Short-term preservation of canine sperm-binding ability and other metrics using the INRA-96 in comparison to Tris-egg yolk extender.

The use of assisted reproductive techniques, such as chilled semen, contributes to the maintenance and genetic improvement of canine breeding. The INRA-96 extender is a commercially available, chemically defined medium that was initially developed for the preservation of equine semen and exhibits preservation potential in the canine species. This research aims to evaluate the INRA-96 extender as an alternative for the short-term preservation of canine semen in terms of sperm quality parameters such as motility and kinetic parameters, integrity and functionality of the plasma membrane in fresh and chilled-rewarmed samples, as well as the sperm-binding ability using the perivitelline membrane of the chicken egg as an indicator of the fertilizing capacity of the preserved semen. A total of 18 ejaculates from 9 French bulldogs (two ejaculates per dog) were collected and divided into two aliquots that were diluted in Tris-egg yolk 20% (control) or INRA-96 to a final concentration of 100 × 106 sperm/mL. Samples were refrigerated in a biological incubator at 5°C and evaluated at 0, 24 and 48 h time points. Comparing the two treatments after 48 h of refrigeration, both extenders showed similar values (p < .5) for the majority of kinetic parameters, with the INRA-96 group promoting a total motility of 88.1 ± 2.9%. In addition, the morphology, integrity and functionality of the plasma membrane were preserved above 70% in this group. Dilution with INRA-96 also provided a significantly higher amount of sperm bound (256.2 ± 21.1) to the perivitelline membrane of the egg yolk compared to the sperm-binding rates (p < .05) achieved at the use of Tris-egg yolk (215.2 ± 21 bound spermatozoa) at 48 h. Our study proved similar functional properties of dog sperm cells treated with INRA-96 in comparison to commonly used home-made Tris-based extender during short-time storage.

Does resveratrol preserve the integrity of the sperm membrane in goats after thawing? / O resveratrol preserva a integridade da membrana espermática de caprinos após descongelamento?

This study aimed to determine the effects of resveratrol in the trisaminomethane (TRIS)-egg yolk extender and its optimal inclusion level for goat semen cryopreservation. Five ejaculates of three Anglo Nubian goats were used, each divided into four 200 µL aliquots for use in four treatments: 0.00 (control), 0.04, 0.08 and 0.12 mg mL-¹ resveratrol in the TRIS-egg yolk extender. We evaluated progressive sperm motility and sperm vigor post-dilution, post-cooling, and post thawing; membrane integrity (HOST); and acrosomal integrity and performed a slow thermoresistance test (STT). The data were submitted to a regression analysis at a 5% probability. There was no difference in progressive motility or sperm vigor in the post-dilution (89.5, 89.0, 88.7 and 88.3, and 4.9, 5.0, 4.9, and 4.9) or post-cooling (81.0, 82.0, 83.0, and 78.3; and 4.3, 4.3, 4.2, and 4.2) experiments (P > 0.05), or in the complementary acrosomal integrity test (42.0, 47.4, 42.2 and 38.2) (P > 0.05). However, the motility and vigor parameters decreased linearly in the post-thaw phase, as well as during the 2 hours of incubation on STT (P < 0.05). These factors increased quadratically when resveratrol was added to HOST, to an optimal level of 0.039 mg mL-¹ resveratrol for a plasma membrane integrity of 52.55% (P < 0.05). The inclusion of resveratrol was effective in maintaining sperm viability; in particular, it was effective in maintaining plasmatic membrane integrity during the cryopreservation process up to 0.039 mg mL-1, meaning that it could be an alternative to conventionally used seminal extenders in goats.(AU)

