Validación del ensayo FVIII: C cromogénico en una plataforma automatizada

El objetivo de este trabajo fue realizar la validación analítica del método cromogénico (FVIII:Ccro) en la plataforma ACL TOP y correlacionarlo con el método coagulable en una etapa (FVIII:Ccoag). El estudio de validación (EP5-A2, EP6-A2 y comparación de métodos por EP-9) se realizó para la curva de rango normal-bajo (CRNB): aproximadamente entre 10-150 UI/dL de FVIII y de rango muy bajo (CRMB): aproximadamente entre 0-10 UI/dL. Los resultados de repetitividad (CVr) y precisión intermedia (CVi) fueron menores del 6% y comparables a los informados por el fabricante para otras plataformas. El rango de medición analítica fue de 11-129 UI/dL con CRNB, y se extrapoló a 0,3 UI/dL al utilizar la CRMB. Para la CRNB FVIII:Ccro mostró buena correlación con FVIII:Ccoag: r: 0,98, pendiente: 0,982 (0,961-1,003), ordenada al origen: -0,3 (-1,1-0,5), sesgo: -2,0%. Para CRMB se obtuvo un r de 0,96, pendiente: 0,921 (0,855-0,988), ordenada al origen: -0,07 (-0,35-0,20), sesgo: -10,2%. Sólo 4 pacientes presentaron niveles discrepantes entre ambos métodos. La determinación de FVIII:C por el método cromogénico automatizado en la familia ACL TOP fue comparable con FVIII coagulable en una etapa en el rango analítico evaluado. El FVIII:Ccro automatizado puede utilizarse para el diagnóstico y seguimiento del tratamiento de los pacientes hemofílicos.

The objective of this work was to perform the analytical validation of the chromogenic method (FVIII:Ccro) on the ACL TOP platform correlating with one stage assay (FVIII:Ccoag). The validation study (EP5-A2, EP6-A2 and comparison of methods by EP-9) was performed for the low-normal range curve (CRNB): approximately between 10-150 IU/dL of FVIII and very low range (CRMB): approximately between 0-10 IU/dL. The results of CVr (repeatability) and CVi (intermediate precision) were lower than 6% and comparable to those reported by the manufacturer for other platforms. The analytical measurement range was 11-129 IU/dL, extrapolated to 0.3 IU/dL using the CRMB. For CRNB FVIII:Ccro showed good correlation with FVIII:Ccoag: r: 0.98, slope: 0.982 (0.961-1.003), intercept: -0.3 (-1.1-0.5), bias: -2.0%. For CRMB: r: 0.96 was obtained, pending: 0.921 (0.855-0.988), intercept: -0.07 (-0.35-0.20), bias: -10.2%. Only 4 patients presented discrepant levels between both methods. The automated chromogenic FVIII assay in the ACL TOP family is comparable with one stage coagulable FVIII in the analytical range studied. The FVIII:Ccro automated can be used for the diagnosis and monitoring of the treatment of hemophilic patients.

O objetivo deste trabalho foi a validação analítica do método cromogênico (FVIII:Ccro) na plataforma ACL TOP correlacionando-se com o método coagulável numa etapa (FVIII:Ccoag). O estudo de validação (EP5-A2, EP6-A2 e comparação de métodos por EP-9) foi realizado para a curva de faixa normal-baixa (CRNB) aproximadamente entre 10 e 150 Ul/dL de FVIII e de faixa muito baixa (CRMB): aproximadamente entre 0 e 10 UI/dL. Os resultados de Repetitividade (CVr) e precisão intermediária (CVi) foram inferiores a 6% e comparáveis aos descritos pelo fabricante para outras plataformas. A faixa de medição analítica foi de 11-129 UI/dL com CRNB extrapolando-se para 0,3 UI/dL utilizando a CRMB. Para a CRNB FVIII:Ccro houve boa correlação com o FVIII: Ccoag: r: 0,98, inclinação: 0,982 (0,961-1,003), ordenada na origem: -0,3 (-1,1-0,5), Viés: -2,0%. Para CRMB: foi obtido um r: 0,96, pendente: 0,921 (0,855-0,988), ordenado na origem: -0,07 (-0,35-0,20), Viés: -10,2%. Apenas quatro pacientes apresentaram níveis discrepantes entre os dois métodos. A determinação de FVIII:C pelo método cromogênico automatizado na família ACL TOP foi comparável ao FVIII coagulável em um estágio na faixa analítica avaliada. FVIII: O FVIII:Ccro automatizado pode ser utilizado para o diagnóstico e seguimento do tratamento dos pacientes hemofílicos.

