Caracterização farmacológica da desnervação e reinervação simpática do ducto deferente de rato

The vas deferens of rat (DDR) has rich sympathetic innervation, being the main ATP noradrenaline and mediators involved in neurotransmission in the organ. Several studies have shown that in the DDR surgically denervated changes occur in tissue contraction. However, there are scarce studies that characterized these changes and followed for a longer time to consider the period of reinnervation of the fabric. This study set out to do in DDR surgically denervated, a temporal analysis of the changes in contractile ability of starting the study 4 days after surgery and reinnervation process for 84 days after the procedure, in order to establish new parameters indicative of reinnervation of the organ. For this the DDR will be denervated according to the technique described by Kasuya et al. (1969), the animals were anesthetized with ketamine and Xylazina, then an incision was made in the region above pubis, exposing the seminal vesicle and the DDR. With the help of tweezers, the nerve and artery that travels along the vas deferens of rat were separated from the organ for about 1 cm, a small amount of phenol 5% was applied in this region, and the abdominal wall was sutured. Non-operated animals were used as controls. After the procedure the mice were housed in cage and taken to the biologist to be used in experiments. In different days after the procedures (4, 7, 14, 21, 28, 56 and 84) the animals were euthanized in CO2 Chamber the DDRs removed, cleaned and assembled in isolated organ equipment where they were subjected to the action of KCl and high frequency electric stimulus. We observed that there was no change in the areas of the contraction curves of the denervated animals in comparison with those of the control group. . The data indicate that the contractility of the organ is not affected by the surgical denervation of the sympathetic component of the organ, which leads us to suggest that there should be a compensation of the contractile machinery in order to maintain the functionality of the organ, even under conditions of sympathetic neurotransmission failure.

O ducto deferente de rato (DDR) possui rica inervação simpática, sendo noradrenalina e ATP os principais mediadores envolvidos na neurotransmissão do tecido. Vários trabalhos já mostraram que no DDR desnervado cirurgicamente ocorrem alterações na contração do tecido. Entretanto, são escassos os estudos que caracterizaram essas mudanças e principalmente que acompanharam por um tempo mais longo que considerasse o período de reinervação do tecido. O presente trabalho se propôs a fazer, em DDR desnervado cirurgicamente, uma análise temporal das alterações na capacidade contrátil do órgão iniciando o estudo 4 dias após a cirurgia e acompanhando o processo de reinervação por 84 dias após o procedimento, a fim de estabelecer novos parâmetros indicativos da reinervação do órgão. Para isto os DDR foram desnervados segundo a técnica descrita por Kasuya e colaboradores (1969), os animais foram anestesiados com Ketamina e Xylazina em seguida foi feita uma incisão na região supra púbica, expondo a vesícula seminal e o DDR, com a ajuda de uma pinça, o nervo e a artéria que correm junto ao ducto deferente de rato foram separados do órgão por cerca de 1 cm, uma pequena quantidade de fenol 5% foi aplicada nesta região, sendo a parede abdominal suturada a seguir. Animais não operados foram utilizados como controles. Após o procedimento os ratos foram novamente alojados em gaiola e levados ao biotério até serem utilizados nos experimentos. Nos diferentes dias após os procedimentos (4, 7, 14, 21, 28, 56 e 84) os animais foram eutanasiados em câmara de CO2 os DDRs retirados, limpos e montados no equipamento de órgão isolado quando foram submetidos à ação do KCl e estímulo elétrico de alta frequência. Observamos que não houve alteração nas áreas das curvas de contração dos animais desnervados em comparação com aqueles do grupo controle. Os dados indicam que a contratilidade do órgão não é afetada pela desnervação cirúrgica do componente simpático do órgão, o que nos leva a sugerir que deva existir uma compensação da maquinaria contrátil a fim de manter a funcionalidade do órgão, mesmo em condições de falha da neurotransmissão simpática.

