Síndrome do ovário remanescente em cadela ­ relato de caso / Ovarian remnant syndrome in bich ­ case report / Síndrome de ovario restante en perra ­ reporte de caso

A síndrome do ovário remanescente é caracterizada pela remoção incompleta do ovário durante o procedimento de castração em fêmeas. O presente trabalho relata o caso de uma cadela, sem raça definida, submetida a ovário-histerectomia há um ano, mas continuava demonstrando sinais de estro pós castração. Foi necessário a realização de exames de exames complementares como ultrassonografia abdominal e citologia vaginal, sendo identificado uma estrutura vascularizada em topografia de ovário e células em fase de estro. A cadela foi submetida a uma laparotomia exploratória para retirada de tecido ovariano remanescente.

Remnant ovary syndrome is characterized by incomplete removal of the ovary during the castration procedure in females. The present work reports the case of a dog, of no defined breed, who underwent ovariosalpingohysterectomy 1 year ago and continued to show signs of heat after castration. It was necessary to perform imaging tests such as abdominal ultrasound, which identified a vascularized structure in ovarian topography and vaginal cytology, which identified cells in the estrus phase. The dog required an exploratory laparotomy to remove remaining ovarian tissue.

El síndrome de ovario remanente se caracteriza por la extirpación incompleta del ovario durante el procedimiento de castración en las mujeres. El presente trabajo reporta el caso de una perra, sin raza definida, a quien se le realizó ovariosalpingohisterectomía hace 1 año y continuó presentando signos de celo luego de la castración. Fue necesario realizar pruebas de imagen como ecografía abdominal, que identificó una estructura vascularizada en la topografía ovárica y citología vaginal, que identificó células en fase de estro. La perra requirió una laparotomía exploratoria para extirpar el tejido ovárico restante.

DNA damage and primordial follicle activation after in vitro culture of sheep ovarian cortex in Morus nigra leaf extract / Dano ao DNA e ativação do folículo primordial após a cultivo in vitro do córtex ovariano de ovelha em extrato de folha de Morus nigra

This study evaluated the effect of Morus nigra leaf extract, with or without supplementation, on morphology, activation and DNA damage of preantral follicles cultured within sheep ovarian tissue. Ovaries were collected and divided into fragments, being one fixed for histological and Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) analysis (fresh control). The remaining fragments were cultured for 7 days in alpha minimum essential media (α-MEM) supplemented with bovine serum albumin (BSA), insulin, transferrin, selenium, glutamine, hypoxanthine and ascorbic acid (α-MEM+; control medium) or into medium composed of M. nigra extract without supplements (0.1; 0.2 or 0.4mg/mL) or supplemented with the same substances described above for α-MEM+ (MN 0.1+; 0.2+ or 0.4+mg/mL). Then, tissues were destined to histological and TUNEL analysis. The α-MEM+ treatment had more morphologically normal follicles than all M. nigra extract treatments. However, α-MEM+ treatment also showed signs of atresia because the percentage of TUNEL positive cells was similar in α-MEM+ and in 0.1mg/mL M. nigra without and with supplements. Moreover, a reduction in the primordial follicles and an increase in the growing ones were observed in all treatments, except 0.2mg/mL M. nigra. In conclusion, the follicles cultured at 0.1mg/mL M. nigra extract were in good condition and able to continue their development, as demonstrated by the same rates of DNA damage and follicular activation as the control medium.(AU)

Este estudo avaliou o efeito do extrato das folhas de Morus nigra, com ou sem suplementos, sobre a morfologia, a ativação e o dano ao DNA de folículos pré-antrais cultivados inclusos em tecido ovariano. Os ovários foram coletados e divididos em fragmentos, sendo um fixado para análise histológica e ensaio de marcação de terminações dUTP mediada por desoxinucleotidil transferase terminal (TUNEL) (controle fresco). Os fragmentos restantes foram cultivados durante 7 dias em meio essencial mínimo alfa (α-MEM) suplementado com albumina sérica bovina (BSA), insulina, transferrina, selênio, glutamina, hipoxantina e ácido ascorbico (α-MEM+; meio controle) ou em meio composto de extrato de M. nigra sem suplementos (0,1; 0,2 or 0,4mg/mL) ou suplementado com as mesmas substâncias descritas para α-MEM+ (MN 0,1+; 0,2+ or 0,4+mg/mL). Então, os tecidos foram destinados à análise histológica e TUNEL. O tratamento do α-MEM+ apresentou mais folículos morfologicamente normais que todos os tratamentos do extrato de M. nigra. No entanto, o tratamento com α-MEM+ também mostrou sinais de atresia, pois a porcentagem de células TUNEL positivas foi semelhante em α-MEM+ e em 0,1mg/mL M. nigra sem e com suplementos. Além disso, observou-se uma redução nos folículos primordiais e um aumento nos folículos em crescimento em todos os tratamentos, exceto 0,2mg/mL M. nigra. Em conclusão, os folículos cultivados com 0,1mg/mL de extrato de M. nigra estavam em boas condições e aptos a continuar seu desenvolvimento, como demonstrado pelas taxas de dano ao DNA e de ativação folicular semelhantes ao meio controle.(AU)

DNA damage and primordial follicle activation after in vitro culture of sheep ovarian cortex in Morus nigra leaf extract / Dano ao DNA e ativação do folículo primordial após a cultivo in vitro do córtex ovariano de ovelha em extrato de folha de Morus nigra

This study evaluated the effect of Morus nigra leaf extract, with or without supplementation, on morphology, activation and DNA damage of preantral follicles cultured within sheep ovarian tissue. Ovaries were collected and divided into fragments, being one fixed for histological and Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) analysis (fresh control). The remaining fragments were cultured for 7 days in alpha minimum essential media (α-MEM) supplemented with bovine serum albumin (BSA), insulin, transferrin, selenium, glutamine, hypoxanthine and ascorbic acid (α-MEM+; control medium) or into medium composed of M. nigra extract without supplements (0.1; 0.2 or 0.4mg/mL) or supplemented with the same substances described above for α-MEM+ (MN 0.1+; 0.2+ or 0.4+mg/mL). Then, tissues were destined to histological and TUNEL analysis. The α-MEM+ treatment had more morphologically normal follicles than all M. nigra extract treatments. However, α-MEM+ treatment also showed signs of atresia because the percentage of TUNEL positive cells was similar in α-MEM+ and in 0.1mg/mL M. nigra without and with supplements. Moreover, a reduction in the primordial follicles and an increase in the growing ones were observed in all treatments, except 0.2mg/mL M. nigra. In conclusion, the follicles cultured at 0.1mg/mL M. nigra extract were in good condition and able to continue their development, as demonstrated by the same rates of DNA damage and follicular activation as the control medium.(AU)

