Caracterização da letalidade dos venenos de serpentes Bothrops jararaca e Crotalus durissus terrificus, por meio de ensaio em ovos embrionados de galinha

Em 2017, a Organização Mundial da Saúde voltou a considerar o ofidismo como uma doença tropical negligenciada de maior prioridade. As serpentes do gênero Bothrops têm destaque por serem responsáveis por mais de 90% dos acidentes ocorridos no Brasil. Já o gênero Crotalus apresenta um percentual de 7,7%, com letalidade maior nos acidentes crotálicos (1,87%) (Fundação Nacional de Saúde, 1988). O ensaio em ovos embrionados de galinha (OEG), representa um modelo in vivo, alternativo ao teste convencional em camundongos para teste de letalidade, sendo um método bastante eficaz e versátil para estudos pré-clínicos, podendo também atuar de forma complementar aos testes in vitro. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo analisar, por meio de ensaio em OEG, a determinação da letalidade induzida pelos venenos, obtidos do laboratório de Herpetologia do Instituto Butantan de Bothrops jararaca e Crotalus durissus terrificus. Foi feita a avaliação da aplicabilidade de doses desafio desses venenos para calcular a dose letal 50% (DL50). Nesta pesquisa, foram utilizados 300 ovos fertilizados de galinhas da linhagem Novogen White, SPF, em embriões de 6 e 7 dias de desenvolvimento. Os OEG foram incubados a 37oC e 62% de umidade relativa até o momento de inoculação. Nos OEG, foram inoculados na cavidade alantoide, os venenos de B. jararaca (VBj) as concentrações de VBj: 84,2 μg a 2,63125 μg/ovo e C. durissus terrificus (VCdt) as concentrações de VCdt: 5,74 μg a 0,179375 μg/ovo, tendo como grupos controles o crescimento de ovos sem qualquer inoculação (GC) e controles inoculados com salina (GS) em paralelo. Os embriões foram analisados por meio de ovoscopia manual, após os tempos de incubação, nos intervalos de 24 horas e 48 horas, para avaliação da função vascular. Foi realizada a inspeção macroscópica das lesões dos embriões mortos e registro fotográfico. Os resultados obtidos de dose letal 50% (DL50) em OEG no teste de VCdt foram de DL50=0,8035 μg/ovo nos embriões de 6 dias e DL50=0,09113 μg/ovo nos embriões de 7 dias de desenvolvimento. Já o teste para VBj os valores estimados de DL50 foram de DL50=21,91 μg/ovos nos embriões de 6 dias e DL50=24,37 μg /ovo em embriões de 7 dias de vida embrionária. Os valores de DL50 obtidos em OEG ao serem comparados com os valores de DL50 em camundongos, demostraram ter boa correspondência entres as metodologias. A partir do uso dessa técnica, verificou-se que os OEG podem ser utilizados como alternativo ao método convencional em camundongos.

Influência do tamanho corporal e do sexo na produção de veneno em Bothrops jararaca (Serpentes, Viperidae)

Ophidian accidents are considered a global health problem and are characterized as a neglectedtropical disease according to the World Health Organization. Brazil has around 25,000 accidents per year, with Bothrops genus causing the most (around 85 per cent). Within this group, Bothrops jararaca stands out as snake of great importance for public health, due to the numberof accidents and because it accounts for 50 per cent of the botropic pool for serum production inBrazil.It is known that snakes show a constant increase in body size throughout their lives, showing sexual dimorphism, as B. jararaca, whose females are larger than the males. This study aims to relate the body size of B. jararaca to the amount of venom yielded, taking sexual dimorphism, the length of the animal and the size of its head into account. These relationshipswere assessed by measuring and milking 36 individuals of B. jararaca (27 adults and 9 juveniles) from different origins kept in captivity. Three venom extraction was carried out on each animal, with a two-month period between them, totalizing 111 venom samples. We used the mass of the individual, snout-vent length (SVL), total length (TL), as well as the head size for each individual using different measurements (width, length and area). To produce the regression lines, the data was log-transformed when using measures of different dimensions. The probability value adopted to reject the null hypothesis was p ≤ 0.05. As expected, the sizeof the animals had a positive influence on the amount of venom yielded, but this productivity varied in each milking, indicating the importance of carrying out more than one venom extraction per animal. The minimum and maximum values for crude liquid venom were 55- 1212 mg (females) and 22-786.3 mg (males) when juveniles and adults were grouped together.The best correlations found, considering the coefficient of determination (r2), were the variables for length (r2 = 0.81) and head measurements (r2 = 0.70), while the worst was for mass (r2 = 0.60) with p < 0.0001 for all variables. Finally, sex did not influence venom yielding in B. jararaca, contrary to body size. Studies about the amount of venom that different specimens produce are important for the management of snakes in the bioterium of production, viewing the breeding of the most productive animals. Furthermore, knowing how much venom a snakeis capable of producing can help in the serotherapy of bitten patients.

Os acidentes ofídicos são considerados um problema de saúde mundial, sendo caracterizados como uma doença tropical negligenciada segundo a Organização Mundial de Saúde. O Brasil apresenta cerca de 25.000 acidentes por ano, sendo o gênero Bothrops o maior causador (cercade 85 por cento). Dentro desse grupo, Bothrops jararaca destaca-se como serpente de grande importância para a saúde pública, devido ao número de acidentes e por ser responsável por 50 por cento do pool botrópico para produção de soro no Brasil. Sabe-se que as serpentes apresentam um aumento constante do tamanho corporal ao longo de sua vida, apresentando dimorfismo sexual,como é o caso de B. jararaca, cujas fêmeas são maiores que os machos. Este estudo tem comoobjetivo relacionar o tamanho corporal da B. jararaca com a quantidade de veneno produzida,levando em consideração o dimorfismo sexual, o comprimento do animal e o tamanho de sua cabeça. Estas relações foram avaliadas através da medição e extração de 36 indivíduos de B. jararaca (27 adultos e 9 juvenis) de diferentes origens mantidos em cativeiro. Foram realizadastrês extrações de veneno em cada animal, com um intervalo de dois meses entre elas, totalizando111 amostras. Utilizou-se a massa do indivíduo, o comprimento rostro-cloacal (CRC), o comprimento total (CT), bem como o tamanho da cabeça de cada indivíduo utilizando diferentes medidas (largura, comprimento e área). Para produzir as regressões, os dados foramtransformados em logaritmos quando utilizou-se medidas de diferentes dimensões. O valor de probabilidade adotado para rejeitar a hipótese nula foi p ≤ 0,05. Como esperado, o tamanho dos animais influenciou positivamente na quantidade de veneno produzida, mas essa produtividadevariou em cada extração, indicando a importância de se realizar mais de uma extração de venenopor animal. Os valores mínimos e máximos de veneno líquido bruto foram de 55-1212 mg (fêmeas) e 22-786,3 mg (machos) quando agrupados juvenis e adultos. As melhores correlações encontradas, considerando o coeficiente de determinação (r2), foram as variáveis para comprimento total (r2 = 0,81) e medidas da cabeça (r2 = 0,70), enquanto a menor foi para massa(r2 = 0,60) com p < 0,0001 para todas as variáveis. Finalmente, o sexo não influenciou a produção de veneno em B. jararaca, ao contrário do tamanho corporal. Estudos sobre a quantidade de veneno que diferentes espécies produzem são importantes para o manejo de serpentes no biotério de produção, visando a criação dos animais mais produtivos. Além disso,saber a quantidade de veneno que uma serpente é capaz de produzir pode ajudar na soroterapiade pacientes picados.

