acclimatization of in vitro germinated seedlings of Dendrobium phalaenopsis Deang Suree / Luz na aclimatização intermediária de mudas germinadas in vitro de Dendrobium phalaenopsis Deang Suree

The success in micropropagation of Dendrobium phalaenopsis Deang Suree is high, but when transplanted into the greenhouse, their survival is minimal. To increase survival in production in the present study it was evaluated the effect of intermediate acclimatization for 30 days in a grow room utilizing the following luminosity conditions: 1- white fluorescent light (B) (18.9µmol m-2 s-1); 2- white fluorescent light + red fluorescent light (GRO-LUX(r)) (BV) (14.85µmol m-2 s-1); 3- red fluorescent light (GRO-LUX(r)) (V) (9.45µmol m-2 s-1) and the control plants were accommodated directly in a greenhouse (162.0µmol m-2 s-1). After this the leaves were characterized anatomically and the plants transferred to the control greenhouse. It was evaluated survival percentage and final number of roots, and calculated the relations between the final and initial values of fresh weight, number of leaves, length and diameter of the largest pseudo bulb, number of pseudo bulbs and longest root length. Only plants submitted to red light, were statistically better than the control in relation to the survival percentage and in relation to fresh weight, while the control showed a higher number of roots that plants acclimatized in this luminosity conditions. Intermediate acclimatization, using red light or red + white light, is recommended for D. phalaenopsis Deang Suree.(AU)

O sucesso na micropropagação de Dendrobium phalaenopsis Deang Suree é alto, porém, quando transplantado para o viveiro, sua sobrevivência é mínima. Com o intuito de aumentar a sobrevivência na produção, no presente trabalho, avaliou-se o efeito da aclimatização intermediária, por 30 dias em sala de crescimento, sob as seguintes condições de luminosidade: 1- luz fluorescente branca (18,9µmol m-2 s-1); 2- luz fluorescente branca + luz fluorescente vermelha (14,85µmol m-2 s-1); e 3- luz fluorescente vermelha (9,45µmol m-2 s-1), o controle foi acondicionado diretamente em viveiro coberto (162,0µmol m-2 s-1). Na sequência, as folhas foram caracterizadas anatomicamente e as plantas foram transferidas para o viveiro que continha o controle. Foi avaliada a porcentagem de sobrevivência e o número final de raízes, sendo calculadas também as relações entre os valores finais e iniciais de massa fresca, número de folhas, comprimento e diâmetro do maior pseudobulbo, número de pseudobulbos e comprimento da maior raiz das plantas aclimatizadas. Apenas as plantas submetidas à luz vermelha foram estatisticamente superiores ao controle, em relação à porcentagem de sobrevivência e relação de massa fresca, enquanto que o controle apresentou maior número de raízes que plantas aclimatizadas nessa condição de luminosidade. Aclimatização intermediária, utilizando luz vermelha ou a luz vermelha + branca, é recomendada para D. phalaenopsis Deang Suree.(AU)

Light in intermediate acclimatization of in vitro germinated seedlings of Dendrobium phalaenopsis Deang Suree / Luz na aclimatização intermediária de mudas germinadas in vitro de Dendrobium phalaenopsis Deang Suree

The success in micropropagation of Dendrobium phalaenopsis Deang Suree is high, but when transplanted into the greenhouse, their survival is minimal. To increase survival in production in the present study it was evaluated the effect of intermediate acclimatization for 30 days in a grow room utilizing the following luminosity conditions: 1- white fluorescent light (B) (18.9;mol m-2 s-1); 2- white fluorescent light + red fluorescent light (GRO-LUX(r)) (BV) (14.85;mol m-2 s-1); 3- red fluorescent light (GRO-LUX(r)) (V) (9.45;mol m-2 s-1) and the control plants were accommodated directly in a greenhouse (162.0;mol m-2 s-1). After this the leaves were characterized anatomically and the plants transferred to the control greenhouse. It was evaluated survival percentage and final number of roots, and calculated the relations between the final and initial values of fresh weight, number of leaves, length and diameter of the largest pseudo bulb, number of pseudo bulbs and longest root length. Only plants submitted to red light, were statistically better than the control in relation to the survival percentage and in relation to fresh weight, while the control showed a higher number of roots that plants acclimatized in this luminosity conditions. Intermediate acclimatization, using red light or red + white light, is recommended for D. phalaenopsis Deang Suree.