Methods for detecting the Roundup Ready® soy in soybeans and soy products by polymerase chain reaction: a review and critical analysis of current practices of validation / Métodos para detecção de soja Roundup Ready® em grãos e produtos de soja por reação em cadeia da polimerase: revisão e análise crítica das práticas de validação

Information on the origin of transgenic foods is quite relevant. According to the Brazilian and other countries legislations, the consumer must be informed about the nature of transgenic foods and ingredients, which contain or being produced from genetically modified organisms (GMOs), in amount above the established limit. Thus, there is a growing need for evaluating the occurrence of GMOs, and to determine the percentage of them in food. This need has generated a demand for developing methods to detect, identify and quantify the exogenous DNA. However, these methods need to be validated to ensure reliability of the results. This review paper evaluated the validation of methodologies for detecting the Roundup Ready® soybean in grain and soybean products by polymerase chain reaction. Considering the current trends in method validation, the specific guides for validating GMOs do not include all of the parameters required to assess the fitness for its purpose, especially in the case of qualitative methods. The most frequent parameters reported in the literature were accuracy, precision (repeatability), linearity and sensitivity for quantitative methods, and rates of sensitivity and selectivity for qualitative methods. However, important parameters have been neglected in the validation procedures of this analytical scope.(AU)

A informação sobre a origem transgênica de alimentos é muito relevante. Conforme a legislação brasileira e de outros países, o consumidor deve ser informado da natureza transgênica dos alimentos ou ingredientes que contenham ou que sejam produzidos a partir de organismos geneticamente modificados (OGM), com presença acima de um limite estabelecido. A necessidade de monitorar a presença e determinar o percentual de OGM em alimentos tem gerado uma constante demanda pelo desenvolvimento de metodologias capazes de detectar, identificar e quantificar o DNA exógeno. Entretanto, esses métodos necessitam ser validados para garantir confiabilidade aos resultados. No presente trabalho, a validação de métodos para detecção de soja Roundup Ready® em grãos e produtos de soja por reação em cadeia de polimerase foi contextualizada. Considerando-se atuais tendências em validação de métodos, os guias para validação de métodos específicos para OGM não contemplam todos os parâmetros necessários para avaliar a adequação aos propósitos de uso dos métodos, principalmente no caso de métodos qualitativos. Os parâmetros de desempenho mais frequentemente citados na literatura foram precisão (repetitividade), sensibilidade, linearidade e veracidade para metodologias quantitativas e taxas de sensibilidade e seletividade para qualitativas. Contudo, importantes parâmetros têm sido negligenciados nos processos de validação de métodos deste escopo analítico.(AU)

Métodos para detecção de soja Roundup Ready® em grãos e produtos de soja por reação em cadeia da polimerase: revisão e análise crítica das práticas de validação / Methods for detecting the Roundup Ready® soy in soybeans and soy products by polymerase chain reaction: a review and critical analysis of current practices of validation