Caracterização estrutural e funcional de uma metaloproteinase de classe P-I do veneno de Lachesis muta rhombeata

Rhomb-I, a 23-kDa metalloproteinase was isolated from L. m. rhombeata venom. Its dimethylcasein proteolysis was abolished by metal chelators, and slightly enhanced by Ca2+ and Mg2+ ions, but inhibited by Co2+ , Zn2+ and α2-macroglobulin. In aqueous solution, rhomb-I autoproteolyzed to a 20- and 11-kDa fragments at 37 oC. The amino acid sequence showed high homology with other SVMPs. Rhomb-I causes hemorrhage that may be ascribed to hydrolysis of essential BM, ECM and plasma proteins. It preferentially cleaves the α-chains of fibrin(ogen). Rhomb-I inhibited convulxin- and vWF-induced aggregation on human platelets without significant effect on collagen-stimulated aggregation or other effectors. It digests vWF into a low- molecular-mass multimers of vWF and a rvWF-A1 domain to a 27-kDa fragment as revealed by western blotting with mouse anti-rvWF A1-domain IgG. Incubation of platelets with rhomb-I resulted in adhesion to and cleavage of platelet receptors GPIbα and GPVI to release a 130-kDa and 55-kDa soluble form. Both membrane glycoproteins, GPIbα that binds vWF, together with GPVI which binds collagen, play a key role in mediating platelet adhesion/activation and can initiate (patho)physiological thrombus formation. Conclusions: rhomb-I is implicated in the pathophysiology of Lachesis envenoming by disrupting vasculature, hemostasis and platelet aggregation through impairing vWF-GPIb axis and blocking GPVI-collagen binding.

Rhomb-I, uma metaloproteinase de 23 kDa foi isolada do veneno de L. m. rhombata. Sua ação proteolítica sobre dimetilcaseína foi inibida por α2-macroglobulina, quelantes de metais e por cátions Co2+ e Zn2+ e levemente estimulada por Ca2+ e Mg2+ . Em solução aquosa a 37 oC, rhomb-I sofreu autoproteólise gerando fragmentos de aproximadamente 20 e 11 kDa. A sequência de aminoácidos apresentou alta similaridade com outras SVMPs P-I. Rhomb-I causa hemorragia que pode ser atribuída à hidrólise de proteínas da membrana basal, da matriz extracelular e proteínas plasmáticas. Rhomb-I cliva, preferencialmente, as cadeias Aα da fibrina e do fibrinogênio. Rhomb-I inibiu a agregação induzida por convulxina e pelo fator de von Willebrand (vWF) em plaquetas humanas, sem efeito significativo na agregação estimulada por colágeno ou outros agonistas. Ela digere vWF em multímeros de massas moleculares menores bem como o domínio A1 recombinante de vWF (rvWF- A1) gerando um fragmento de aproximadamente 27 kDa, conforme evidenciado por western blot com IgG anti-rvWF-A1, produzido em camundongos. Após incubar plaquetas lavadas com rhomb-I, foi possível observar por western blot que a proteína liga e cliva as glicoproteínas de plaquetas GPIb e GPVI, liberando as formas solúveis de 130 kDa e 55 kDa, respectivamente. Ambas glicoproteínas, GPIbα que se liga ao vWF, e GPVI que se liga ao colágeno, desempenham um papel fundamental na mediação da adesão/ativação plaquetária e podem iniciar a formação fisiológica ou patológica de trombos. Conclusões: Rhomb-I é uma metaloproteinase classe P-I, hemorrágica, fibrino(geno)lítica que degrada proteínas da matriz extracelular e interfere na função plaquetária pela clivagem de vWF, GPIb e GPVI. Estes resultados indicam que rhomb-I pode estar envolvida na fisiopatologia do envenenamento por Lachesis, perturbando a hemostasia e agregação plaquetária e causando danos à vasculatura.

Caracterização de adaptações do repertório molecular de serpentes das tribos Xenodontini e Pseudoboini relacionadas à sua ecologia de predação

Among the wide spectrum of food ecologies, some groups of snakes have become ophiophagous, feeding mainly on other snakes. Due to the relationship between diet and venom composition, these ophiophagous groups probably needed to develop specific toxins targeting snakes and some type of resistance to the venoms of the snakes they preyed on, associating these characteristics with the development of ophiophagy. In the Neotropics, more precisely in the Dipsadidae family, there are several ophiophagous species. The genus Erythrolamprus (Tribe Xenodontini) and the genera Clelia and Boiruna (Tribe Pseudoboini) contain species that are specialists in snakes. However, due to their relatively low medical relevance, they have been poorly studied and there is scarce information about their venoms and possible resistance factors or mechanisms. In the present work, the toxin composition of the venom gland transcriptome of 8 genera and 19 species of the tribe Pseudoboini and 3 genera and 8 species of the tribe Xenodontini was analyzed. In addition to being the first compositional analysis of the venom of the two tribes, a new type of enzymatic toxins exclusive to the Dipsadidae family (the svMMPs) was identified and characterized in the analyzed samples, as well as high expression levels of a type of phospholipases A2 in some species of the Pseudoboini tribe was detected. On the other hand, comparisons between liver transcriptomes and plasma proteomes of ophiophagous and non-ophiophagous species of the tribe Pseudoboini allowed identifying high expression levels of several types of toxin inhibitors. However, the occurrence of overexpression of these inhibitors in ophiophagous species was not detected. The analyzes revealed, in a broad scale, the evolutionary novelties present in the compositional profile of the venoms of the two tribes and verified the occurrence of plasma toxin inhibitors in the analyzed species.

Dentre o amplo espectro de ecologias alimentares, alguns grupos de serpentes tornaram-se ofiófagos, alimentando-se principalmente de outras serpentes. Devido à relação entre a dieta e a composição do veneno, esses grupos ofiófagos provavelmente precisaram desenvolver toxinas específicas para serpentes e algum tipo de resistência aos venenos das serpentes que predavam, associando essas características ao desenvolvimento da ofiofagia. Nos neotrópicos, mais precisamente na família Dipsadidae, ocorrem diversas espécies ofiófagas. O gênero Erythrolamprus (Tribo Xenodontini) e os gêneros Clelia e Boiruna (Tribo Pseudoboini) contêm espécies especialistas em serpentes. No entanto, devido à sua relevância médica relativamente baixa, foram pouco estudados e existem poucas informações sobre seus venenos e possíveis fatores ou mecanismos de resistência. No presente trabalho foi analisada a composição de toxinas do transcriptoma da glândula de veneno de 8 gêneros e 19 espécies da tribo Pseudoboini e de 3 gêneros e 8 espécies da tribo Xenodontini. Além de ser a primeira análise composicional do veneno das duas tribos, permitiu a identificação e caracterização de um novo tipo de toxinas enzimáticas exclusivo da família Dipsadidae (as svMMPs), assim como revelou níveis de expressão elevados de um tipo de fosfolipases A2 em algumas espécies da tribo Pseudoboini. Por outro lado, as comparações entre os transcriptomas do fígado e os proteomas do plasma de espécies ofiófagas e não ofiófagas da tribo Pseudoboini indicaram níveis de expressão elevados de vários tipos de inibidores de toxinas. Porém, não foi detectada a ocorrência de sobre expressão destes inibidores nas espécies ofiófagas. As análises revelaram, em escala abrangente, as novidades evolutivas presentes no perfil composicional dos venenos das duas tribos e verificaram a ocorrência de inibidores de toxinas plasmáticos nas espécies analisadas.