Este estudo avaliou o efeito do extrato das folhas de Morus nigra, com ou sem suplementos, sobre a morfologia, a ativação e o dano ao DNA de folículos pré-antrais cultivados inclusos em tecido ovariano. Os ovários foram coletados e divididos em fragmentos, sendo um fixado para análise histológica e ensaio de marcação de terminações dUTP mediada por desoxinucleotidil transferase terminal (TUNEL) (controle fresco). Os fragmentos restantes foram cultivados durante 7 dias em meio essencial mínimo alfa (α-MEM) suplementado com albumina sérica bovina (BSA), insulina, transferrina, selênio, glutamina, hipoxantina e ácido ascorbico (α-MEM+; meio controle) ou em meio composto de extrato de M. nigra sem suplementos (0,1; 0,2 or 0,4mg/mL) ou suplementado com as mesmas substâncias descritas para α-MEM+ (MN 0,1+; 0,2+ or 0,4+mg/mL). Então, os tecidos foram destinados à análise histológica e TUNEL. O tratamento do α-MEM+ apresentou mais folículos morfologicamente normais que todos os tratamentos do extrato de M. nigra. No entanto, o tratamento com α-MEM+ também mostrou sinais de atresia, pois a porcentagem de células TUNEL positivas foi semelhante em α-MEM+ e em 0,1mg/mL M. nigra sem e com suplementos. Além disso, observou-se uma redução nos folículos primordiais e um aumento nos folículos em crescimento em todos os tratamentos, exceto 0,2mg/mL M. nigra. Em conclusão, os folículos cultivados com 0,1mg/mL de extrato de M. nigra estavam em boas condições e aptos a continuar seu desenvolvimento, como demonstrado pelas taxas de dano ao DNA e de ativação folicular semelhantes ao meio controle.(AU)

Estimation, morphometry and ultrastructure of ovarian preantral follicle population in agouti (Dasyprocta leporina) / Morfometria, estimativa e ultraestrutura da população folicular ovariana preantral de cutia (Dasyprocta leporina)

The aim of this study was to characterize the preantral ovarian follicular population in agoutis (D. leporina) by estimating the number of follicles at each developmental category, and also describe the morphometry and the specific features of the follicle and the oocyte by using light and transmission electron microscopy. The length of each ovary was measured using a caliper rule, longitudinally sectioned into two halves and both were immediately fixed to perform the estimation of follicular population and ultrastructural analysis. The mean (±S.E.M.) population of follicular per pair of ovary was estimated at 4419.8±532.26 and 5397.52±574.91 for right and left ovaries, respectively, but no differences were observed between them. The diameters for follicles, oocyte and nuclei were: 18.62±3.40µm, 12.28±2.37µm and 6.10±0.93µm for primordial, 23.75±5.70µm, 14.22±3.00µm and 6.70±1.24µm for primary and 88.55±17.61µm, 52.85±17.56µm and 22.33±17.61µm for secondary follicles, respectively. The most of the follicles found belonged to the primordial category (86.63%), followed by primary (13.01%) and secondary (0.35%) one. Additionally, polyovular follicles were observed in all the animals and they represented 7.51% of the total follicles counted. The ultrastructural analysis showed that the oocyte presented a central and regular nuclei, displaying a homogenous mass. Among the organelles, the mitochondria were the most abundant and the oocyte Golgi apparatus was rarely observed. In conclusion, this work shows for the first time the characterization of the population of preantral follicles in the ovary of Dasyprocta leporina. Those information will be useful for further development and adaptation of biotechniques such as germplasm cryopreservation and in vitro gametes manipulation.(AU)

O objetivo deste trabalho foi caracterizar a população folicular ovariana pré-antral em cutias (D. leporina) estimando o número de folículos em cada categoria de desenvolvimento, e também descrever a morfometria e as características específicas do folículo e oócito usando microscopia de luz e eletrônica de transmissão. O comprimento de cada ovário foi medido utilizando um paquímetro, seccionados longitudinalmente em duas metades e ambos foram imediatamente fixados para realizar a estimativa da população folicular e análise ultraestrutural. A média (±S.E.M.) da população folicular por par de ovário foi estimada em 4419,8±532,26 e 5397,52±574,91 nos ovários direito e esquerdo, respectivamente, mas não foram observadas diferenças entre eles. Os diâmetros dos folículos, oócito e núcleos, respectivamente, foram: 18,62±3,40µm, 12,28±2.37µm e 6,10±0,93µm para primordial, 23,75±5,70µm, 14,22±3,00µm e 6,70±1,24µm para primário e 88,55±17,61µm, 52,85±17,56µm e 22,33±17,61µm de folículos secundários. A maioria dos folículos encontrados pertencia à categoria primordial (86,63%), seguido pelo primário (13,01%) e um secundário (0,35%). Adicionalmente, os folículos poliovulares foram observados em todos os animais e representavam 7,51% do total de folículos contados. A análise ultra-estrutural mostrou que o oócito apresentou núcleos centrais e regulares, exibindo uma massa homogênea. Dentre as organelas, as mitocôndrias foram as mais abundantes e o aparelho de Golgi do oócito foi raramente observado. Em conclusão, este trabalho mostra pela primeira vez a caracterização da população de folículos pré-antrais do ovário da Dasyprocta leporina. Essas informações serão úteis para o desenvolvimento e adaptação de biotécnicas, como a criopreservação de germoplasma e manipulação de gametas in vitro.(AU)

Estimation, morphometry and ultrastructure of ovarian preantral follicle population in agouti (Dasyprocta leporina) / Morfometria, estimativa e ultraestrutura da população folicular ovariana preantral de cutia (Dasyprocta leporina)