O objetivo deste estudo foi determinar os efeitos e o melhor nível de inclusão de resveratrol em meio diluidor TRIS gema de ovo para criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados cinco ejaculados de três bodes da raça Anglo Nubiana. Cada ejaculado foi dividido em quatro alíquotas de 200 µL, compondo quatro tratamentos: 0,00 (controle); 0,04; 0,08 e 0,12mg mL-¹ de resveratrol no diluidor TRIS gema de ovo. Foram avaliadas a motilidade espermática progressiva e o vigor espermático pós diluição, pós-resfriamento e pós-descongelamento; integridade de membrana (HOST); integridade acrossomal e teste de termorresistência lento (TTR). Os dados foram submetidos à análise de regressão a 5% de probabilidade. Não houve diferença para a motilidade progressiva e o vigor espermático, respectivamente, na pós-diluição (89,5; 89,0; 88,7 e 88,3) e (4,9; 5,0; 4,9 e 4,9) e pós-resfriamento (81,0; 82,0; 83,0 e 78,3) e (4,3; 4,3; 4,2 e 4,2) (P < 0,05), assim como para o teste complementar integridade acrossomal (42,0; 47,4; 42,2 e 38,2) (P > 0,05). No entanto, os parâmetros motilidade e vigor reduziram linearmente no pós-descongelamento, assim como durante as 2 horas de incubação no TTR (P < 0,05). Houve efeito quadrático com a inclusão de resveratrol para HOST, apresentando um nível ótimo de 0,039mg mL-¹ de resveratrol para integridade de membrana plasmática de 52,55% (P <0,05). A inclusão de resveratrol foi eficiente na manutenção da viabilidade espermática; em especial, foi eficiente na manutenção da integridade da membrana plasmática durante o processo de criopreservação até o nível de 0,039mg mL-¹, podendo ser uma alternativa na composição dos diluidores seminais de caprinos.(AU)

Does resveratrol preserve the integrity of the sperm membrane in goats after thawing? / O resveratrol preserva a integridade da membrana espermática de caprinos após descongelamento?

This study aimed to determine the effects of resveratrol in the trisaminomethane (TRIS)-egg yolk extender and its optimal inclusion level for goat semen cryopreservation. Five ejaculates of three Anglo Nubian goats were used, each divided into four 200 µL aliquots for use in four treatments: 0.00 (control), 0.04, 0.08 and 0.12 mg mL-¹ resveratrol in the TRIS-egg yolk extender. We evaluated progressive sperm motility and sperm vigor post-dilution, post-cooling, and post thawing; membrane integrity (HOST); and acrosomal integrity and performed a slow thermoresistance test (STT). The data were submitted to a regression analysis at a 5% probability. There was no difference in progressive motility or sperm vigor in the post-dilution (89.5, 89.0, 88.7 and 88.3, and 4.9, 5.0, 4.9, and 4.9) or post-cooling (81.0, 82.0, 83.0, and 78.3; and 4.3, 4.3, 4.2, and 4.2) experiments (P > 0.05), or in the complementary acrosomal integrity test (42.0, 47.4, 42.2 and 38.2) (P > 0.05). However, the motility and vigor parameters decreased linearly in the post-thaw phase, as well as during the 2 hours of incubation on STT (P < 0.05). These factors increased quadratically when resveratrol was added to HOST, to an optimal level of 0.039 mg mL-¹ resveratrol for a plasma membrane integrity of 52.55% (P < 0.05). The inclusion of resveratrol was effective in maintaining sperm viability; in particular, it was effective in maintaining plasmatic membrane integrity during the cryopreservation process up to 0.039 mg mL-1, meaning that it could be an alternative to conventionally used seminal extenders in goats.