Venenos de serpentes do gênero Bothrops: impacto da glicosilação na complexidade dos proteomas e função de toxinas / Bothrops snake venoms: impact of glycosylation on the complexity of proteomes and toxins function

A variabilidade estrutural é uma característica das proteínas de venenos de serpentes, e a glicosilação é uma das principais modificações pós-traducionais que contribui para a diversificação de seus proteomas. Recentes estudos de nosso grupo demonstraram que venenos do gênero Bothrops são marcadamente definidos pelo seu conteúdo de glicoproteínas, e que a maioria das estruturas de N-glicanos dos tipos híbrido e complexo identificados em oito venenos deste gênero contêm unidades de ácido siálico. Em paralelo, em glicoproteínas do veneno de B. cotiara foi identificada a presença de uma estrutura de N-acetilglicosamina bissecada. Assim, com o objetivo de investigar a variação do conteúdo de glicoproteínas, assim como os mecanismos envolvidos na geração dos diferentes venenos de Bothrops, neste estudo foram analisados comparativamente os glicoproteomas de nove venenos do gênero Bothrops (B. atrox, B. cotiara, B. erythromelas, B. fonsecai, B. insularis, B. jararaca, B. jararacussu, B. moojeni e B. neuwiedi). As abordagens glicoproteômicas envolveram cromatografia de afinidade e ensaio de pull-down utilizando, respectivamente, as lectinas SNA (aglutinina de Sambucus nigra) e MAL I (lectina de Maackia amurensis), que mostram afinidade por unidades de ácido siálico nas posições, respectivamente, α2,6 e α2,3; e cromatografia de afinidade com a lectina PHA-E (eritroaglutinina de Phaseolus vulgaris), que reconhece N-acetilglicosamina bissecada. Ainda, eletroforese de proteínas, blot de lectina, e identificação de proteínas por espectrometria de massas foram empregadas para caracterizar os glicoproteomas. As lectinas geraram frações dos venenos enriquecidas de diferentes componentes, onde as principais classes de glicoproteínas identificadas foram metaloprotease, serinoprotease, e L-amino ácido oxidase, além de outras enzimas pouco abundantes nos venenos. Os diferentes conteúdos de proteínas reconhecidas por essas lectinas, com especificidades distintas, ressaltaram novos aspectos da variabilidade dos subproteomas de glicoproteínas desses venenos, dependendo da espécie. Ainda, considerando que metaloproteases e serinoproteases são componentes abundantes nesses venenos e fundamentais no quadro de envenenamento botrópico, e que estas enzimas contêm diversos sítios de glicosilação, o papel das unidades de ácido siálico na atividade proteolítica das mesmas foi avaliado. Assim, a remoção enzimática de ácido siálico (i) alterou o padrão de gelatinólise em zimografia da maioria dos venenos, (ii) diminuiu a atividade proteolítica de alguns venenos sobre o fibrinogênio e a atividade coagulante do plasma humano de todos os venenos, e (iii) alterou o perfil de hidrólise de proteínas plasmáticas pelo veneno de B. jararaca, indicando que este carboidrato pode desempenhar um papel na interação das proteases com seus substratos proteicos. Em contraste, o perfil da atividade amidolítica dos venenos não se alterou após a remoção de ácido siálico e incubação com o substrato Bz-Arg-pNA, indicando que ácido siálico não é essencial em N-glicanos de serinoproteases atuando sobre substratos não proteicos. Em conjunto, esses resultados expandem o conhecimento sobre a variabilidade de proteomas de venenos do gênero Bothrops e apontam a importância das cadeias de carboidratos contendo ácido siálico nas atividades enzimáticas das proteases desses venenos

Structural variability is a feature of snake venom proteins, and glycosylation is one of the main post-translational modifications that contributes to the diversification of venom proteomes. Recent studies by our group have shown that Bothrops venoms are markedly defined by their glycoprotein content, and that most hybrid and complex N-glycan structures identified in eight venoms of this genus contain sialic acid units. In parallel, the presence of a bisected N-acetylglucosamine structure was identified in B. cotiara venom glycoproteins. Thus, with the aim of investigating the variation in the content of glycoproteins, as well as the mechanisms involved in the generation of different Bothrops venoms, in this study the glycoproteomes of nine Bothrops venoms (B. atrox, B. cotiara, B. erythromelas, B. fonsecai, B. insularis, B. jararaca, B. jararacussu, B. moojeni e B. neuwiedi) were comparatively analyzed. The glycoproteomic approaches involved affinity chromatography and pulldown using, respectively, the lectins SNA (Sambucus nigra agglutinin) and MAL I (Maackia amurensis lectin), which show affinity for sialic acid units at positions, respectively, α2,6 and α2,3, and affinity chromatography with PHA-E (Phaseolus vulgaris erythroagglutinin), which recognizes bisected N-acetylglucosamine. In addition, protein electrophoresis, lectin blot, and protein identification by mass spectrometry were employed for glycoproteome characterization. The lectins generated venom fractions enriched with different components, where the main classes of glycoproteins identified were metalloprotease, serine protease, and L-amino acid oxidase, in addition to other low abundant enzymes. The different contents of proteins recognized by these lectins of distinct specificities highlighted new aspects of the variability of the glycoprotein subproteomes of these venoms, depending on the species. Furthermore, considering that metalloproteases and serine proteases are abundant components of these venoms and essential in Bothrops envenomation, and that these enzymes contain several glycosylation sites, the role of sialic acid units in their proteolytic activities was evaluated. Thus, enzymatic removal of sialic acid (i) altered the pattern of gelatinolysis in zymography of most venoms, (ii) decreased the proteolytic activity of some venoms on fibrinogen and the clotting activity of human plasma of all venoms, and (iii) altered the hydrolysis profile of plasma proteins by B. jararaca venom, indicating that this carbohydrate may play a role in the interaction of proteases with their protein substrates. In contrast, the profile of amidolytic activity of the venoms did not change after removal of sialic acid and incubation with the substrate Bz-Arg-pNA, indicating that sialic acid is not essential in N-glycans of serine proteases acting on small substrates. Together, these results expand the knowledge about the variability of proteomes of Bothrops venoms and point to the importance of carbohydrate chains containing sialic acid in the enzymatic activities of venom proteases

Análise bioquímica do veneno da serpente Philodryas patagoniensis: caracterização preliminar de uma calicreína-símile

The snakebite is considered a worldwide public health concern that is constantly neglected as it occurs, essentially, in regions of Africa, Asia and Latin America. As these accidents usually happen in countries that are emerging or underdeveloped, the incidence and mortality data end up not being accurate due to the lack of proper notification. In addition, the affected patient often may not receive adequate treatment due to the difficulty in identifying the snake and having access to serum therapy. Snakes can be found throughout Brazilian territory, and snakes are quite common in the country. Among the genera that can be found in the country, it is included in the genus Philodryas, which has some species of snakes, among them is Philodryas patagoniensis. The envenomation by this snake, generally, does not evolve into a serious clinical condition. However, its venom generates edematogenic and hemorrhagic activity, in addition to pain and tissue damage in the injured area, which causes cases of poisoning by this snake to be mistaken for the snake-like accident by Bothrops. In relation to the toxins present in this snake's venom, its composition, biological function and physiological activities are still unclarified. Therefore, the aim of this work is to investigate the composition of the species' venom with regard to the evaluation of a possible release of kinins from the KN-BK substrate by the venom of this snake. Kinins are released by kallikrein, which could indicate a similar kallikrein present in Philodryas patagoniensis venom that would be precisely involved in the process of releasing bradykinin, an inflammatory mediator. This kallikrein-simile contributes to the triggering of clinical manifestations such as pain and edema caused by the poisoning of this snake.

O acidente ofídico é considerado um problema de saúde pública mundial, constantemente negligenciado por ocorrer, essencialmente, em regiões da África, Ásia e América Latina. Pelo fato de os acidentes acontecerem geralmente em países que são emergentes ou subdesenvolvidos, os dados de incidência e mortalidade acabam não sendo precisos pela falta da notificação apropriada. Além disso, o paciente acometido, muitas vezes, pode não receber o tratamento adequado pela dificuldade na identificação da serpente e ao acesso a soroterapia. As serpentes podem ser amplamente encontradas em todo território brasileiro, sendo o ofidismo bastante comum no país. Em meio aos gêneros que podem ser encontrados no país, está incluído o gênero Philodryas, que possui algumas espécies de serpentes, dentre elas, a Philodryas patagoniensis. O envenenamento por esta serpente, geralmente não evolui para um quadro clínico grave. No entanto, seu veneno gera atividade edematogênica e hemorrágica além de dor e dano tecidual no local lesado, o que faz com que os casos de envenenamento por essa serpente sejam confundidos com o acidente ofídico causados por serpentes do gênero Bothrops. Em relação às toxinas presentes no veneno dessa serpente, sua composição, função biológica e atividades fisiológicas ainda não são esclarecidas. Diante disto, o intuito deste trabalho é investigar a composição do veneno da espécie no que diz respeito à avaliação de uma possível liberação de cininas do substrato KN-BK pelo veneno dessa serpente. As cininas são liberadas pelas calicreínas plasmática e teciduais humanas e são peptídeos bioativos com funções na regulação da pressão arterial e participação em processos inflamatórios. Assim, a observação de uma calicreína-símile presente no veneno de Philodryas patagoniensis poderia estar envolvida no desencadeamento das manifestações clínicas como a dor e o edema acarretadas pelo envenenamento desta serpente.