The aim of this study was to characterize the preantral ovarian follicular population in agoutis (D. leporina) by estimating the number of follicles at each developmental category, and also describe the morphometry and the specific features of the follicle and the oocyte by using light and transmission electron microscopy. The length of each ovary was measured using a caliper rule, longitudinally sectioned into two halves and both were immediately fixed to perform the estimation of follicular population and ultrastructural analysis. The mean (±S.E.M.) population of follicular per pair of ovary was estimated at 4419.8±532.26 and 5397.52±574.91 for right and left ovaries, respectively, but no differences were observed between them. The diameters for follicles, oocyte and nuclei were: 18.62±3.40µm, 12.28±2.37µm and 6.10±0.93µm for primordial, 23.75±5.70µm, 14.22±3.00µm and 6.70±1.24µm for primary and 88.55±17.61µm, 52.85±17.56µm and 22.33±17.61µm for secondary follicles, respectively. The most of the follicles found belonged to the primordial category (86.63%), followed by primary (13.01%) and secondary (0.35%) one. Additionally, polyovular follicles were observed in all the animals and they represented 7.51% of the total follicles counted. The ultrastructural analysis showed that the oocyte presented a central and regular nuclei, displaying a homogenous mass. Among the organelles, the mitochondria were the most abundant and the oocyte Golgi apparatus was rarely observed. In conclusion, this work shows for the first time the characterization of the population of preantral follicles in the ovary of Dasyprocta leporina. Those information will be useful for further development and adaptation of biotechniques such as germplasm cryopreservation and in vitro gametes manipulation.(AU)

O objetivo deste trabalho foi caracterizar a população folicular ovariana pré-antral em cutias (D. leporina) estimando o número de folículos em cada categoria de desenvolvimento, e também descrever a morfometria e as características específicas do folículo e oócito usando microscopia de luz e eletrônica de transmissão. O comprimento de cada ovário foi medido utilizando um paquímetro, seccionados longitudinalmente em duas metades e ambos foram imediatamente fixados para realizar a estimativa da população folicular e análise ultraestrutural. A média (±S.E.M.) da população folicular por par de ovário foi estimada em 4419,8±532,26 e 5397,52±574,91 nos ovários direito e esquerdo, respectivamente, mas não foram observadas diferenças entre eles. Os diâmetros dos folículos, oócito e núcleos, respectivamente, foram: 18,62±3,40µm, 12,28±2.37µm e 6,10±0,93µm para primordial, 23,75±5,70µm, 14,22±3,00µm e 6,70±1,24µm para primário e 88,55±17,61µm, 52,85±17,56µm e 22,33±17,61µm de folículos secundários. A maioria dos folículos encontrados pertencia à categoria primordial (86,63%), seguido pelo primário (13,01%) e um secundário (0,35%). Adicionalmente, os folículos poliovulares foram observados em todos os animais e representavam 7,51% do total de folículos contados. A análise ultra-estrutural mostrou que o oócito apresentou núcleos centrais e regulares, exibindo uma massa homogênea. Dentre as organelas, as mitocôndrias foram as mais abundantes e o aparelho de Golgi do oócito foi raramente observado. Em conclusão, este trabalho mostra pela primeira vez a caracterização da população de folículos pré-antrais do ovário da Dasyprocta leporina. Essas informações serão úteis para o desenvolvimento e adaptação de biotécnicas, como a criopreservação de germoplasma e manipulação de gametas in vitro.(AU)

Estimation, morphometry and ultrastructure of ovarian preantral follicle population in agouti (Dasyprocta leporina)

ABSTRACT: The aim of this study was to characterize the preantral ovarian follicular population in agoutis (D. leporina) by estimating the number of follicles at each developmental category, and also describe the morphometry and the specific features of the follicle and the oocyte by using light and transmission electron microscopy. The length of each ovary was measured using a caliper rule, longitudinally sectioned into two halves and both were immediately fixed to perform the estimation of follicular population and ultrastructural analysis. The mean (±S.E.M.) population of follicular per pair of ovary was estimated at 4419.8±532.26 and 5397.52±574.91 for right and left ovaries, respectively, but no differences were observed between them. The diameters for follicles, oocyte and nuclei were: 18.62±3.40m, 12.28±2.37m and 6.10±0.93m for primordial, 23.75±5.70m, 14.22±3.00m and 6.70±1.24m for primary and 88.55±17.61m, 52.85±17.56m and 22.33±17.61m for secondary follicles, respectively. The most of the follicles found belonged to the primordial category (86.63%), followed by primary (13.01%) and secondary (0.35%) one. Additionally, polyovular follicles were observed in all the animals and they represented 7.51% of the total follicles counted. The ultrastructural analysis showed that the oocyte presented a central and regular nuclei, displaying a homogenous mass. Among the organelles, the mitochondria were the most abundant and the oocyte Golgi apparatus was rarely observed. In conclusion, this work shows for the first time the characterization of the population of preantral follicles in the ovary of Dasyprocta leporina. Those information will be useful for further development and adaptation of biotechniques such as germplasm cryopreservation and in vitro gametes manipulation.

RESUMO: O objetivo deste trabalho foi caracterizar a população folicular ovariana pré-antral em cutias (D. leporina) estimando o número de folículos em cada categoria de desenvolvimento, e também descrever a morfometria e as características específicas do folículo e oócito usando microscopia de luz e eletrônica de transmissão. O comprimento de cada ovário foi medido utilizando um paquímetro, seccionados longitudinalmente em duas metades e ambos foram imediatamente fixados para realizar a estimativa da população folicular e análise ultraestrutural. A média (±S.E.M.) da população folicular por par de ovário foi estimada em 4419,8±532,26 e 5397,52±574,91 nos ovários direito e esquerdo, respectivamente, mas não foram observadas diferenças entre eles. Os diâmetros dos folículos, oócito e núcleos, respectivamente, foram: 18,62±3,40m, 12,28±2.37m e 6,10±0,93m para primordial, 23,75±5,70m, 14,22±3,00m e 6,70±1,24m para primário e 88,55±17,61m, 52,85±17,56m e 22,33±17,61m de folículos secundários. A maioria dos folículos encontrados pertencia à categoria primordial (86,63%), seguido pelo primário (13,01%) e um secundário (0,35%). Adicionalmente, os folículos poliovulares foram observados em todos os animais e representavam 7,51% do total de folículos contados. A análise ultra-estrutural mostrou que o oócito apresentou núcleos centrais e regulares, exibindo uma massa homogênea. Dentre as organelas, as mitocôndrias foram as mais abundantes e o aparelho de Golgi do oócito foi raramente observado. Em conclusão, este trabalho mostra pela primeira vez a caracterização da população de folículos pré-antrais do ovário da Dasyprocta leporina. Essas informações serão úteis para o desenvolvimento e adaptação de biotécnicas, como a criopreservação de germoplasma e manipulação de gametas in vitro.