O objetivo deste estudo foi determinar os efeitos e o melhor nível de inclusão de resveratrol em meio diluidor TRIS gema de ovo para criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados cinco ejaculados de três bodes da raça Anglo Nubiana. Cada ejaculado foi dividido em quatro alíquotas de 200 µL, compondo quatro tratamentos: 0,00 (controle); 0,04; 0,08 e 0,12mg mL-¹ de resveratrol no diluidor TRIS gema de ovo. Foram avaliadas a motilidade espermática progressiva e o vigor espermático pós diluição, pós-resfriamento e pós-descongelamento; integridade de membrana (HOST); integridade acrossomal e teste de termorresistência lento (TTR). Os dados foram submetidos à análise de regressão a 5% de probabilidade. Não houve diferença para a motilidade progressiva e o vigor espermático, respectivamente, na pós-diluição (89,5; 89,0; 88,7 e 88,3) e (4,9; 5,0; 4,9 e 4,9) e pós-resfriamento (81,0; 82,0; 83,0 e 78,3) e (4,3; 4,3; 4,2 e 4,2) (P 0,05). No entanto, os parâmetros motilidade e vigor reduziram linearmente no pós-descongelamento, assim como durante as 2 horas de incubação no TTR (P < 0,05). Houve efeito quadrático com a inclusão de resveratrol para HOST, apresentando um nível ótimo de 0,039mg mL-¹ de resveratrol para integridade de membrana plasmática de 52,55% (P <0,05). A inclusão de resveratrol foi eficiente na manutenção da viabilidade espermática; em especial, foi eficiente na manutenção da integridade da membrana plasmática durante o processo de criopreservação até o nível de 0,039mg mL-¹, podendo ser uma alternativa na composição dos diluidores seminais de caprinos.

Metil-formamida na criopreservação de sêmen ovino / Methyl-formamide in ram semen cryopreservation

Objetivou-se avaliar a eficácia da metil-formamida na criopreservação do sêmen ovino. O pool de sêmen utilizado no experimento foi obtido a partir da coleta, com vagina artificial, do sêmen de quatro carneiros mestiços Santa Inês, com idade aproximada de quatro anos. As coletas foram realizadas uma vez por semana, por seis semanas consecutivas, correspondendo, cada semana, a uma repetição do experimento. As frações do pool foram diluídas em cinco diferentes meios de congelação: (1) tris-gema com 5,3% de glicerol (TG5,3G); (2) tris-gema com 3% de metil-formamida (TG3MF); (3) tris-gema com 5% de metil-formamida (TG5MF); (4) tris-gema com 7% de metil-formamida (TG7MF); (5) tris-gema com 9% de metil-formamida (TG9MF). Foram avaliadas a motilidade progressiva e o vigor das células espermáticas e realizado o teste de termorresistência pós-descongelação. O tratamento que obteve maior motilidade foi o TG5,3G (50%), seguido do TG3MF (38%) e os tratamentos que apresentaram menor motilidade progressiva foram TG5MF (29%), TG7MF (1,0%), TG9MF (6,0%). Os meios contendo metil-formamida apresentaram resultados inferiores ao meio controle para preservar a integridade morfológica dos espermatozoides, sendo que nos meios TG7MF e TG9MF menos de 60% de espermatozoides apresentaram-se morfologicamente normais. Os espermatozoides do meio TG5,3G  apresentaram motilidade (15%) e vigor (2,8) similares aos do meio TG3MF (15% e 2,6, respectivamente) no teste de termorresistência, mas o meio TG5,3G preservou melhor a integridade funcional da membrana plasmática. O glicerol foi mais eficiente como crioprotetor do que a metil-formamidana criopreservação de sêmen ovino.(AU)

The aim of this study was to evaluate the efficacy of methyl-formamide in ram semen cryopreservation. The semen pool used in this experiment was obtained by artificial vagina collection from four mixed breed Santa Inês rams, around four years of age. Semen collection was performed once a week, during six weeks. Each week corresponded to one experiment replication. The semen pool was divided in five fractions in order to be diluted in one of the following freezing media: (1) tris-egg yolk with 5.3% of glycerol (TG5.3G); (2) tris-egg yolk with 3% of methyl-formamide (TG3MF); tris-egg yolk with 5% of methyl-formamide (TG5MF); tris-egg yolk with 7% of methyl-formamide (TG7MF); tris-egg yolk with 9% of methyl-formamide (TG9MF). Semen progressive motility, vigor and thermoresistance were evaluated. The treatments TG5.3G (50%) and TG3MF (38%) showed higher progressive motility after thawing, while TG5MF (29%), TG7MF (1%) and TG9MF (6%) showerd lower motility. Freezing media containing methyl-formamide were less effective in preserving spermatozoa membrane integrity and morphology than control media. In TG7MF and TG9MF extenders, less than 60% spermatozoa showed normal morphology. After thermoresistance test, semen cryopreserved in TG3MF showed vigor (2.6) and motility (15%) statistically similar to TG5.3G media (15% and 2.8, respectively); however, the extender TG5.3G was more effective in preserving plasma membrane functional integrity. In conclusion, in the experimental conditions used, glycerol showed more cryoprotectant potential than methyl-formamide.(AU)