Case report of a coral snake bite (Micrurus ibiboboca) in the state of Pernambuco, northeast Brazil / Relato de caso de picada de cobra coral (Micrurus ibiboboca) no estado de Pernambuco, nordeste do Brasil / Informe de caso de mordedura de serpiente coral (Micrurus ibiboboca) en el estado de Pernambuco, noreste de Brasil

The Elapidae family comprises 35 snake species in Brazil, with Micrurus ibiboboca being widely distributed in the northeast of the country. Despite the high number of Micrurus species in Brazil, there are few cases of human envenomation in literature. This study describes a clinical report of envenomation due to the bite of M. ibiboboca in the State of Pernambuco, Northeast Brazil, that took place in 2017. The patient presented symptoms of muscle paralysis and sweating. He was admitted to the intensive care unit. A total of 10 ampoules of anti-elapidic serum were administered. The patient complained of local pain that extended through the arm, paresthesia in the lower limbs, headache, and chest pain. Changes in the visual, respiratory, and neurological systems were not observed. This clinical case report on coral snake poisoning is useful for increasing the knowledge on the toxicological action of snake poison and its effect on injured individuals, thereby helping in the clinical evaluation and treatment.(AU)

A família Elapidae compreende 35 espécies de serpentes no Brasil, com Micrurus ibiboboca amplamente distribuída no Nordeste. Apesar do elevado número de espécies de Micrurus no Brasil, são poucos os casos de envenenamento humano na literatura. Descrevemos aqui um relato clínico de envenenamento por picada de M. ibiboboca no Estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil, ocorrido em 2017. O paciente apresentava sintomas de paralisia muscular e sudorese. Ele foi internado na Unidade de Terapia Intensiva. Um total de 10 ampolas de soro anti-elapídico foi administrado. O paciente queixava-se de dor local que se estendia pelo braço, parestesia em membros inferiores, cefaleia e dor torácica. Não foram observados alterações nos sistemas de visão, respiratório e neurológico. Este relato de caso clínico de intoxicação por cobra coral é útil para aumentar o conhecimento sobre a ação toxicológica da peçonha da serpente e seu efeito sobre os acidentados, auxiliando na avaliação clínica e no tratamento.(AU)

La familia Elapidae comprende 35 especies de serpientes en Brasil como la Micrurus ibiboboca ampliamente distribuidas en el Noreste. A pesar de lo alto número de especies de Micrurus en Brasil, hay pocos casos de envenenamiento humano en la literatura. Describimos aquí un informe clínico de envenenamiento por mordedura de M. ibiboboca en el estado de Pernambuco, Noreste de Brasil, ocurrido en 2017. El paciente presentaba síntomas de parálisis muscular y sudoración. Fue ingresado en la unidad de cuidados intensivos. Se administraron un total de 10 ampollas de suero antielapídico. El paciente se quejaba de dolor local que se extendía por el brazo, parestesias en las extremidades inferiores, cefalea y dolor torácico. No se observaron cambios en los sistemas visual, respiratorio y neurológico. Este informe de caso clínico sobre la intoxicación por serpiente coral es útil para aumentar el conocimiento sobre la acción toxicológica del veneno de serpientes y su efecto en los individuos lesionados, ayudando así en la evaluación clínica y el tratamiento.(AU)

Participação das células gliais na hiperalgesia induzida pelo veneno de Bothrops jararaca e pelo conteúdo plaquetário: efeito da depleção de plaquetas circulantes

Pain has a protective and adaptive role in the body, and is essential to alert about harmful stimuli in the environment. In this context, the increased response to painful stimuli is called hyperalgesia, in which astrocytes and microglia, presente in the spinal cord, act in the central mediation of this effect. Studies from our group demonstrated that platelets are involved in hyperalgesia induced by carrageenan and Bothrops jararaca venom (Bjv). Furthermore, it was observed that whole platelets or platelet releasate (PR) also induce hyperalgesia, suggesting that these cells play a crucial role in the genesis of inflammatory pain. Considering this information, the aim of this project is evaluate the participation of microglia and astrocytes, presente in the spinal cord, during the peak of hyperalgesia evoked by Bjv or by PR, as weel as the involvement of platelets in changes observed in glial cells. Hyperalgesia was assessed by analgesy-meter 2 hours after intraplantar (i.pl) injection of Bjv and PR, associated or not with different treatments, such as anti-rat platelet antibody (which causes depletion of circulating platelets) and minocycline (inhibit microglial activation). The results showed that both Bjv and PR induced hyperalgesia, wich was abolished by depletion of platelets, reinforcing the importance of these cells in the development of hyperalgesia. Microglial blockade also inhibited hyperalgesia induced by Bjv and PR. To confirm the involvement of glial cells, ipsilateral side of spinal cord samples of vBj and CSP, obtained from animals submitted to the nociceptive test, were quantified in western blotting (WB) analysis for microglia (Iba-1) and astrocyte (GFAP). The expression of Iba-1 and GFAP was up-regulated in both groups, Bjv and PR. However, platelet depletion only inhibited microglia marking in Bjv group, not interfering with the glial markers in the PR group, indicating that there is a relationship between circulating platelets and microglial activation during hyperalgesia evoked by Bjv. The role of NK1 receptors in hyperalgesia evoked by Bjv was also evaluated. The data obtained demonstrated that the NK1 receptor antagonist (GR 82334) inhibited the venom hyperalgesia. Furthermore, an increase in the expression of NK1 receptors was detected in the spinal cord of animals injected with Bjv by WB, suggesting that NK1 receptors participate in the central mediation of this effect. Platelet depletion did not interfere with this effect. Taken together, these datas confirm the participation of circulating platelets in the genesis of hyperalgesia and demonstrate the involvement of microglial and astrocytic cells in the central mediation of hyperalgesia induced by Bjv and PR. Furthermore, the results suggest that the increase in microglial expression induced by Bjv is dependent on circulating platelets. In addition, suggest that the hyperalgesic effect of Bjv is mediated, at least in part, by NK1 receptors.