A informação sobre a origem transgênica de alimentos é muito relevante. Conforme a legislação brasileira e de outros países, o consumidor deve ser informado da natureza transgênica dos alimentos ou ingredientes que contenham ou que sejam produzidos a partir de organismos geneticamente modificados (OGM), com presença acima de um limite estabelecido. A necessidade de monitorar a presença e determinar o percentual de OGM em alimentos tem gerado uma constante demanda pelo desenvolvimento de metodologias capazes de detectar, identificar e quantificar o DNA exógeno. Entretanto, esses métodos necessitam ser validados para garantir confiabilidade aos resultados. No presente trabalho, a validação de métodos para detecção de soja Roundup Ready® em grãos e produtos de soja por reação em cadeia de polimerase foi contextualizada.Considerando-se atuais tendências em validação de métodos, os guias para validação de métodos específicos para OGM não contemplam todos os parâmetros necessários para avaliar a adequação aos propósitos de uso dos métodos, principalmente no caso de métodos qualitativos. Os parâmetros de desempenho mais frequentemente citados na literatura foram precisão (repetitividade), sensibilidade, linearidade e veracidade para metodologias quantitativas e taxas de sensibilidade e seletividade para qualitativas. Contudo, importantes parâmetros têm sido negligenciados nos processos de validação de métodos deste escopo analítico...

Desenvolvimento e validação de método seguro e ambientalmente adequado para quantificação de atenolol em matéria prima e comprimidos / Development and validation of a safe and environmentally adequate method for the quantification of atenolol in raw material and tablets

Um dos ensaios descritos na Farmacopéia Brasileira para determinação do fármaco anti-hipertensivo atenolol como matéria prima e em comprimidos utiliza espectrofotometria ultravioleta (UV). Porém, o solvente utilizado é o metanol, um agente químico inflamável e tóxico, cujos resíduos químicos são de difícil tratamento. Portanto, é interessante o desenvolvimento de métodos analíticos que sejam mais seguros e ambientalmente adequados. Considerando que o atenolol é solúvel em soluções ácidas diluídas, foi avaliado o uso de ácido clorídrico 0,01 mol.L -1 como um método alternativo. Para isto, foi realizada a validação do novo método avaliando sua linearidade, especificidade, seletividade, intervalo, limite de quantificação e detecção, precisão, exatidão e robustez. Todas as figuras de mérito mostraram-se dentro dos limites recomendados pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Anvisa). A comparação com o método original mostrou equivalência estatística entre os métodos. Assim, o método mostrou-se adequado como um procedimento mais seguro e ambientalmente adequado para as etapas de controle de qualidade relacionadas a produção de medicamentos a base de atenolol pelas indústrias farmacêuticas.

One of the tests described in the Farmacopéia Brasileira 5ª Edição (F. Bras. V) to assay the antihypertensive drug atenolol as raw material and tablets use ultraviolet spectrophotometry (UV). However, the solvent is methanol, a flammable and toxic chemical agent whose chemical residues are not easily manageable. Therefore, it is necessary to develop analytical methods that are safer and environmentally appropriate. Considering that atenolol is soluble in dilute acid solutions, the use of hydrochloric acid 0.01 mol L-1 as solvent was evaluated as an alternative method. For this, it was performed a validation of the new method assessing its linearity, specificity, selectivity, range, limit of quantification and detection, precision, accuracy and robustness. All figures of merit were within the limits recommended by the Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). The comparison with the original method showed statistical equivalence between the procedures. Thus, the new method was considered suitable as a safer and more environmentally appropriate for quality control of the production of drugs with atenolol by pharmaceutical industries.

Validação intralaboratorial de metodologia quantitativa para determinação de L-fenilalanina em farinha de trigo por espectrofotometria derivada segunda / Single-laboratory validation of a quantitative methodology for determination of L-phenylalanine in wheat flour by second derivative spectrophotometry