Effective reinnervation of the quadriceps femoris by spinal ventral root cross-anastomosis in rats / Reinervação efetiva do quadríceps femoral pela anastomose cruzada via raiz espinhal ventral em ratos

PURPOSE: To study the effective recovery of the quadriceps femoris by spinal ventral root cross-anastomosis in rats. METHODS: End-to-end anastomosis was performed between the left L1 and L3 ventral roots using autogenous nerve graft ,and the right L1 and L3 roots were left intact. In control animals, the left L3 ventral root was cut and shortened, and anastomosis was not performed. Six months postoperatively, the movement of low extremities was detected by electrophysiological examination, hindlimb locomotion and basso, beattie and bresnahan (BBB) scoring at one, three, seven, 14, 21 and 28 days after SCI. Fluorescence retrograde tracing with TRUE BLUE (TB) and HE staining were performed to observe the nerve regeneration. RESULTS: Six months after surgery, the anastomotic nerve was smooth and not atrophic. The amplitudes of action potential were 7.63±1.86 mV and 6.0±1.92 mV respectively before and after the spinal cord hemisection. The contraction of left quadriceps femoris was induced by a single stimulation of the anastomotic nerve. The locomotion of left hindlimb was partially restored after spinal cord hemisection while creeping and climbing. In addition, there was significant difference in the BBB score at one, three and seven days after SCI. TB retrograde tracing and neurophysiologic observation indicated efficient reinnervation of the quadriceps femoris. CONCLUSION: The cross-anastomosis between spinal ventral root can partially reconstruct the function of quadriceps femoris following SCI and may have clinical implication for the treatment of human SCI.

OBJETIVO: Investigar a recuperação efetiva do músculo quadríceps femoral pela anastomose cruzada via raiz espinhal ventral em ratos. MÉTODOS: Anastomose término-terminal foi realizada entre as raízes ventrais L1 e L3 à esquerda usando enxerto autógeno de nervo e, à direita, as raízes L1 e L3 foram mantidas intactas. Nos animais controles, à esquerda, a raiz ventral de L3 foi cortada e encurtada sem realização de anastomose. Após seis meses, o movimento das extremidades posteriores foi estudado por exame eletrofisiológico, e pelo escore de basso, beattie e bresnahan (BBB) com um, três, sete, 14, 21 e 28 dias após SCI. Fluorescência retrograde feita com TRUE BLUE (TB) e coloração com HE foram realizadas para observar a regeneração do nervo. RESULTADOS: Seis meses após a cirurgia, a anastomose do nervo estava lisa e sem atrofia. As amplitudes dos potenciais de ação foram 7,63±1,86 mV e 6,0±1,92 mV respectivamente antes e após a hemisecção da medula espinhal. A contração do músculo quadríceps femoral foi induzida por um único estímulo do nervo anastomosado. A locomoção do membro posterior esquerdo foi parcialmente restaurada após hemisecção da medula espinhal ao rastejar e escalar. Ademais, houve diferença significante no escore BBB nos dias um, três e sete após SCI. O traçado da TB retrógrada e a observação neurofisiológica indicaram reinervação eficiente do quadríceps femoral. CONCLUSÃO: A anastomose cruzada entre as raízes espinhais ventrais podem reconstruir parcialmente a função do quadríceps femoral após SCI e pode ter implicação clínica para o tratamento da SCI.

Avaliação macroscópica, microscópica e histomorfométrica do tecido cicatricial pós-cirúrgico de eqüinos submetidos a duas técnicas de neurectomia digital / Macroscopic, microscopic, and histomorphometric evaluation of post-operative scar tissue in horses submitted to two techniques for digital neurectomy

Avaliou-se macro e microscopicamente o tecido cicatricial pós-operatório de eqüinos submetidos a duas técnicas de neurectomia digital: guilhotina (TG) e stripping (TS). Decorridos 14 meses das cirurgias, foram colhidas 32 amostras de tecido cicatricial em quatro éguas, que tiveram os membros submetidos a ambas as técnicas. À macroscopia, verificaram-se as dimensões da cicatriz do coto proximal e a distância entre os cotos proximal e distal. À microscopia, foi quantificada a proporção de tecido nervoso regenerado por meio de histomorfometria. Não houve diferença nas dimensões do tecido cicatricial, contudo a distância entre cotos foi 5,6 vezes maior na TS (P<0,001). Histologicamente, observou-se a presença de tecido conjuntivo frouxo e denso, macrófagos e fibras nervosas delgadas em ambas as técnicas cirúrgicas. Estruturas nodulares, compostas por fascículos nervosos, foram visualizadas em 56,2 por cento (9/16) das amostras colhidas em nervos submetidos à TS. As porcentagens médias de tecido nervoso no tecido cicatricial foram de 0,31 por cento na TG e 2,6 por cento na TS (P<0,001). Concluiu-se que o retorno à sensibilidade nervosa deve demorar mais a ocorrer após a TS, devido à maior distância entre cotos. A maior proporção de tecido nervoso sugere que essa técnica favorece a regeneração nervosa.