A dor tem um papel protetor e adaptativo no organismo, além de ser essencial para alertar sobre estímulos nocivos no ambiente. Neste contexto, é chamada de hiperalgesia a resposta aumentada aos estímulos dolorosos, em que microgliais e astrócitos, presentes na medula espinal, participam da mediação central desse efeito. Estudos do nosso grupo demonstraram que as plaquetas circulantes estão envolvidas na hiperalgesia induzida pela carragenina e pelo veneno de serpentes Bothrops jararaca (vBj). Ainda, foi observado que plaquetas íntegras e o conteúdo de secreção plaquetária (CSP) também induzem hiperalgesia, sugerindo que estas células desempenham papel primordial na gênese da dor inflamatória. Considerando estas informações, o objetivo deste projeto é determinar a participação da microglia e do astrócito, presentes na medula espinal, no desencadeamento da hiperalgesia induzida pelo vBj ou pelo CSP, bem como o envolvimento das plaquetas circulantes nas alterações observadas nas células gliais. A hiperalgesia foi avaliada pelo teste de pressão de pata de ratos após 2 horas da injeção intraplantar (i.pl) do vBj ou do CSP, pico da hiperalgesia, associadas ou não aos tratamentos prévios com anticorpo anti-plaqueta de rato, que causa a depleção de plaquetas circulantes, ou com minociclina (bloqueador da microglia). Os resultados obtidos demonstraram que tanto o vBj quanto o CSP induziram hiperalgesia, a qual foi abolida pela depleção de plaquetas circulantes, confirmando a importância dessas células no desencadeamento desse efeito. O bloqueio da microglia também inibiu a hiperalgesia causada pelo vBj e CSP. Para verificar a participação das células gliais na hiperalgesia observada, amostras da medula espinal no lado ipsilateral a injeção i.pl. do vBj e do CSP, obtidas de animais submetidos ao teste nociceptivo, foram avaliadas em ensaio de western blotting (WB) para marcação de microglia (Iba-1) e astrócito (GFAP). Os resultados demonstraram maior expressão de ambos os marcadores tanto no grupo vBj quanto no CSP. Entretanto, a depleção de plaquetas inibiu apenas a marcação da microglia no grupo vBj, não interferindo com a marcação dos astrócitos ou com os marcadores gliais no grupo CSP, indicando que existe uma relação entre as plaquetas circulantes e a ativação da microglia durante a hiperalgesia induzida pelo vBj. Também foi investigado o envolvimento dos receptores NK1 para taquicininas na hiperalgesia acarretada pelo vBj. Os dados obtidos demostraram que o antagonista de receptores NK1 (GR 82334) inibiu a hiperalgesia induzida pelo veneno. Além disso, foi observado por WB aumento da expressão desses receptores na medula espinal de ratos injetados com o vBj, sugerindo que os receptores NK1 participam da mediação da hiperalgesia causada pelo veneno. A depleção de plaquetas não interferiu com esse efeito. Em conjunto, os dados apresentados confirmam a participação das plaquetas circulantes na gênese da hiperalgesia e demonstram o envolvimento das células microgliais e astrocitárias na mediação central da hiperalgesia induzida pelo vBj e pelo CSP. Ademais, sugerem que a o aumento da expressão da microglia induzida pelo vBj é dependente das plaquetas circulantes. Ainda, que o efeito hiperalgésico do vBj é mediado, pelo menos em parte, por receptores NK1.

Aspectos clínico-epidemiológicos dos acidentes botrópicos notificados em um hospital de referência de Alagoas / Clinical-epidemiological aspects of bothropic accidents notified in an Alagoas reference hospital

RESUMO: Os acidentes ofídicos configuram um sério transtorno à saúde pública dos países tropicais, em razão da frequência com a qual se apresentam e da magnitude da morbimortalidade que acarretam. No Brasil, observa-se uma prevalência anual entre 19 e 22 mil desses acidentes, e, dentre os casos em que se há notificação da espécie, o gênero Bothrops é responsável por 80,50% dos casos. Objetivo: Descrever os aspectos clínico-epidemiológicos dos acidentes botrópicos notificados em um hospital de referência no estado de Alagoas. Métodos: Estudo observacional, descritivo do tipo transversal e retrospectivo, dos registros clínicos de pacientes internados no Hospital Escola Dr. Hélvio Auto, por acidentes botrópicos de 2010 a 2018. Resultados: A partir da investigação de 694 prontuários médicos, constatou-se a maior prevalência de acidentes no ano 2017. O perfil epidemiológico foi composto por indivíduos de sexo masculino, adultos, de etnia parda, de baixo nível de escolaridade, trabalhadores rurais, e caracterizado por ocorrer majoritariamente na mesorregião Leste Alagoano. Por sua vez, o perfil clínico caracterizou-se por apresentar como região anatômica mais acometida os membros inferiores, manifestações de dor e edema, gravidade leve a moderado e desfecho evolutivo satisfatório. Conclusões: A investigação realizada permitiu traçar o perfil clínico-epidemiológico dos acidentes botrópicos no estado de Alagoas, bem como identificou que o grupo social composto por trabalhadores rurais apresentou certa dificuldade de acesso ao atendimento hospitalar adequa-do em tempo hábil, o que determinou a incidência de casos de maior gravidade nessa população. (AU)

ABSTRACT: Ophidic accidents constitute serious public health in tropical countries, due to the frequency that these events occur and their relevant magnitude of morbidity and mortality. In Brazil, there is an annual prevalence between 19.000 and 22.000 of these accidents, and among the cases that notify the species, it is possible to verify that the Bothropsgenus is responsible for 80.50% of the cases. Objective: Describing the clinical and epidemiological aspects of bothropic accidents reported in a reference hospital in the state of Alagoas. Methods: Observational, descriptive cross-sectional, and retrospective study of the clinical records of patients admitted into the Escola Dr. Hélvio Auto Hospital for bothropic accidents from 2010 to 2018. Results: It shows that the year of 2017 was the most prevalent year of cases, through the investigation of 694 medical records. The epidemiological profile has been composed of male, adult, brown individuals, low education, rural workers, and characterized by occurring mostly in the Eastern Alagoas. Therefore, the clinical profile was characterized by the occurrence of the most affected anatomic region as lower limbs, manifestations of pain and edema, mild to moderate severity, and satisfactory clinical outcome. Conclusions: The investigation allowed to trace the clinical and epidemiological profile of bothropic accidents in the state of Alagoas, and also identify the social group composed of rural workers as the one with some demanding to access the hospital care accurately, and who was the population with the incidence of the highest severity. (AU)

Diagnóstico e tratamento de acidente ofídico por serpente do gênero Bothrops em cão / Diagnosis and treatment of ophidic accident by Bothrops snake in a dog

Refere-se como acidente ofídico todo quadro de envenenamento decorrente da inoculação de veneno, através de presas de serpentes. O veneno das espécies do gênero Bothrops, ao ser inoculado no animal, causa sinais clínicos graves que, se não tratados o mais rapidamente possível, podem levar o animal ao óbito. O gênero Bothrops (jararacas) está distribuído por todo o território nacional sendo responsável pela maioria dos acidentes ofídicos no país. Diante disso, o objetivo do presente relato foi descrever o diagnóstico e tratamento hospitalar bem sucedido de acidente botrópico em cão.

Ophidic accident refers to any picture of poisoning resulting from the inoculation of poison through snake prey. The venom of the Bothrops species, when inoculated into the animal, causes severe clinical signs that, if not treated as soon as possible, can lead to death. The Bothrops gender (jararacas) is distributed for all national territory as its responsible for the most ophidic accidents in the country. Therefore, the objective of the present report was to describe the diagnosis and successful hospital treatment of botropic accident in a dog.

Diagnóstico e tratamento de acidente ofídico por serpente do gênero Bothrops em cão / Diagnosis and treatment of ophidic accident by Bothrops snake in a dog

Refere-se como acidente ofídico todo quadro de envenenamento decorrente da inoculação de veneno, através de presas de serpentes. O veneno das espécies do gênero Bothrops, ao ser inoculado no animal, causa sinais clínicos graves que, se não tratados o mais rapidamente possível, podem levar o animal ao óbito. O gênero Bothrops (jararacas) está distribuído por todo o território nacional sendo responsável pela maioria dos acidentes ofídicos no país. Diante disso, o objetivo do presente relato foi descrever o diagnóstico e tratamento hospitalar bem sucedido de acidente botrópico em cão.(AU)

Ophidic accident refers to any picture of poisoning resulting from the inoculation of poison through snake prey. The venom of the Bothrops species, when inoculated into the animal, causes severe clinical signs that, if not treated as soon as possible, can lead to death. The Bothrops gender (jararacas) is distributed for all national territory as its responsible for the most ophidic accidents in the country. Therefore, the objective of the present report was to describe the diagnosis and successful hospital treatment of botropic accident in a dog.(AU)

Identification of microchips through diagnostic imaging helps to determine the longevity of the golden lancehead (Bothrops insularis) in captivity / Identificação de microchips por meio de diagnóstico por imagem auxilia a determinar a longevidade da jararaca-ilhoa (Bothrops insularis) em cativeiro