Comparison between Slow Freezing and Vitrification in Terms of Ovarian Tissue Viability in a Bovine Model / Comparação da viabilidade do tecido ovariano após congelamento lento e vitrificação em modelo bovino

Abstract Objective To assess the viability of bovine ovarian tissue after cryopreservation through either slow freezing or vitrification, and to compare it to that of control tissue by performing morphological analyses. Methods The study included 20 bovine ovarian cortex fragments that were divided into control, vitrification, and slow freezing groups. Each group consisted of four fragments of the same ovary, two fixed without cultivation, and two fixed with cultivation. Tissues were evaluated based on follicular morphology immediately after heating and after 7 days of culture, and compared with the control group. Results A total of 240 fragments were analyzed, generating a sample of 1,344 follicles without cultivation and 552 with cultivation. When the non-cultivated samples were classified as non-atretic follicles, 572 were found in the control group, 289 in the vitrification group, and 373 in the slow freezing group, showing no significant differences. When classified as atretic, 46 follicles were found in the control group, 23 in the vitrification group, and 41 in the slow freezing group, also showing no statistical difference. In the post-culture sample, an evolution of the follicular stages could be observed. This finding was important to support that the follicles considered non-atretic in the non-cultivated group were actually viable in the morphological evaluation. Conclusion With no differences between the protocols, vitrification was shown to be an advanced and alternative method for patients who will undergo treatments that.

Resumo Objetivo avaliar a viabilidade do tecido ovariano bovino após a criopreservação, utilizando congelamento lento e vitrificação, e comparando com o tecido controle por meio de análises morfológicas. Métodos o estudo incluiufragmentos de córtex de vinte ovários bovinos divididos em grupos controle, vitrificação e congelamento lento. Cada grupo foi composto por quatro fragmentos do mesmo ovário, sendo dois fragmentos fixados sem cultivo e dois fragmentos fixados pós-cultivo. Os tecidos foram avaliados pela morfologia folicular logo após o aquecimento e após sete dias de cultivo, e comparados com o grupo controle. Resultados um total de 240 fragmentos foi analisado, gerando uma amostra de 1.344 folículos sem cultivo e 552 pós-cultivo. Quando a amostra sem cultivo teve seus folículos agrupados em não atrésicos, obtivemos 572 no grupo controle, 289 no vitrificação, e 373 no congelamento lento, não apresentando diferença estatística. Quando agrupados em atrésicos, o grupo controle apresentou 46 folículos, o vitrificação, 23, e o congelamento lento, 41, não apresentando também diferença estatística. Na amostra pós-cultivo, podemos observar uma evolução dos estágios foliculares: esse achado foi importante para sustentar que os folículos considerados não atrésicos na avaliação morfológica sem cultivo estavam realmente viáveis. Conclusão não havendo diferenças entre os protocolos, a vitrificação se mostra um avanço e um método alternativo para pacientes que irão se submeter a tratamentos que podem levar a uma falência ovariana, uma vez que a metodologia é mais barata, mais rápida e mais bem adaptável a uma rotina de um laboratório.

Natural infection in ovarian structures by bovine herpesvirus 1: molecular and serological detection / Infecção natural em estruturas ovarianas pelo Herpesvírus bovino 1: detecção molecular e sorológica

In this study, the polymerase chain reaction (PCR) was used to evaluate the presence of viral DNA in ovarian tissue, in the cumulus-oocyte complex (COC), follicular liquid, and blood of animals naturally infected with bovine herpesvirus-1 (BoHV-1). The serum profile of the sampled animals was also evaluated. Samples of serum, blood, ovarian tissue, follicular liquid, and COC were collected from 147 slaughterhouse animals that were not vaccinated against BoHV-1. Contaminated or insufficient samples were disregarded. Serological tests allowed the identification of serum-positive animals with neutralizing antibodies against BoHV-1. Analysis of samples by PCR revealed the presence of viral DNA in 0.9% (1/115) of the COC samples, in 4.3% (5/117) of the ovarian tissue samples, and in 2.8% (3/108) of the blood samples. Viral DNA was not detected in any of the follicular liquid samples. In serological samples, a positivity of 83.6% (117/140) was observed for BoHV-1. All PCR-positive animals, regardless of the samples analyzed, showed positivity in the serum neutralization test for the detection of BoHV-1-specific antibodies. According to these results, a high prevalence of antibodies against BoHV-1 was detected in naturally infected animals from different herds, and the molecular tests revealed the presence of viral DNA in bovine ovarian tissue, providing evidence that this might be...(AU)

Neste trabalho foi avaliada a presença do DNA viral, por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), no tecido ovariano, nos oócitos, líquido folicular e sangue de vacas naturalmente infectadas. Também foi avaliado o perfil sorológico dos animais amostrados. Foram coletadas amostras de soro, sangue, tecido ovariano, líquido folicular e complexo cumulus-oócitos de 147 animais abatidos em frigorífico não vacinados contra o herpesvirus bovino 1 (BoHV-1). Amostras tóxicas ou insuficientes foram descartadas. Os testes sorológicos foram realizados permitindo a identificação dos animais soropositivos para anticorpos neutralizantes contra o BoHV-1. Foram realizadas as PCRs onde foi observada a presença do DNA viral em 0,9% (1/115) dos oócitos, em 4,3% (5/117) do tecido ovariano e em 2,8% (3/108) do sangue. Em nenhuma das amostras de líquido folicular foi detectado o DNA viral. Nas amostras sorológicas observou-se 83,6% (117/140) de positividade para o BoHV-1. Dentre os animais positivos na PCR, independente das amostras, todos apresentavam positividade no teste de soroneutralização para detecção de anticorpos para BoHV-1. Conclui-se que em animais de diferentes rebanhos analisados foi detectada alta prevalência de anticorpos contra o BoHV-1 e que nos testes moleculares houve a presença do DNA viral em amostras de tecidos ovarianos de bovinos, evidenciando que estas estruturas poderia...(AU)