The post-operative healed tissues in horses submitted to two digital neurectomy techniques, the guilhotine (GT) and the stripping (ST), were evaluated by macroscopy and microscopy. Fourteen months after surgery, 32 samples of scar tissue were collected from four mares that had the members experimentally submitted to both surgical techniques. By macroscopy, the dimensions of the scar tissue of the proximal stump and the distance between nerve stumps were taken. By microscopy, the proportion of nervous tissues in the scar tissue was quantified by histomorphometry. There were no differences between the scar tissue dimensions, but the distance between stumps was 5.6-fold greater in ST subjects. Histologically, connective tissue, macrophages, and thin nervous fibers were observed in scar tissue present in animals of both groups. Nodular structures composed by nervous fascicules were visualized in 56.2 percent (9/16) of the samples collected from the ST group. The mean percentage of the nervous tissue in scar tissue was 0.31 percent in GT samples and 2.6 percent in ST samples (P<0.001). After ST, a longer time to the return of the sensibility may occur due to the greater distance between stumps. However, greater proportion of nervous tissue in the scar tissue suggests that the use of this technique favors nervous regeneration.

Neurectomia digital em eqüinos: comparação das técnicas guilhotina e stripping / Digital neurectomy in horses: comparison of guillotine and stripping techniques

Compararam-se as dificuldades transcirúrgicas e as complicações pós-operatórias das técnicas guilhotina (TG) e stripping (TS) para a neurectomia digital em eqüinos. Sob anestesia com halotano, quatro éguas tiveram os nervos digitais de um dos membros torácicos e um dos pélvicos submetidos à TG, enquanto os nervos digitais dos membros colaterais foram submetidos à TS. Os tempos cirúrgicos médios de TG e TS foram semelhantes. O comprimento médio do fragmento do nervo removido foi três vezes maior em TS (P<0,001). Independente da técnica utilizada, houve perda total da sensibilidade nos talões de todos os membros dentro dos quatro primeiros meses da cirurgia. Após 14 meses, houve retorno da sensibilidade em 37 por cento dos membros em TG e 18,8 por cento em TS (P=0,06). Ao exame de palpação para identificação de neuromas dolorosos, houve episódios de sensibilidade discreta em um maior número de cotos nervosos proximais operados com TS, 53,6 por cento contra 6,4 por cento dos operados com TG (P=0,003). Ambas as técnicas foram satisfatórias por não apresentarem maiores complicações durante ou após a cirurgia. Considerou-se que TG apresentou menor potencial para produzir reinervação e neuromas dolorosos.

The surgical difficulties and the postoperative complications of two techniques for equine digital neurectomy, the guillotine (TG) and the stripping (TS), were evaluated. Four mares under halothane anesthesia were submitted to the TS in the digital nerves of a thoracic and a pelvic limbs, and TG in the contralateral limbs. The mean surgical times for TG and TS were similar. The mean transected nerve length was three times greater in TS (P<0.001). In both techniques, total lost of sensibility was observed in all heel bulbs during the first four months. After 14 months, sensibility returned to 37 percent limbs in treated by TG, and 18.8 percent in those treated by TS (P=0.06). Discreet painful sensation was identified by the response of digital palpation of the neuroma in a greater number of nerve stumps where TS was performed, 53.6 percent versus 6.4 percent of those operated by TG (P=0.003). No major complications were observed during or after surgery and both techniques were considered satisfactory. TG was considered with less potential to produce painful neuromas and reinnervation.