O objetivo deste trabalho foi validar um método quantitativo para determinação de L-fenilalanina (Fen) em farinha de trigo por espectrofotometria derivada segunda. A amostra de farinha de trigo, na quantidade de 0,525g, foi submetida à hidrólise ácida com HCl a 5,7 mol/L, a 110 °C, por 24 h. O material hidrolisado foi reconstituído para 50 mL com tampão fosfato de sódio a 0,1 mol/L, pH 7,0. As soluções preparadas a partir dessa amostra foram submetidas às leituras de absorvância, entre 230 nm e 280 nm, em espectrofotômetro UV/VIS. Os espectros de derivada segunda foram traçados e os valores das áreas dos picos negativos foram utilizados para estimar os teores de Fen. A linearidade do método foi demonstrada na faixa de 0,010 mg/mL a 0,035 mg/mL (correspondente a teores de 251 mg/100g a 877 mg/100g de Fen em farinha de trigo). Efeitos de matriz foram observados. A determinação de Fen não sofreu interferência de compostos como L-tirosinae L-triptofano. As porcentagens de recuperação variaram de 81% a 118% e os desvios padrão relativos de repetitividade e reprodutibilidade parcial foram respectivamente 11% e 15%, para amostras contendo 354 mg/100g, demonstrando adequada recuperação e precisão do método. Os limites de detecção e quantificação foram, respectivamente, 63 mg/100ge 175 mg/100g. Os parâmetros de desempenho estudados indicaram adequação do método para o monitoramento e controle de teores de Fen em farinha de trigo.

A validated capillary gas chromatography method for guaco (Mikania glomerata S) quality control and rastreability: from plant biomass to phytomedicines / Método validado por cromatografia gasosa capilar para o controle de qualidade e rastreabilidade de guaco (Mikania glomerata S): da matéria-prima ao fitoterápico

Este trabalho descreve a validação completa de metodologia analítica empregando cromatografia gasosa capilar com padronização interna para quantificação da cumarina (1,2-benzopirona) em produtos contendo guaco (Mikania glomerata Spreng - Asteraceae): xarope, planta e extrato padronizado, além do estudo de estabilidade do fitoterápico em questão. Utilizou-se uma coluna capilar HP-5 (30 m x 0,32 mm x 0,25 µm), hidrogênio a 1,8 mL/min e rampa de temperatura de 100 ºC a 250 ºC, a 15 ºC/min. A temperatura do injetor (split 1:20) foi de 250 ºC, enquanto a do detector foi de 270 ºC. Os tempos de retenção dos padrões foram: 2,86 minutos para o 1, 2, 3, 4-tetrametilbenzeno, 4,45 minutos para o piperonal (padrões internos) e 5,36 minutos para a cumarina. Após o procedimento de extração da planta in natura, a recuperação da cumarina foi de 101,6 por cento, enquanto que para o xarope esta foi de 100,8 por cento. Os limites de detecção e quantificação foram 0,5 µg/mL e 1,5 µg/mL, respectivamente. A precisão, determinada para todas as amostras, apresentou desvios padrões relativos menores que 2,5 por cento. Os teores de cumarina presentes nas folhas, extrato e xarope foram de 0,38 por cento m/m, 1,33 mg/mL e 0,143 mg/mL, respectivamente.

This work describes a full validation of a capillary gas chromatography analytical methodology using internal standardization for the quantification of coumarin (1,2-benzopyrone) in guaco (Mikania glomerata Spreng - Asteraceae) products: syrup, plant and its extract, including the stability study of the phytomedicine. For the analysis, it was used an HP-5 capillary column (30 m x 0.32 mm x 0.25 µm), hydrogen at a flow rate of 1.8 mL/min and the increasing temperature gradient was: 100 ºC to 250 ºC, 15 ºC/min. The temperature of injector (split 1:20) and detector were kept at 250 ºC and 270 ºC, respectively. The retention times of the standards for the above conditions were 2.86 minutes for 1, 2, 3, 4-tetramethylbenzene, 4.45 min for piperonal (internal standards), and 5.36 minutes for coumarin. After extraction procedure, the recovery of coumarin determined for plant raw material was 101.6 percent, while for syrup it was 100.8 percent. Detection and quantification limits were 0.5 µg/mL and 1.5 µg/mL, respectively. Precision was determined for all samples and the results were lower than 2.5 percent. The total amount of coumarin in plant raw material, its extract and syrup were 0.38 percent w/w, 1.33 mg/mL and 0.143 mg/mL, respectively.