Natural infection in ovarian structures by bovine herpesvirus 1: molecular and serological detection / Infecção natural em estruturas ovarianas pelo Herpesvírus bovino 1: detecção molecular e sorológica

In this study, the polymerase chain reaction (PCR) was used to evaluate the presence of viral DNA in ovarian tissue, in the cumulus-oocyte complex (COC), follicular liquid, and blood of animals naturally infected with bovine herpesvirus-1 (BoHV-1). The serum profile of the sampled animals was also evaluated. Samples of serum, blood, ovarian tissue, follicular liquid, and COC were collected from 147 slaughterhouse animals that were not vaccinated against BoHV-1. Contaminated or insufficient samples were disregarded. Serological tests allowed the identification of serum-positive animals with neutralizing antibodies against BoHV-1. Analysis of samples by PCR revealed the presence of viral DNA in 0.9% (1/115) of the COC samples, in 4.3% (5/117) of the ovarian tissue samples, and in 2.8% (3/108) of the blood samples. Viral DNA was not detected in any of the follicular liquid samples. In serological samples, a positivity of 83.6% (117/140) was observed for BoHV-1. All PCR-positive animals, regardless of the samples analyzed, showed positivity in the serum neutralization test for the detection of BoHV-1-specific antibodies. According to these results, a high prevalence of antibodies against BoHV-1 was detected in naturally infected animals from different herds, and the molecular tests revealed the presence of viral DNA in bovine ovarian tissue, providing evidence that this might be...

Neste trabalho foi avaliada a presença do DNA viral, por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), no tecido ovariano, nos oócitos, líquido folicular e sangue de vacas naturalmente infectadas. Também foi avaliado o perfil sorológico dos animais amostrados. Foram coletadas amostras de soro, sangue, tecido ovariano, líquido folicular e complexo cumulus-oócitos de 147 animais abatidos em frigorífico não vacinados contra o herpesvirus bovino 1 (BoHV-1). Amostras tóxicas ou insuficientes foram descartadas. Os testes sorológicos foram realizados permitindo a identificação dos animais soropositivos para anticorpos neutralizantes contra o BoHV-1. Foram realizadas as PCRs onde foi observada a presença do DNA viral em 0,9% (1/115) dos oócitos, em 4,3% (5/117) do tecido ovariano e em 2,8% (3/108) do sangue. Em nenhuma das amostras de líquido folicular foi detectado o DNA viral. Nas amostras sorológicas observou-se 83,6% (117/140) de positividade para o BoHV-1. Dentre os animais positivos na PCR, independente das amostras, todos apresentavam positividade no teste de soroneutralização para detecção de anticorpos para BoHV-1. Conclui-se que em animais de diferentes rebanhos analisados foi detectada alta prevalência de anticorpos contra o BoHV-1 e que nos testes moleculares houve a presença do DNA viral em amostras de tecidos ovarianos de bovinos, evidenciando que estas estruturas poderia...

Current status and future perspective of canine and feline ovarian tissue culture / Status atual e perspectiva futura de cultura de tecido ovariano canino e felino

The culture of ovarian follicles is an important tool for understanding of the mechanisms controlling follicle development and differentiation of its oocyte. The benefit from recovering developmentally competent oocytes from small, immature follicles (primordial, primary, secondary and early antral) also would be significant, ranging from rescue of genomes from endangered species to preserving fertility in female cancer survivors. To-date, live offspring from cultured primordial follicles has occurred only in the mouse. Progress in larger, more complex species has been limited because these animal models have longer durations of natural folliculogenesis, thereby requiring more culture time to generate fully grown follicles and oocytes. In this presentation, we highlight current status of this topic for domestic carnivores (i.e., dogs and cats) as well as future research priorities.

A cultura de folículos ovarianos é uma ferramenta importante para o entendimento dos mecanismos que controlam o desenvolvimento de folículos e a diferenciação de oócitos. O benefício da recuperação de oócitos competentes em termos de desenvolvimento de folículos pequenos e imaturas (primordiais, primários, secundários e antral precoce) também seria significativo, variando do resgate de genoma de espécies em extinção à preservação da fertilidade em sobreviventes de câncer femininos. Até o momento, descendentes de folículos primordiais cultivados ocorreram somente em ratos. O progresso em espécies maiores e mais complexas tem sido limitado porque estes modelos de animais tem durações de foliculogênese mais longa, requerendo maior tempo de cultura para gerar folículos e oócitos completamente crescidos. Nesta apresentação ressaltamos o status atual deste tópico para carnívoros domésticos (i.e. cães e gatos), além de prioridades futuras de pesquisa.

Current status and future perspective of canine and feline ovarian tissue culture / Status atual e perspectiva futura de cultura de tecido ovariano canino e felino

The culture of ovarian follicles is an important tool for understanding of the mechanisms controlling follicle development and differentiation of its oocyte. The benefit from recovering developmentally competent oocytes from small, immature follicles (primordial, primary, secondary and early antral) also would be significant, ranging from rescue of genomes from endangered species to preserving fertility in female cancer survivors. To-date, live offspring from cultured primordial follicles has occurred only in the mouse. Progress in larger, more complex species has been limited because these animal models have longer durations of natural folliculogenesis, thereby requiring more culture time to generate fully grown follicles and oocytes. In this presentation, we highlight current status of this topic for domestic carnivores (i.e., dogs and cats) as well as future research priorities.(AU)