Metil-formamida na criopreservação de sêmen ovino / Methyl-formamide in ram semen cryopreservation

Objetivou-se avaliar a eficácia da metil-formamida na criopreservação do sêmen ovino. O pool de sêmen utilizado no experimento foi obtido a partir da coleta, com vagina artificial, do sêmen de quatro carneiros mestiços Santa Inês, com idade aproximada de quatro anos. As coletas foram realizadas uma vez por semana, por seis semanas consecutivas, correspondendo, cada semana, a uma repetição do experimento. As frações do pool foram diluídas em cinco diferentes meios de congelação: (1) tris-gema com 5,3% de glicerol (TG5,3G); (2) tris-gema com 3% de metil-formamida (TG3MF); (3) tris-gema com 5% de metil-formamida (TG5MF); (4) tris-gema com 7% de metil-formamida (TG7MF); (5) tris-gema com 9% de metil-formamida (TG9MF). Foram avaliadas a motilidade progressiva e o vigor das células espermáticas e realizado o teste de termorresistência pós-descongelação. O tratamento que obteve maior motilidade foi o TG5,3G (50%), seguido do TG3MF (38%) e os tratamentos que apresentaram menor motilidade progressiva foram TG5MF (29%), TG7MF (1,0%), TG9MF (6,0%). Os meios contendo metil-formamida apresentaram resultados inferiores ao meio controle para preservar a integridade morfológica dos espermatozoides, sendo que nos meios TG7MF e TG9MF menos de 60% de espermatozoides apresentaram-se morfologicamente normais. Os espermatozoides do meio TG5,3G  apresentaram motilidade (15%) e vigor (2,8) similares aos do meio TG3MF (15% e 2,6, respectivamente) no teste de termorresistência, mas o meio TG5,3G preservou melhor a integridade funcional da membrana plasmática. O glicerol foi mais eficiente como crioprotetor do que a metil-formamidana criopreservação de sêmen ovino.

The aim of this study was to evaluate the efficacy of methyl-formamide in ram semen cryopreservation. The semen pool used in this experiment was obtained by artificial vagina collection from four mixed breed Santa Inês rams, around four years of age. Semen collection was performed once a week, during six weeks. Each week corresponded to one experiment replication. The semen pool was divided in five fractions in order to be diluted in one of the following freezing media: (1) tris-egg yolk with 5.3% of glycerol (TG5.3G); (2) tris-egg yolk with 3% of methyl-formamide (TG3MF); tris-egg yolk with 5% of methyl-formamide (TG5MF); tris-egg yolk with 7% of methyl-formamide (TG7MF); tris-egg yolk with 9% of methyl-formamide (TG9MF). Semen progressive motility, vigor and thermoresistance were evaluated. The treatments TG5.3G (50%) and TG3MF (38%) showed higher progressive motility after thawing, while TG5MF (29%), TG7MF (1%) and TG9MF (6%) showerd lower motility. Freezing media containing methyl-formamide were less effective in preserving spermatozoa membrane integrity and morphology than control media. In TG7MF and TG9MF extenders, less than 60% spermatozoa showed normal morphology. After thermoresistance test, semen cryopreserved in TG3MF showed vigor (2.6) and motility (15%) statistically similar to TG5.3G media (15% and 2.8, respectively); however, the extender TG5.3G was more effective in preserving plasma membrane functional integrity. In conclusion, in the experimental conditions used, glycerol showed more cryoprotectant potential than methyl-formamide.