As serpentes vindas da natureza e encaminhadas para centros de reabilitação ou de pesquisa têm uma idade incerta. Na natureza, esses animais, muitas vezes atingem um tamanho corpóreo menor do que os indivíduos cativos devido a uma menor frequência de alimentação. Assim, a idade de uma cobra recém-chegada da natureza é geralmente estimada com base em seu tamanho corpóreo, o qual é comparado com dados em cativeiro. A utilização dos meios de diagnóstico por imagem tem auxiliado a medicina na análise das serpentes em cativeiro, mediante avaliação da estrutura óssea, dos órgãos e de alterações. Este trabalho relata o uso de diagnóstico por imagem (radiografia e ultrassonografia) para identificar a presença de microchips e, consequentemente, estimar a idade de uma Bothrops insularis em cativeiro.(AU)

Identification of microchips through diagnostic imaging helps to determine the longevity of the golden lancehead (Bothrops insularis) in captivity / Identificação de microchips por meio de diagnóstico por imagem auxilia a determinar a longevidade da jararaca-ilhoa (Bothrops insularis) em cativeiro

As serpentes vindas da natureza e encaminhadas para centros de reabilitação ou de pesquisa têm uma idade incerta. Na natureza, esses animais, muitas vezes atingem um tamanho corpóreo menor do que os indivíduos cativos devido a uma menor frequência de alimentação. Assim, a idade de uma cobra recém-chegada da natureza é geralmente estimada com base em seu tamanho corpóreo, o qual é comparado com dados em cativeiro. A utilização dos meios de diagnóstico por imagem tem auxiliado a medicina na análise das serpentes em cativeiro, mediante avaliação da estrutura óssea, dos órgãos e de alterações. Este trabalho relata o uso de diagnóstico por imagem (radiografia e ultrassonografia) para identificar a presença de microchips e, consequentemente, estimar a idade de uma Bothrops insularis em cativeiro.(AU)

Identification of microchips through diagnostic imaging helps to determine the longevity of the golden lancehead (Bothrops insularis) in captivity

As serpentes vindas da natureza e encaminhadas para centros de reabilitação ou de pesquisa têm uma idade incerta. Na natureza, esses animais, muitas vezes atingem um tamanho corpóreo menor do que os indivíduos cativos devido a uma menor frequência de alimentação. Assim, a idade de uma cobra recém-chegada da natureza é geralmente estimada com base em seu tamanho corpóreo, o qual é comparado com dados em cativeiro. A utilização dos meios de diagnóstico por imagem tem auxiliado a medicina na análise das serpentes em cativeiro, mediante avaliação da estrutura óssea, dos órgãos e de alterações. Este trabalho relata o uso de diagnóstico por imagem (radiografia e ultrassonografia) para identificar a presença de microchips e, consequentemente, estimar a idade de uma Bothrops insularis em cativeiro.

Aspectos da biologia reprodutiva de Boa constrictor constrictor: um estudo histológico dos testículos nos períodos reprodutivos de quiescência e máxima atividade / Boa constrictor constrictor reproductive biology aspects: the testes histological study in the reproductive periods of quiescence and maximal activity

As serpentes pertencem ao segundo maior grupo dentro dos répteis, podendo apresentar sazonalidade quanto à espermatogênese, com produção descontínua ou contínua. O presente trabalho tem como objetivo caracterizar aspectos da biologia reprodutiva de Boa constrictor constrictor com base nos achados histológicos dos testículos nos períodos de máxima atividade (período de gametogênese) e quiescência. Os testículos de dois espécimes de Boa c. constrictor (7767 e 11752) foram cortados a uma espessura de 3µm em micrótomo, corados com azul de toluidina 1%, fotodocumentados e descritos. A presença de espermatozoides na luz do túbulo seminífero no indivíduo 7767 indica um período de máxima gametogênese, enquanto o lúmen dos túbulos seminíferos pouco evidentes, sem a presença de espermatozoides e de células gaméticas em divisão, caracteriza o indivíduo 11752 em período quiescente. Mediante os achados histológicos descritos no presente estudo, concluiu-se que Boa c. constrictor apresenta sazonalidade em relação à gametogênese, sendo esse padrão de sazonalidade associado ao período de cópulas relatado em literatura característico de serpentes com padrão pré-nupcial.(AU)

These snakes belong to the second largest group within the reptiles, being able to present seasonality regarding spermatogenesis, with discontinuous or continuous production. The present study aims to characterize Boa constrictor constrictor reproductive biology aspects from histological findings in testicles during periods of maximum activity (period of gametogenesis) and quiescence. The testicles of two specimens of Boa c. constrictor (7767 and 11752) were cut to a thickness of 3µm in microtome, stained with 1% toluidine blue, photodocumented and described. The spermatozoa presence in the seminiferous tubule lumen in individual 7767 indicates a period of maximum gametogenesis, whereas the seminiferous tubules lumen is not very evident without spermatozoa and the absence of dividing gametic cells characterizes individual 11752 in the quiescent period. Through the histological findings we concluded that Boa c. constrictor presents seasonality in relation to gametogenesis, and the pattern of reproductive seasonality observed along with the period of copulas reported in the literature resembles the pre-nuptial pattern.(AU)

Aspectos da biologia reprodutiva de Boa constrictor constrictor: um estudo histológico dos testículos nos períodos reprodutivos de quiescência e máxima atividade / Boa constrictor constrictor reproductive biology aspects: the testes histological study in the reproductive periods of quiescence and maximal activity

As serpentes pertencem ao segundo maior grupo dentro dos répteis, podendo apresentar sazonalidade quanto à espermatogênese, com produção descontínua ou contínua. O presente trabalho tem como objetivo caracterizar aspectos da biologia reprodutiva de Boa constrictor constrictor com base nos achados histológicos dos testículos nos períodos de máxima atividade (período de gametogênese) e quiescência. Os testículos de dois espécimes de Boa c. constrictor (7767 e 11752) foram cortados a uma espessura de 3µm em micrótomo, corados com azul de toluidina 1%, fotodocumentados e descritos. A presença de espermatozoides na luz do túbulo seminífero no indivíduo 7767 indica um período de máxima gametogênese, enquanto o lúmen dos túbulos seminíferos pouco evidentes, sem a presença de espermatozoides e de células gaméticas em divisão, caracteriza o indivíduo 11752 em período quiescente. Mediante os achados histológicos descritos no presente estudo, concluiu-se que Boa c. constrictor apresenta sazonalidade em relação à gametogênese, sendo esse padrão de sazonalidade associado ao período de cópulas relatado em literatura característico de serpentes com padrão pré-nupcial.(AU)

These snakes belong to the second largest group within the reptiles, being able to present seasonality regarding spermatogenesis, with discontinuous or continuous production. The present study aims to characterize Boa constrictor constrictor reproductive biology aspects from histological findings in testicles during periods of maximum activity (period of gametogenesis) and quiescence. The testicles of two specimens of Boa c. constrictor (7767 and 11752) were cut to a thickness of 3µm in microtome, stained with 1% toluidine blue, photodocumented and described. The spermatozoa presence in the seminiferous tubule lumen in individual 7767 indicates a period of maximum gametogenesis, whereas the seminiferous tubules lumen is not very evident without spermatozoa and the absence of dividing gametic cells characterizes individual 11752 in the quiescent period. Through the histological findings we concluded that Boa c. constrictor presents seasonality in relation to gametogenesis, and the pattern of reproductive seasonality observed along with the period of copulas reported in the literature resembles the pre-nuptial pattern.(AU)

Descrição de uma nova espécie de serpente do gênero Tantilla Girard in Baird and Girard, 1853 (Colubridae: Colubrinae) do sul do Brasil

The genus Tantilla comprises 66 species, being one of the most diverse genera of snakes of the New World. In Brazil, there are two recognized species, T. boipiranga and T. melanocephala. The latter has the largest geographical distribution occurring from Guatemala to northern Argentina and Uruguay, as well as the islands of Trinidad and Tobago, Mustique Island, and the Islands of Saint Vincent Grenadines and Granada. T. melanocephala still presents a high degree of variation in coloration and general morphometry of the body. Therefore, a taxonomic revision of the T. melanocephala complex was carried out, with follicular characters, coloration and general morphometry of the 169 specimens being analyzed. A population of Tantilla was found, which is distributed through the southern Brazil, presented here as a new species. T. sp. n. is immediately distinguishable from the T. melanocephala complex by the presence of a blackish and broadened cephalic hood, covering a large part of the dorsum of the head and extending continuously to the inner scales; and presence of a longitudinal, blackened and diffuse paraventral band, later denser in the trunk. Although T. sp. n. is recognizable, there are populations along the distribution of T. melanocephala that, even though they have distinct colorations, are difficult to distinguish because there is a great overlap of meristic characters, which may mean the existence of cryptic diversity within this taxon. Finally, studies combining morphological and molecular evidences should be developed in order to test the hypothesis of cryptic diversity and elucidate the taxonomic relationships between the possible species of this complex.