A cultura de folículos ovarianos é uma ferramenta importante para o entendimento dos mecanismos que controlam o desenvolvimento de folículos e a diferenciação de oócitos. O benefício da recuperação de oócitos competentes em termos de desenvolvimento de folículos pequenos e imaturas (primordiais, primários, secundários e antral precoce) também seria significativo, variando do resgate de genoma de espécies em extinção à preservação da fertilidade em sobreviventes de câncer femininos. Até o momento, descendentes de folículos primordiais cultivados ocorreram somente em ratos. O progresso em espécies maiores e mais complexas tem sido limitado porque estes modelos de animais tem durações de foliculogênese mais longa, requerendo maior tempo de cultura para gerar folículos e oócitos completamente crescidos. Nesta apresentação ressaltamos o status atual deste tópico para carnívoros domésticos (i.e. cães e gatos), além de prioridades futuras de pesquisa.(AU)

Congelação lenta de tecido ovariano ovino utilizando 1, 2- propanodiol (PROH) seguida de incubação de curta duração / Sheep ovarian tissue slow freezing using 1, 2-propanediol (PROH) as cryoprotectant followed by short-term in vitro culture

A criopreservação de tecido ovariano tem como principal objetivo, a manutenção deste tecido para sua posterior utilização, garantindo a preservação do material biológico de fêmeas de animais de alto valor genético. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos definir protocolo ótimo para criopreservação de tecido ovariano ovino utilizando PROH como agente crioprotetor e avaliar a resposta do tecido criopreservado incubado in vitro por curtos períodos. Para tanto, o tecido ovariano foi exposto (5, 10 ou 20 minutos) e/ou congelado utilizando PROH em duas diferentes concentrações (1,0 ou 1,5M). Em seguida, após a definição do protocolo mais adequado, realizouse a incubação deste tecido por 2 ou 4 horas. Em ambas as etapas, o tecido ovariano foi avaliado por Histologia Clássica ou viabilidade por inclusão em Azul de Tripan. Verificou-se que a exposição por 5 minutos seguida de criopresevação do tecido em solução de 1,5 M de PROH garantiu percentual de folículos viáveis significativamente semelhantes ao tecido fresco (P<0,05). Em seguida, o tecido congelado nessas condições foi cultivado por 2 ou 4 horas. Tal procedimento demonstrou que, com o decorrer do cultivo, os folículos sofrem perda gradual de sua normalidade morfológica em comparação ao tecido fresco, o que foi confirmado pela análise de viabilidade (P<0,05). Assim, o presente trabalho conclui que é possível congelar eficientemente o tecido ovariano ovino utilizando 1,5 M de PROH e exposição por 5 minutos e, que ocorre uma redução gradual na qualidade folicular do tecido criopreservado e submetido a curtos períodos de incubação.(AU)

Ovarian tissue cryopreservation aims to maintain the tissue for later use, ensuring the preservation of biologic material from women and high genetic valuable animals. In this context, this work aimed to define an optimum sheep ovarian tissue cryopreservation protocol using PROH as crioprotectant and to evaluate the responsiveness of cryopreservated tissue to a short-term in vitro culture. Then, the ovarian tisse was exposed (5, 10 or 30 minutes) and/or cryopreservated using PROH (1,0 or 1,5M). After the definition of the most appropriate protocol, the tissue was cultures for 2 or 4 hours. In both stages, ovarian tissue was evaluated by Classic Histology and viability using Trypan blue staining. We observed that the exposure for 5 minutes followed by cryopreservation in 1,5M PROH maintained similar percentages of viable follicles than fresh tissue (P<0,05). Thereafter, cryopreserved tissue was cultured for 2 or 4 hours. This procedure showed that, as in vitro culture goes on, follicles suffer gradual loss in their morphology, what was confirmed by viability analysis (P<0,05) Thus, this work concludes that is possible to properly cryopreservate sheep ovarian tissue using 1,5M PROH and 5 minutes exposure. Moreover, it occurs a gradual quality reduction of follicles obtained from short-term cultured tissue after cryopreservation procedure.(AU)

Congelação lenta de tecido ovariano ovino utilizando 1, 2- propanodiol (PROH) seguida de incubação de curta duração / Sheep ovarian tissue slow freezing using 1, 2-propanediol (PROH) as cryoprotectant followed by short-term in vitro culture

A criopreservação de tecido ovariano tem como principal objetivo, a manutenção deste tecido para sua posterior utilização, garantindo a preservação do material biológico de fêmeas de animais de alto valor genético. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos definir protocolo ótimo para criopreservação de tecido ovariano ovino utilizando PROH como agente crioprotetor e avaliar a resposta do tecido criopreservado incubado in vitro por curtos períodos. Para tanto, o tecido ovariano foi exposto (5, 10 ou 20 minutos) e/ou congelado utilizando PROH em duas diferentes concentrações (1,0 ou 1,5M). Em seguida, após a definição do protocolo mais adequado, realizouse a incubação deste tecido por 2 ou 4 horas. Em ambas as etapas, o tecido ovariano foi avaliado por Histologia Clássica ou viabilidade por inclusão em Azul de Tripan. Verificou-se que a exposição por 5 minutos seguida de criopresevação do tecido em solução de 1,5 M de PROH garantiu percentual de folículos viáveis significativamente semelhantes ao tecido fresco (P<0,05). Em seguida, o tecido congelado nessas condições foi cultivado por 2 ou 4 horas. Tal procedimento demonstrou que, com o decorrer do cultivo, os folículos sofrem perda gradual de sua normalidade morfológica em comparação ao tecido fresco, o que foi confirmado pela análise de viabilidade (P<0,05). Assim, o presente trabalho conclui que é possível congelar eficientemente o tecido ovariano ovino utilizando 1,5 M de PROH e exposição por 5 minutos e, que ocorre uma redução gradual na qualidade folicular do tecido criopreservado e submetido a curtos períodos de incubação.

