RESUMO
A integridade do DNA espermático está intimamente relacionada com a fertilidade. Técnicas queavaliam o DNA espermático possuem grande importância e potencial de serem aplicadas nas rotinas dasavaliações andrológicas. No entanto, são necessários maiores conhecimentos sobre as técnicas e seus princípiospara permitir que sejam empregadas apropriadamente de acordo com os objetivos e resultados esperados. Dessaforma, assim como abordado na Parte 1, nesta Parte 2 serão abordadas técnicas de avaliação do DNAespermático: TUNEL, laranja de acridina e Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA). A técnica de TUNELfundamenta-se na adição de nucleotídeos modificados marcados com fluorescência às fitas fragmentadas. Atécnica avalia, portanto, diretamente a fragmentação de DNA da amostra. A sonda laranja de acridina é capaz dediferenciar, por meio de diferentes colorações, o DNA fragmentado do não fragmentado. Já a técnica de SCSAbaseia-se na imposição de um desafio ao espermatozoide; esta técnica avalia a susceptibilidade dosespermatozoides à fragmentação de DNA, sendo, portanto, uma avaliação indireta. A presente revisão permiteexpor a opinião dos autores sobre as diferentes técnicas e suas aplicações, mostrando o potencial emprego delasnos exames de rotina e nas pesquisas.(AU)
Sperm DNA integrity is directly related to male fertility. Techniques to assess sperm DNA are importantand have potential to be applied in routine evaluation of semen. However, the techniques and principles need tobe further studied to apply they correctly and to get relevant results. Thus, as discussed in Part 1, Part 2 willaddress evaluation techniques of sperm DNA: TUNEL, acridine orange and Sperm Chromatin Structure Assay(SCSA). TUNEL is based on addition of modified nucleotides labeled with fluorescence to fragmented tapesevaluating, therefore, directly, the DNA fragmentation of the sample. Acridine orange differentiates fragmentedDNA by different colors. On the other hand, SCSA are based on the imposition of a challenge to sperm. Thus,this technique assesses the susceptibility of sperm DNA fragmentation constituting indirect assessment. Thereview allows showing opinion of the authors about different techniques and their applications. Therefore,potential use of these techniques in routine exams and researches are addressed.(AU)
Assuntos
Animais , Fragmentação do DNA , Indução Embrionária , Laranja de Acridina/administração & dosagem , Laranja de Acridina/análiseRESUMO
A integridade do DNA espermático está intimamente relacionada com a fertilidade. Técnicas queavaliam o DNA espermático possuem grande importância e potencial de serem aplicadas nas rotinas dasavaliações andrológicas. No entanto, são necessários maiores conhecimentos sobre as técnicas e seus princípiospara permitir que sejam empregadas apropriadamente de acordo com os objetivos e resultados esperados. Dessaforma, assim como abordado na Parte 1, nesta Parte 2 serão abordadas técnicas de avaliação do DNAespermático: TUNEL, laranja de acridina e Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA). A técnica de TUNELfundamenta-se na adição de nucleotídeos modificados marcados com fluorescência às fitas fragmentadas. Atécnica avalia, portanto, diretamente a fragmentação de DNA da amostra. A sonda laranja de acridina é capaz dediferenciar, por meio de diferentes colorações, o DNA fragmentado do não fragmentado. Já a técnica de SCSAbaseia-se na imposição de um desafio ao espermatozoide; esta técnica avalia a susceptibilidade dosespermatozoides à fragmentação de DNA, sendo, portanto, uma avaliação indireta. A presente revisão permiteexpor a opinião dos autores sobre as diferentes técnicas e suas aplicações, mostrando o potencial emprego delasnos exames de rotina e nas pesquisas.
Sperm DNA integrity is directly related to male fertility. Techniques to assess sperm DNA are importantand have potential to be applied in routine evaluation of semen. However, the techniques and principles need tobe further studied to apply they correctly and to get relevant results. Thus, as discussed in Part 1, Part 2 willaddress evaluation techniques of sperm DNA: TUNEL, acridine orange and Sperm Chromatin Structure Assay(SCSA). TUNEL is based on addition of modified nucleotides labeled with fluorescence to fragmented tapesevaluating, therefore, directly, the DNA fragmentation of the sample. Acridine orange differentiates fragmentedDNA by different colors. On the other hand, SCSA are based on the imposition of a challenge to sperm. Thus,this technique assesses the susceptibility of sperm DNA fragmentation constituting indirect assessment. Thereview allows showing opinion of the authors about different techniques and their applications. Therefore,potential use of these techniques in routine exams and researches are addressed.
Assuntos
Animais , Fragmentação do DNA , Indução Embrionária , Laranja de Acridina/administração & dosagem , Laranja de Acridina/análiseRESUMO
El material genético es una de las obras maestras de la naturaleza. Es realmente sorprendente su organización bioquímica, que permite la codificación de proteínas y su copia para producir material nuevo e idéntico. Se encuentra ubicado en el núcleo de cada una de las células del organismo humano, como una malla o red que tiñe intensamente con colorantes ácidos formando lo que se denomina cromatina. El DNA está formado por 2 cadenas laterales compuestas por la secuencia alternada de azúcares y fosfatos, y se encuentran unidas en la parte central, por pares de bases nitrogenadas que mantienen una complementariedad química que le confiere las características bioquímicas de la molécula. Esta molécula a su vez se encuentra asociada a proteínas enrolladas en forma de doble hélice, plegada sobre si misma formando la cromatina.