O gênero Tantilla compreende 66 espécies, sendo um dos gêneros mais diversos de serpentes do Novo Mundo. No Brasil, há duas espécies reconhecidas, T. boipiranga e T. melanocephala. A última possui a maior distribuição geográfica ocorrendo desde a Guatemala, até o norte da Argentina e Uruguai, além das ilhas de Trinidad e Tobago, Ilha Mustique, e Ilhas de São Vicente Granadinas e Granada. T. melanocephala ainda apresenta alto grau de variação na coloração e morfometria geral do corpo. Diante disso, conduziu-se uma revisão taxonômica do complexo T. melanocephala, analisando-se caracteres de folidose, coloração e morfometria geral do corpo de 169 espécimes e descobriu-se uma população de Tantilla, que se distribui pelas áreas de campo do sul do Brasil, apresentada aqui como uma nova espécie. T. sp. n. é imediatamente distinguível do complexo T. melanocephala pela presença de capuz cefálico enegrecido e amplo, cobrindo grande parte do dorso da cabeça e estendendo-se continuamente até as escamas internasais; e presença de faixa paraventral longitudinal, enegrecida e difusa, mais adensada posteriormente no tronco. Embora T. sp. n. seja reconhecível, há populações ao longo da distribuição de T. melanocephala que, mesmo apresentando colorações distintas, são difíceis de distinguir porque há grande sobreposição de caracteres merísticos, o que pode significar a existência de diversidade críptica dentro desse táxon. Finalmente, estudos combinando evidências morfológicas e moleculares devem ser desenvolvidos, afim de testar a hipótese de diversidade críptica e elucidar as relações taxonômicas entre as possíveis espécies deste complexo.

Acidentes por serpente falsa coral Oxyrhopus guibei (Hoge &Romano, 1978): estudo retrospectivo de 205 casos atendidos no Hospital Vital Brazil no período de 1945 a 2018

A total of 205 proven cases of Oxyrhopus guibei bites, a false coral snake, admitted to Hospital Vital Brazil (HVB) of Butantan Institute, in São Paulo, Brazil, between 1945 and 2018, were retrospectively analyzed. The cases included were those in which the snake was brought to HVB and was correctly identified. Of the 205 cases of snake bites, it was possible to describe the sex of the snake in 172 cases; 40 (65.5%) snakes were female. Only 83 snakes out of 205 could be studied because of their preservation status. The length of snakes (snout–vent length) ranged from 200 to 1250 mm. Of the 205 snakes, 172 could be distinguished as juveniles (n = 116, 68.4%) or adults (n = 56, 31.6%). Most bites occurred in the autumn and spring seasons (n = 127, 62.0%) and in the early evening (n = 84, 41.8%), between 6 PM and 12 PM. The mean (± standard deviation) age of the victims was 26.6 ± 15.9 years, and 130 (63.4%) were men. Approximately 75% of the patients sought medical care within 6 h after the bite. Both lower (n = 92, 49.8%) and upper (n = 86, 46.5%) limbs were the most frequently bitten, particularly the feet and hands (n = 135, 73.0%). The local clinical manifestations were pain (n = 101, 49.3%), transitory bleeding (n = 39, 19.0%), erythema (n = 31, 15.1%), edema (n = 21, 10.2%), paresthesia (n = 17, 8.3%), severe pain (n = 9, 4.4%), radiating pain (n = 8, 3.9%), and ecchymosis (n = 1, 0.5%). Only 38 (18.5%) patients reported nom-specific systemic symptoms characterized by transient dizziness or mild headache, and 69 (33.7%) patients showed no evidence of envenomation. A 20 min whole blood clotting test was performed in 36 (17.6%) patients on admission and all of them had coagulable blood. Supportive treatment was offered to 80 (39.0%) of patients, namely, antiseptic (n = 43, 21.0%), antihistamines (n = 25, 12.2%), and analgesics (n = 24, 11.7%). Fourteen (6.8%) patients were inappropriately treated with antivenom. No sequelae or relevant complications were observed in patients, and the prognosis was benign. Therefore, although O. guibei bites can cause mild local symptomatology, it can be confused with corals snakes (mimics the highly venomous coral snake Micrurus frontalis). Then, it very is important that health professionals know how to make the correct diagnosis to avoid unnecessary use of antivenom.

Foram retrospectivamente analisados 205 casos de picadas de Oxyrhopus guibei, uma falsa cobra coral, admitidos no Hospital Vital Brazil (HVB) do Instituto Butantan, em São Paulo, Brasil, entre 1945 e 2018. Os casos incluídos foram aqueles em que a cobra foi trazida para o HVB e corretamente identificada. Dos 205 casos, foi possível descrever o sexo da serpente em 172 casos: 40 (65,5%) serpentes eram fêmeas. Apenas 83 serpentes, de 205, puderam ser estudadas devido ao seu estado de preservação. O comprimento total das cobras variou de 200 a 1250 mm. Das 205 cobras, 172 puderam ser classificadas como filhotes (n = 116, 68,4%) ou adultas (n = 56, 31,6%). A maioria das picadas ocorreu no outono e na primavera (n = 127, 62,0%) e no final da tarde e início da noite (n = 84, 41,8%), entre 18 e 24 horas. A média das idades dos pacientes (± desvio padrão) foi de 26,6 ± 15,9 anos, e 130 (63,4%) pacientes eram homens. Aproximadamente 75% dos pacientes procuraram atendimento médico dentro das primeiras 6 horas após a picada. Os membros inferiores (n = 92, 49,8%) e superiores (n = 86, 46,5%) foram os locais mais frequentemente atingidos, particularmente os pés e as mãos (n = 135, 73,0%). As manifestações clínicas locais foram dor (n = 101, 49,3%), sangramento transitório (n = 39, 19,0%), eritema (n = 31, 15,1%), edema (n = 21, 10,2%), parestesia (n = 17, 8,3%), dor intensa (n = 9, 4,4%), dor irradiada (n = 8, 3,9%) e equimose (n = 1, 0,5%). Apenas 38 (18,5%) pacientes relataram sintomas sistêmicos não específicos, caracterizados por tontura transitória ou cefaleia leve, e 69 (33,7%) pacientes não apresentaram evidências de envenenamento. O teste do tempo de coagulação sanguínea foi realizado em 36 (17,6%) pacientes na admissão e em todos o sangue estava coagulável. Tratamento de suporte foi oferecido a 80 (39,0%) pacientes, notadamente o uso de antissépticos (n = 43, 21,0%), anti-histamínicos (n = 25, 12,2%) e analgésicos (n = 24, 11,7%). Quatorze (6,8%) pacientes foram tratados inadequadamente com o soro antiveneno. Nenhuma sequela ou complicações foram observadas nos pacientes e o prognóstico foi benigno. Portanto, embora as picadas de O. guibei possam causar leve sintomatologia local, ela pode ser confundida com serpentes corais verdadeiras (Micrurus frontalis). Portanto, é muito importante que os profissionais de saúde saibam como fazer o diagnóstico correto para evitar o uso desnecessário do soro antiveneno.