Ovarian tissue cryopreservation aims to maintain the tissue for later use, ensuring the preservation of biologic material from women and high genetic valuable animals. In this context, this work aimed to define an optimum sheep ovarian tissue cryopreservation protocol using PROH as crioprotectant and to evaluate the responsiveness of cryopreservated tissue to a short-term in vitro culture. Then, the ovarian tisse was exposed (5, 10 or 30 minutes) and/or cryopreservated using PROH (1,0 or 1,5M). After the definition of the most appropriate protocol, the tissue was cultures for 2 or 4 hours. In both stages, ovarian tissue was evaluated by Classic Histology and viability using Trypan blue staining. We observed that the exposure for 5 minutes followed by cryopreservation in 1,5M PROH maintained similar percentages of viable follicles than fresh tissue (P<0,05). Thereafter, cryopreserved tissue was cultured for 2 or 4 hours. This procedure showed that, as in vitro culture goes on, follicles suffer gradual loss in their morphology, what was confirmed by viability analysis (P<0,05) Thus, this work concludes that is possible to properly cryopreservate sheep ovarian tissue using 1,5M PROH and 5 minutes exposure. Moreover, it occurs a gradual quality reduction of follicles obtained from short-term cultured tissue after cryopreservation procedure.

Caracterização dos danos celulares em gametas femininos e embriões após criopreservação / Characterization of cellular damage in female gametes and embryos after cryopreservation

Background: Cryopreservation is a biotech successfully employed in female gametes and embryos. This technique is of great importance for propagation of genetic material from animals with high-value livestock as well as to preserve the fertility of women undergoing cancer treatments. However, low temperatures can result in damage to different cellular compartments and organelles. This damage culminates in reduced viability, since they affect cell metabolism. Review: Cryopreservation consists of maintenance of biological material at low temperatures, in which chemical reactions are ceased, however, allowing the cells to preserve their viability. However, the decrease of temperature and subsequent warming may result in cellular damage. These damages occur in the cell membrane, cytoplasmic organelles and the cell nucleus. It is believed that the first cell structure undergoing cryoinjury is the plasma membrane, responsible for maintaining homeostasis within the cell, and the loss of plasma membrane during the reduction temperature reported the main damage. The membrane damage due to cryopreservation appears to correlate with the reduction of thermal energy at low temperatures, thus limiting the movement of molecules through the phospholipids of lipid bilayer. Cryopreservation also alters the morphology, structure and cellular distribution of lipid droplets, reducing the survival of oocytes and embryos. The physical state changes, besides changing physicochemical properties of intracellular lipid may also result in damage to lipids associated with the cellular cytoskeleton. The interaction between cell lipid phase and components of cytoskeleton is complex and hardening of these lipids can cause deformation and disruption of cytoskeleton with consequent negative effect on cell survival and development. The disruption of cytoskeleton can also be intrinsic to change in dehydration and cellular form that follow the cryopreservation process. Among the cellular organelles, mitochondria are sensitive to cryopreservation procedures, since the formation of intracellular ice crystals considered one of the most relevant cryoinjury, leading to damage to the mitochondrial cristae and matrix. Another important organelle undergoes damage as result of cryopreservation is the endoplasmic reticulum, which change in morphology has been described after vitrification of embryos. It is also known that cryopreservation may result in fragmentation of DNA even in the absence of deformation of the cellular morphology, and that these changes can lead to delay in the development or cell death. In addition to the direct damage to double-stranded DNA, cryopreservation may trigger chromosomal abnormalities, these the aneuploidy is the most frequent and seems to compromise the developmental competence of oocytes in addition to being indicated as the main factor for the low achieve of live births. Conclusion: Cryopreservation is an important alternative for the preservation of gametes and embryos, however, the cells are subjected to unfavorable conditions that can compromise cell recovery after thawing/warming. The main cause of reduction in survival oocytes and embryos after cryopreservation appear to be related to damage in different cellular compartments and structures, which are essential for maintaining cell metabolism. Thus, it is observed the need to achieve cryopreservation protocols capable of maintaining the integrity of different cellular components.

Characterization of cellular damage in female gametes and embryos after cryopreservation / Caracterização dos danos celulares em gametas femininos e embriões após criopreservação

Background: Cryopreservation is a biotech successfully employed in female gametes and embryos. This technique is of great importance for propagation of genetic material from animals with high-value livestock as well as to preserve the fertility of women undergoing cancer treatments. However, low temperatures can result in damage to different cellular compartments and organelles. This damage culminates in reduced viability, since they affect cell metabolism.Review: Cryopreservation consists of maintenance of biological material at low temperatures, in which chemical reactions are ceased, however, allowing the cells to preserve their viability. However, the decrease of temperature and subsequent warming may result in cellular damage. These damages occur in the cell membrane, cytoplasmic organelles and the cell nucleus. It is believed that the fi rst cell structure undergoing cryoinjury is the plasma membrane, responsible for maintaining homeostasis within the cell, and the loss of plasma membrane during the reduction temperature reported the main damage. The membrane damage due to cryopreservation appears to correlate with the reduction of thermal energy at low temperatures, thus limiting the movement of molecules through the phospholipids of lipid bilayer. Cryopreservation also alters the morphology, structure and cellular distribution of lipid droplets, reducing the survival of

Background: Cryopreservation is a biotech successfully employed in female gametes and embryos. This technique is of great importance for propagation of genetic material from animals with high-value livestock as well as to preserve the fertility of women undergoing cancer treatments. However, low temperatures can result in damage to different cellular compartments and organelles. This damage culminates in reduced viability, since they affect cell metabolism.Review: Cryopreservation consists of maintenance of biological material at low temperatures, in which chemical reactions are ceased, however, allowing the cells to preserve their viability. However, the decrease of temperature and subsequent warming may result in cellular damage. These damages occur in the cell membrane, cytoplasmic organelles and the cell nucleus. It is believed that the fi rst cell structure undergoing cryoinjury is the plasma membrane, responsible for maintaining homeostasis within the cell, and the loss of plasma membrane during the reduction temperature reported the main damage. The membrane damage due to cryopreservation appears to correlate with the reduction of thermal energy at low temperatures, thus limiting the movement of molecules through the phospholipids of lipid bilayer. Cryopreservation also alters the morphology, structure and cellular distribution of lipid droplets, reducing the survival of

Characterization of cellular damage in female gametes and embryos after cryopreservation / Caracterização dos danos celulares em gametas femininos e embriões após criopreservação