Single-laboratory validation of a quantitative methodology for determination of L-phenylalanine in wheat flour by second derivative spectrophotometry / Validação intralaboratorial de metodologia quantitativa para determinação de L-fenilalanina em farinha de trigo por espectrofotometria derivada segunda

The aim of this paper was the validation of a methodology for determination of L-phenylalanine (Phe) in wheat fl our by second derivative spectrophotometry. For this purpose, 0.525g of wheat flour was hydrolyzed with HCl 5.7 mol/L at 110C for 24 h. This material was diluted to 50 mL with 0.1 mol/L sodium phosphate buffer, pH 7.0. The solutions prepared from this hidrolyzed were measured on UV/VIS spectrophotometer at wavelength range from 230 nm to 280 nm. The second derivative spectrophotometrys spectra were plotted and the values of the negatives peaks areas were used for estimating the Phe contents. Linearity was demonstrated in the range of 0.010 mg/mL to 0.035 mg/mL (corresponding to 251 mg/100g to877 mg/100g of Phe in flour). Matrix effects were observed. The Phe determination was not affected by similar compounds such as L-tyrosine and L-tryptofan. The recoveries ranged from 81 % to 118 % and the relative standard deviation under repetitivity and within-reproducibility conditions were 11 % and 15 %, respectively, for samples at 354 mg/100g, showing the adequate recovery and precision of the methodology. The limits of detection and quantification were 63 mg/100gand 175 mg/100g, respectively. The studied parameters indicated that this methodology is suitable for monitoring and controlling of Phe contents in wheat flour.

O objetivo deste trabalho foi validar um método quantitativo para determinação de L-fenilalanina (Fen) em farinha de trigo por espectrofotometria derivada segunda. A amostra de farinha de trigo, na quantidade de 0,525g, foi submetida à hidrólise ácida com HCl a 5,7 mol/L, a 110 C, por 24 h. O material hidrolisado foi reconstituído para 50 mL com tampão fosfato de sódio a 0,1 mol/L, pH 7,0. As soluções preparadas a partir dessa amostra foram submetidas às leituras de absorvância, entre 230 nm e 280 nm, em espectrofotômetro UV/VIS. Os espectros de derivada segunda foram traçados e os valores das áreas dos picos negativos foram utilizados para estimar os teores de Fen. A linearidade do método foi demonstrada na faixa de 0,010 mg/mL a 0,035 mg/mL (correspondente a teores de 251 mg/100g a 877 mg/100g de Fen em farinha de trigo). Efeitos de matriz foram observados. A determinação de Fen não sofreu interferência de compostos como L-tirosinae L-triptofano. As porcentagens de recuperação variaram de 81 % a 118 % e os desvios padrão relativos de repetitividade e reprodutibilidade parcial foram respectivamente 11 % e 15 %, para amostras contendo 354 mg/100g, demonstrando adequada recuperação e precisão do método. Os limites de detecção e quantificação foram, respectivamente, 63 mg/100ge 175 mg/100g. Os parâmetros de desempenho estudados indicaram adequação do método para o monitoramento

Como obter resultados confiáveis em cromatografia / How to obtain reliable results in chromatography

Resultados analíticos que näo tenham passado por um processo de validaçäo carecem de qualquer valor. O presente trabalho enfoca etapas algumas vezes negligenciadas em laboratórios de cromatografia e que, no entanto, säo cruciais para a obtençäo de resultados analíticos confiáveis: uso de métodos analíticos validados e como validá-los, confirmaçäo da identidade do composto de interesse, escolha de métodos de quantificaçäo adequados, emprego de amostras de referência e testes de recuperaçäo na rotina de controle de qualidade e participaçäo em testes de proficiência. (AU)

Analytical results that did not go through a validation process lack any value. The resentreview focus into steps for chromatography labs but some times neglected and that are essential forobtaining reliable analytical results: use of validated analytical methods and how to validate analyticalmethods, confirmation of identity of analytes, choice of adequate confirmation methods, routine use ofreference materials and recovery tests for analytical quality control and participation in proficiency tests. (AU)