O sucesso na micropropaga;;o de Dendrobium phalaenopsis Deang Suree ; alto, por;m, quando transplantado para o viveiro, sua sobreviv;ncia ; m;nima. Com o intuito de aumentar a sobreviv;ncia na produ;;o, no presente trabalho, avaliou-se o efeito da aclimatiza;;o intermedi;ria, por 30 dias em sala de crescimento, sob as seguintes condi;;es de luminosidade: 1- luz fluorescente branca (18,9;mol m-2 s-1); 2- luz fluorescente branca + luz fluorescente vermelha (14,85;mol m-2 s-1); e 3- luz fluorescente vermelha (9,45;mol m-2 s-1), o controle foi acondicionado diretamente em viveiro coberto (162,0;mol m-2 s-1). Na sequ;ncia, as folhas foram caracterizadas anatomicamente e as plantas foram transferidas para o viveiro que continha o controle. Foi avaliada a porcentagem de sobreviv;ncia e o n;mero final de ra;zes, sendo calculadas tamb;m as rela;;es entre os valores finais e iniciais de massa fresca, n;mero de folhas, comprimento e di;metro do maior pseudobulbo, n;mero de pseudobulbos e comprimento da maior raiz das plantas aclimatizadas. Apenas as plantas submetidas ; luz vermelha foram estatisticamente superiores ao controle, em rela;;o ; porcentagem de sobreviv;ncia e rela;;o de massa fresca, enquanto que o controle apresentou maior n;mero de ra;zes que plantas aclimatizadas nessa condi;;o de luminosidade. Aclimatiza;;o intermedi;ria, utilizando luz vermelha ou a luz vermelha + branca

Culture media used in the micropropagation of orchids hybrids / Meios de cultura utilizados na micropropagaçãode híbridos de orquídeas

In orchid cultivation, tissue culture has been an important and effective tool for obtaining good quality seedlings on a large scale and within a short period of time. This study aims to evaluate culture media on the in vitro growth and development of orchid hybrids. Seedlings 1-1.5 cm long, deriving from in vitro germination of seeds, were inoculated in 250 mL flasks containing 50 mL of culture medium, with salts from the media where each of them were treated. Treatments consisted of applying culture media (MS; DSD1; Knudson; B5; and WPM), combined with 5 orchid hybrids (CW1, CW2, CW3, CI e BLC). The media were added 2 g L-1 of activated charcoal and solidified with 5 g L-1 of agar, and their pH was adjusted to 5.8 ± 0.1, before autoclaving at 121C and at 1.1 atm for 20 minutes. After sterilization of media, seedlings were inoculated in a laminar flow chamber and then kept in a growth room at the temperature of 25 ± 1ºC, with photoperiod of 16 h and irradiance of 32 ?mol.m2.s1. The experimental design was completely randomized, in a factorial 5 x 5 scheme, containing 6 seedlings per repetition. After 120 days, we evaluated root number, shoot number, leaf and root length, and fresh root weight. In in vitro cultivation of orchids, the media standing out are MS and DSD1 and the hybrids CI, CW1, and BLC.(AU)

No cultivo de orquídeas, a cultura de tecidos tem se mostrado ferramenta importante e eficiente na obtenção de mudas de qualidade em larga escala e em curto espaço de tempo. Objetivou-se avaliar meios de cultura no crescimento e desenvolvimento de híbridos de orquídeas em cultivo in vitro. As plântulas com 1-1,5 cm de comprimento, oriundas da germinação in vitro de sementes, foram inoculadas em frascos de 250 mL, contendo 50 mL de meio de cultura, com sais dos meios de seu respectivo tratamento. Os tratamentos consistiram na aplicação de meios de cultivo (MS; DSD1; Knudson; B5 e WPM), combinados com cinco híbridos de orquídeas (CW1, CW2, CW3, CI e BLC). Os meios foram acrescidos de 2 g L-1 de carvão ativado e solidificados com 5 g L-1 de ágar, sendo seus pHs ajustados para 5,8±0,1, antes da autoclavagem a 121ºC e a 1,1 atm por 20 minutos. Após esterilização dos meios, as plântulas foram inoculadas em câmara de fluxo laminar e posteriormente mantidas em sala de crescimento com temperatura de 25ºC±1, fotoperíodo de 16 horas e irradiância de 32 ?mol.m2.s1. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial 5x5, contendo 6 plântulas por repetição. Após 120 dias, avaliaram-se número raízes, número de brotos, comprimento das folhas e das raízes e biomassa fresca de raízes. No cultivo in vitro de orquídeas, os meios que se destacam são o MS e DSD1, e os híbridos CI, CW1 e BLC.(AU)

Culture media used in the micropropagation of orchids hybrids / Meios de cultura utilizados na micropropagaçãode híbridos de orquídeas

In orchid cultivation, tissue culture has been an important and effective tool for obtaining good quality seedlings on a large scale and within a short period of time. This study aims to evaluate culture media on the in vitro growth and development of orchid hybrids. Seedlings 1-1.5 cm long, deriving from in vitro germination of seeds, were inoculated in 250 mL flasks containing 50 mL of culture medium, with salts from the media where each of them were treated. Treatments consisted of applying culture media (MS; DSD1; Knudson; B5; and WPM), combined with 5 orchid hybrids (CW1, CW2, CW3, CI e BLC). The media were added 2 g L-1 of activated charcoal and solidified with 5 g L-1 of agar, and their pH was adjusted to 5.8 ± 0.1, before autoclaving at 121C and at 1.1 atm for 20 minutes. After sterilization of media, seedlings were inoculated in a laminar flow chamber and then kept in a growth room at the temperature of 25 ± 1ºC, with photoperiod of 16 h and irradiance of 32 ?mol.m2.s1. The experimental design was completely randomized, in a factorial 5 x 5 scheme, containing 6 seedlings per repetition. After 120 days, we evaluated root number, shoot number, leaf and root length, and fresh root weight. In in vitro cultivation of orchids, the media standing out are MS and DSD1 and the hybrids CI, CW1, and BLC.