Expressão do peptídeo recombinante Defb-Lm02, uma β-defensina da serpente Lachesis muta

Antimicrobial peptides (AMPs) are components of innate immune system, are present in all living organisms, acting quickly and in unspecific way as a chemical barrier and they have antimicrobial activity. β-defensins is a major family of AMPs with characteristic β- sheet-rich fold, six conserved Cys with particular spacing and intramolecular bonds. They are extensively studied in mammals but scarcely in snakes. The β-defensin Defb-Lm02, of Lachesis muta snake, is codified by a gene structured in three exons and has 38 amino acid residues, molecular weight of 4.6 kDa, net charge of +8 at pH 7 and isoelectric point (pI) of 10.35. The synthetic linear peptide of Defb-Lm02 was tested to antimicrobial activity: it presented the minimum inhibitory concentration against Gram negative bacteria: Escherichia coli 16 μg/mL and Citrobacter freundii 16 μg/mL; and Gram positive: Micrococcus luteus 4 μg/mL and Staphylococcus aureus 32 μg/mL. It did not inhibit the growth of Gram-negative Klebsiella pneumonia, Serratia marcescens, Providencia rettgeri and Morganella morganii until the concentration of 64 μg/mL. These results may be due to the linearity of synthetic peptide. As the defense tasks of β-defensin could be dependent on their 3D structure, the production of recombinant β-defensin may potentiate its antimicrobial activity or suggest a new function. The synthetic gene, maltose binding protein (MBP) – TEV protease recognition site – DefbLm02, was cloned into the pET28a expression vector. The protein was expressed in E. coli BL21 Star and C43, at two temperatures 30 ° C and 37 ° C. After 4 hours of induction with IPTG 1 mM, which showed the best condition of expression was BL21 Star at 30 °C. The major part of fusion protein was soluble after purification by affinity chromatography and after proteolysis. The protein fusion was checked by Western blot using an antibody anti-MBP.

Os peptídeos antimicrobianos (PAMs) fazem parte do sistema imune inato, presente em praticamente todas as formas de vida, age de maneira rápida e inespecífica, como uma barreira química e possuem atividade antimicrobiana. As β-defensinas são uma importante família de PAMs com características ricas em folhas β, seis Cys conservadas com espaçamento particular e ligações intramoleculares, são extensivamente estudadas em mamíferos, mas raramente em serpentes, e podem refletir uma adaptação de peptídeos de defesa epitelial do hospedeiro. A Defb-Lm02, uma defensina da serpente Lachesis muta, é codificada por um gene estruturado em três exons cuja tradução ao peptídeo maduro consiste em 38 resíduos de aminoácidos, massa molecular de 4,6 kDa, carga líquida de +8 em pH 7, ponto isoelétrico (pI) de 10,35. Esse peptídeo foi sintetizado na forma linear e testado para atividade antimicrobiana, resultando nas seguintes concentrações inibitórias mínima contra bactérias Gram negativa: Escherichia coli 16 μg/mL e Citrobacter freundii 16 μg/mL; contra Gram positiva: Micrococcus luteus 4 μg/mL e Staphylococcus aureus 32 μg/mL. Não inibiu o crescimento das bactérias Gram-negativas Klebsiella pneumonia, Serratia marcescens, Providencia rettgeri e Morganella morganii até a concentração de 64 μg/mL. Estes resultados podem ser devido à linearidade do peptídeo sintético. Sabemos que algumas atividades biológicas das β-defensinas são dependentes da sua estrutura 3D, portanto, a obtenção dessa toxina na forma recombinante pode potencializar sua atividade antimicrobiana ou até sugerir novas funções. O gene sintético, codificando a fusão proteína de ligação à maltose (MBP) - sítio de reconhecimento da protease TEV – DefbLm02, foi clonado no vetor de expressão pET28a. A proteína de fusão foi expressa em duas cepas de E. coli, BL21 Star e C43, em duas temperaturas, 30°C e 37°C. Após 4 horas de indução com IPTG 1 mM, a combinação BL21 Star e 30°C foi a que apresentou a melhor eficiência de expressão. A maior proporção da proteína foi obtida solúvel após purificação por cromatografia de afinidade, como também após a digestão com TEV. A proteína de fusão foi verificada por Western Blotting, utilizando anticorpo anti-MBP.

O recepcionamento e destinação das serpentes recebidas no Instituto Butantan / Reception and destination of snakes received at the Butantan Institute

Snakes register books have existed in Butantan Institute since 1903. These books are records of snakes lodged at the institution, containing information such as species, origin and sender. Currently, there is a specific area for receiving animals whose purpose is to record important information of snakes and other venomous animals that are delivered and donated to the institution, informing the donor, the species name and the risk level of these animals. Data analysis at the reception revealed that between 2012 and 2017 16,218 animals were recorded, including amphibians, lizards, amphisbaenians and snakes. Of these, a total of 15,478 are of snakes. While the genus of the serpents, 9,498 are poisonous of medical interest, consisting of pit vipers (Bothrops No. 5621), rattlesnake (Crotalus No. 3470), real coral snake (Micrurus No. 402) and bushmaster (Lachesis No. 5). The other 5,938 correspond to non-venomous snakes. Among the most frequent species, there are Erythrolamprus miliaris, Oxyrhopus guibei, Sibynomorphus mikanii and Tomodon dorsatus. At present, 92% of the snakes from the Butantan Institute come from São Paulo state and as regards the form of delivery, the official organizations account for only 3,490 of the total number of snakes delivered to the animal reception, against 9,731 specimens that were voluntarily delivered. The destination of the snakes received by the reception of the animals is done based on the species, animal conditions and the request of each laboratory. Among the laboratory, the Herpetology laboratory is responsible for receiving the largest amount of newly arrived species, receiving 81% of poisonous snakes and 44% non-poisonous snakes. It was still possible to count 294 exotic species among the genus Naja, Lampropeltis, Orthriophis, Pantherophis and Python. The present work constitutes an effort at institutional level to understand a little of the origin of serpents that enter the Butantan Institute. The objective proposed in this work has been achieved, based on the diagnosis of receiving snakes and distribution of specimens within the institution.

Livros de registro de serpentes do Instituto Butantan, existem desde 1903. Esses livros são registros das serpentes que deram entrada da instituição, contendo informações como espécie, procedência e remetente. Atualmente, existe um setor especifico para a recepção de animais, cujo objetivo é registrar as principais informações de serpentes e outros animais peçonhentos que são entregues e doadas a instituição, assim também informando ao doador a espécie e nível de periculosidade do animal, no ato da doação. A análise dos dados da recepção revelou que entre os anos de 2012 e 2017 foram registrados 16.218 animais, entre anfíbios, lagartos, anfisbenas e serpentes. Desses, um total de 15.478 são de serpentes. Enquanto os gêneros de serpentes, 9.498 são peçonhentas de interesse médico, compreendidas entre Jararacas (Bothrops No 5.621), Cascavel (Crotalus No3.470), Cobra coral- verdadeira (Micrurus No402) e Surucucu (Lachesis No5). Os outros 5.938 correspondem às serpentes não peçonhentas. Entre as espécies mais frequentes, as não peçonhentas Erythrolamprus miliaris, Oxyrhopus guibei, Sibynomorphus mikanii, Tomodon dorsatus. Atualmente 92% das serpentes do Instituto Butantan são procedentes do estado de São Paulo e quanto a forma de entrega os órgãos oficiais são responsáveis por apenas 3.490, do total de serpentes entregues a recepção de animais, contra 9.731 espécimes que foram entregues de forma voluntária. A destinação das serpentes recebidas pela recepção de animais é feito com base nas espécies, condições dos animais e da solicitação cada laboratório. Entre os laboratórios, o Laboratório de herpetologia é responsável por receber o maior volume de espécimes recém-chegados na recepção de animais, 81% das serpentes peçonhentas e 44% das não peçonhentas. Ainda foi possível contabilizar 294 espécies exóticas entre os gêneros Naja, Lampropeltis, Orthriophis, Pantherophis, Python. O presente trabalho configura- se como um esforço a nível institucional para buscar conhecer um pouco da origem das serpentes que entram no instituto Butantan. O objetivo proposto neste trabalho foi alcançado, a partir do diagnóstico da recepção de serpentes e a distribuição dos espécimes dentro da instituição.