Background: Cryopreservation is a biotech successfully employed in female gametes and embryos. This technique is of great importance for propagation of genetic material from animals with high-value livestock as well as to preserve the fertility of women undergoing cancer treatments. However, low temperatures can result in damage to different cellular compartments and organelles. This damage culminates in reduced viability, since they affect cell metabolism.Review: Cryopreservation consists of maintenance of biological material at low temperatures, in which chemical reactions are ceased, however, allowing the cells to preserve their viability. However, the decrease of temperature and subsequent warming may result in cellular damage. These damages occur in the cell membrane, cytoplasmic organelles and the cell nucleus. It is believed that the fi rst cell structure undergoing cryoinjury is the plasma membrane, responsible for maintaining homeostasis within the cell, and the loss of plasma membrane during the reduction temperature reported the main damage. The membrane damage due to cryopreservation appears to correlate with the reduction of thermal energy at low temperatures, thus limiting the movement of molecules through the phospholipids of lipid bilayer. Cryopreservation also alters the morphology, structure and cellular distribution of lipid droplets, reducing the survival of

Background: Cryopreservation is a biotech successfully employed in female gametes and embryos. This technique is of great importance for propagation of genetic material from animals with high-value livestock as well as to preserve the fertility of women undergoing cancer treatments. However, low temperatures can result in damage to different cellular compartments and organelles. This damage culminates in reduced viability, since they affect cell metabolism.Review: Cryopreservation consists of maintenance of biological material at low temperatures, in which chemical reactions are ceased, however, allowing the cells to preserve their viability. However, the decrease of temperature and subsequent warming may result in cellular damage. These damages occur in the cell membrane, cytoplasmic organelles and the cell nucleus. It is believed that the fi rst cell structure undergoing cryoinjury is the plasma membrane, responsible for maintaining homeostasis within the cell, and the loss of plasma membrane during the reduction temperature reported the main damage. The membrane damage due to cryopreservation appears to correlate with the reduction of thermal energy at low temperatures, thus limiting the movement of molecules through the phospholipids of lipid bilayer. Cryopreservation also alters the morphology, structure and cellular distribution of lipid droplets, reducing the survival of

Criopreservação e xenotransplante de tecido ovariano / Cryopreservation and xenotransplantation of ovarian tissue

A criopreservação de tecido ovariano é uma biotécnica alternativa potencialmente útil na formação de bancos de células germinativas para a estocagem de DNA de espécies de alto valor zootécnico, raras ou em extinção. Além disso, gera grandes perspectivas na preservação da fertilidade de pacientes com câncer ou com problemas de infertilidade que possam provocar falha ovariana prematura. A criopreservação aliada ao processo de xenotransplante é um campo vasto para pesquisas, abrangendo desde métodos e protocolos mais efetivos de preservação até aspectos fundamentais da foliculogênese.(AU)

Cryopreservation of ovarian tissue is an alternative biotechnology potentially useful to implement gene DNA banks of livestock animals, rare and endangered species. Furthermore, it generates great prospects to save the fertility of patients with cancer or infertility problems that can cause premature ovarian failure. The cryopreservation combined with xenotransplantation is an ample field for research, rangingfrom more effective methods and protocols, including fundamental aspects of folliculogenesis.(AU)

Criopreservação e xenotransplante de tecido ovariano / Cryopreservation and xenotransplantation of ovarian tissue

A criopreservação de tecido ovariano é uma biotécnica alternativa potencialmente útil na formação de bancos de células germinativas para a estocagem de DNA de espécies de alto valor zootécnico, raras ou em extinção. Além disso, gera grandes perspectivas na preservação da fertilidade de pacientes com câncer ou com problemas de infertilidade que possam provocar falha ovariana prematura. A criopreservação aliada ao processo de xenotransplante é um campo vasto para pesquisas, abrangendo desde métodos e protocolos mais efetivos de preservação até aspectos fundamentais da foliculogênese.

Cryopreservation of ovarian tissue is an alternative biotechnology potentially useful to implement gene DNA banks of livestock animals, rare and endangered species. Furthermore, it generates great prospects to save the fertility of patients with cancer or infertility problems that can cause premature ovarian failure. The cryopreservation combined with xenotransplantation is an ample field for research, rangingfrom more effective methods and protocols, including fundamental aspects of folliculogenesis.

Síndrome do ovário remanescente em uma gata doméstica / Ovarian remaining syndrome in a female cat

A síndrome do ovário remanescente é caracterizada pela remoção incompleta do ovário durante castração, onde o tecido residual torna-se funcional. Apesar de já ter sido descrita em gatas, a ocorrência é menor nesses animais quando comparada aos humanos. O presente trabalho objetivou relatar, em felino, um caso de síndrome do ovário remanescente. Uma gata, com um ano e sete meses, havia sido submetida à ovariectomia. Após cinco meses do procedimento cirúrgico, ocorreram sinais de cio. A paciente foi examinada. Em seguida realizou-se citologia vaginal. Optou-se por uma laparotomia exploratória. A gata foi anestesiada e iniciou-se a cirurgia, cujo material obtido foi encaminhado para histopatologia. A gata encontrava-se com os parâmetros fisiológicos normais. A citologia vaginal constatou padrão compatível com estro. Na laparotomia, havia resíduo de ovário no pedículo esquerdo. A histopatologia detectou a presença de cistos e folículos ovarianos em diferentes fases de desenvolvimento, confirmando o diagnóstico de síndrome do ovário remanescente. Embora pouco relatada na espécie felina, essa patologia reprodutiva possui diagnóstico e tratamento relativamente simples.

The remaining ovary syndrome is characterized by incomplete removal of the ovaries during castration, when the remaining tissue becomes functional. Although it has already been described in cats, its incidence is lower in these animals when compared to humans. This study aimed to report a case of remaining ovary syndrome in a feline. A one-year-and-seven-month-old cat had undergone ovariectomy. After five months of surgery, the animal presented signs of rut. The patient was examined and, then, vaginal cytology was held. Na exploratory laparotomy was chosen. The cat was anesthetized and the surgery began. The material obtained was sent to histopathology. The cat had normal physiological parameters. The vaginal cytology showed a pattern consistent with estrus. Laparotomy presented ovarian residue in the left pedicle. Histopathology detected the presence of cysts and follicles in different stages of development, confirming the diagnosis of remaining ovary syndrome. Though rarely reported in the feline species, this reproductive pathology diagnosis and treatment is relatively simple.