No cultivo de orquídeas, a cultura de tecidos tem se mostrado ferramenta importante e eficiente na obtenção de mudas de qualidade em larga escala e em curto espaço de tempo. Objetivou-se avaliar meios de cultura no crescimento e desenvolvimento de híbridos de orquídeas em cultivo in vitro. As plântulas com 1-1,5 cm de comprimento, oriundas da germinação in vitro de sementes, foram inoculadas em frascos de 250 mL, contendo 50 mL de meio de cultura, com sais dos meios de seu respectivo tratamento. Os tratamentos consistiram na aplicação de meios de cultivo (MS; DSD1; Knudson; B5 e WPM), combinados com cinco híbridos de orquídeas (CW1, CW2, CW3, CI e BLC). Os meios foram acrescidos de 2 g L-1 de carvão ativado e solidificados com 5 g L-1 de ágar, sendo seus pHs ajustados para 5,8±0,1, antes da autoclavagem a 121ºC e a 1,1 atm por 20 minutos. Após esterilização dos meios, as plântulas foram inoculadas em câmara de fluxo laminar e posteriormente mantidas em sala de crescimento com temperatura de 25ºC±1, fotoperíodo de 16 horas e irradiância de 32 ?mol.m2.s1. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial 5x5, contendo 6 plântulas por repetição. Após 120 dias, avaliaram-se número raízes, número de brotos, comprimento das folhas e das raízes e biomassa fresca de raízes. No cultivo in vitro de orquídeas, os meios que se destacam são o MS e DSD1, e os híbridos CI, CW1 e BLC.

Multiplicação de abacaxizeiros ornamentais em diferentes concentrações de bap e períodos de avaliação do desenvolvimento in vitro / Multiplication of ornamental pineapple in different concentrations of bap and periods evaluation of development in vitro

O mercado mundial de flores tem apresentando grande destaque econômico nos últimos anos. Apesar do estabelecimento das técnicas de micropropagação, melhorias no protocolo ainda são necessárias. Neste sentido, objetivou-se com o presente trabalho avaliar a multiplicação in vitro das espécies de abacaxi ornamental Ananas comosus var. bracteatus e A. comosus var. erectifolius em diferentes períodos de avaliação e concentrações de BAP. Foram utilizados como explantes gemas axilares de abacaxizeiro ornamental. Utilizou-se delineamento experimental inteiramente casualizado, composto de 16 tratamentos com 5 repetições e fatorial 2x4x2, sendo um explante por tubo de ensaio. Para o número de folhas produzidas, a variedade erectifolius foi mais eficiente que a bracteatus; na avaliação realizada aos 60 dias, o número de folhas foi 2 vezes superior aos 30 dias na concentração de 1 mg.L-1 de BAP. A variedade erectifolius apresentou folhas mais compridas na concentração de 1 mg.L-1 de BAP. O comprimento das folhas diminuiu com o aumento da concentração de BAP. O número de raízes produzidas não foi influenciado pela variedade, nem pelo período de avaliação. A variedade erectifolius apresentou maior comprimento de raiz principal que a bracteatus na ausência de BAP aos 60 dias. A concentração de 3 mg.L-1 de BAP foi mais eficiente na formação de brotos. A variedade bracteatus aos 60 dias apresentou a maior formação de brotos em abacaxizeiro ornamental.

The world market for flowers is showing great economic prominence in recent years. Despite the establishment of micropropagation techniques, improvements are still needed in the protocol. In this sense, the aim of the present study was to evaluate the in vitro multiplication of species of ornamental pineapple Ananas comosus var. bracteatus and A. comosus var. erectifolius at different evaluation periods and concentrations of BAP. Were used as explants axillary buds of ornamental pineapple. We used a completely randomized design, consisting of 16 treatments with 5 replicates and 2x4x2 factorial design, with one explant per tube. For leaf number, variety erectifolius was more efficient than bracteatus; evaluation performed 60 days, the number of leaves was two times higher than at 30 days at the concentration of 1 mg l-1 BAP. The variety erectifolius presented leaves longer in the concentration of 1 mg L-1 BAP. The length of the leaves decreased with increasing concentration of BAP. The number of roots produced was not influenced by the variety, or the evaluation period. The variety erectifolius showed greater root length main bracteatus that in the absence of BAP at 60 days. The concentration of 3 mg L-1 BAP was more effective in the formation of shoots. The variety bracteatus at 60 days showed the highest shoot formation in ornamental pineapple.