Incubação e conservação: efeito sobre a motilidade espermática do sêmen suíno / Incubation and conservation: effect on sperm motility of swine semen

Visando aumentar a resistência espermática ao abaixamento de temperatura, foram utilizados ejaculados de três reprodutores coletados pela técnica da mão enluvada. Após a coleta, uma alíquota de sêmen foi diluída em BTS e distribuída, em partes iguais, em cinco tratamentos que diferiam entre si quanto às temperaturas (37 e 25 °C) e aos tempos de equilíbrio (6 e 24 horas) antes da conservação a 17 °C por sete dias. Os tratamentos foram: T1: sêmen sem nenhum tempo ou temperatura de equilíbrio; T2 e T3: sêmen incubado a 37 °C por 6 e 24 horas., respectivamente; T4 e T5: sêmen incubado a 25 °C por 6 e 24 horas., respectivamente. O sêmen foi avaliado nos dias D1 a D4 e no D7 quanto ao vigor e motilidade espermática aos cinco minutos, e duas horas após reaquecimento a 37 °C. O sêmen incubado a 37 °C/24 horas apresentou valores de vigor e motilidade muito inferiores aos dos demais tratamentos (p<0,05), enquanto o sêmen submetido à temperatura de equilíbrio de 25 °C por 6 horas anteriores à diluição destacou-se ao conservar a motilidade espermática após duas horas de incubação a 37 °C (p<0,05). Concluiu-se que as diferentes temperaturas e tempos de equilíbrio utilizadas, influenciaram na conservação do sêmen. A temperatura de incubação mais elevada (37 °C) na pré-diluição, por período prolongado (24 horas), reduziu a resistência espermática ao abaixamento da temperatura. Já, a combinação temperatura/tempo de 25 °C/6 horas, favoreceu a manutenção da motilidade espermática em teste de termorresistência.

Aiming to increase the spermatic resistance to lowering of temperature, ejaculates from three boars collected through the technique of the glove hand were used. After collection, an aliquot of semen was diluted in the BTS and distributed, in equal parts, in 5 treatments that differed in terms of temperatures (37 and 25 °C) and balance period (6 and 24 hours) before conservation at 17 °C for 7 days. The treatments were: T1: semen not subjected to any time or equilibrium temperature; T2 and T3: semen incubated at 37 °C for 6 and 24 hours, respectively; T4 and T5: to semen incubated at 25 °C for 6 and 24 hours, respectively. The semen was evaluated on days D1 to D4 and on D7 for vigor and sperm motility at five minutes, and two hours after rewarming at 37 °C. The semen incubated at 37 °C/24 hours presented values of vigor and motility much lower than those of the other treatments (p<0.05, while the semen submitted to the equilibrium temperature of 25 °C for 6 hours prior to dilution stood out by conserving sperm motility after 2 hours of incubation at 37 °C (p<0.05). In conclusion, the different temperatures and times of equilibrium used influenced the semen conservation, in which a higher pre-dilution incubation temperature (37 °C) for a prolonged period (24 hours) reduced the sperm resistance to a lowering of temperature, while the combination 25 °C/6 hours favored the maintenance of sperm motility in a thermoresistance test.

Diferentes tipos de embalagens e qualidade do sêmen suíno criopreservado / Different types of packaging and quality of cryopreserved swine semen

Devido à alta sensibilidade do espermatozoide suíno à criopreservação, torna-se importante o estudo acerca dos danos provocados à célula, pela agressão térmica ocasionada durante este processo. Sendo assim, avaliou-se neste trabalho, a influência de diferentes embalagens, utilizadas para o armazenamento de sêmen suíno, sobre a qualidade do espermatozoide criopreservado. Foram utilizados animais híbridos, a coleta do sêmen foi feita pela técnica da mão enluvada. Foram analisados o vigor (0 a 5), a motilidade (0 a 100%), a taxa de degradação da motilidade e a integridade acrossomal. O sêmen foi congelado em palhetas de 0,5mL, criotubos de 2,0mL e macrotubos de 4 e 5mL. As amostras de sêmen suíno congelado em palhetas apresentaram os melhores resultados de vigor espermático (2,3), de motilidade (45,4%), de taxa de degradação da motilidade (56,5%) e de integridade acrossomal (60,6%), quando comparadas às amostras criopreservadas nos demais tipos de embalagens avaliadas (p<0,05). Somente para o parâmetro taxa de degradação da motilidade, o sêmen conservado em palhetas apresentou resultados similares ao conservado em macrotubo de 4mL (54,1%). Os resultados pós-descongelação indicaram que o sêmen envasado nas palhetas foi o que apresentou características condizentes com a possibilidade de serem utilizados nos protocolos de inseminação artificial, com possibilidades de bons resultados de fertilidade. Concluiu-se que embalagens que permitam uma maior velocidade de trocas de temperatura entre as células encontradas no bordo e no centro, favorecem a uma melhor qualidade do sêmen descongelado.

Due to high sensitivity of the swine spermatozoa to cryopreservation, it is important to study the damage caused to the cell by thermal aggression during this process. Thus, this study evaluated the influence of different packages used for the storage of swine semen on the quality of cryopreserved spermatozoa. Hybrid animals were used, and semen collection was made by the gloved hand technique. The vigor (0 the 5), motility (0 the 100%), rate of motility degradation and acrosome integrity were analyzed. The semen was frozen in straws of 0.5mL, cryotubes of 2.0mL and macrotubes of 4 and 5mL. The swine semen samples frozen in straws showed the best results in sperm vigor (2.3), motility (45.4%), motility degradation rate (56.5%) and acrosomal integrity (60.6%), when compared to the cryopreserved samples in the other types of packaging evaluated (p<0.05). Only for the motility degradation rate parameter, the semen preserved in straws showed results similar to the one conserved in a 4 mL macrotube (54.1%). The results after thawing indicated that the semen packed in straws was the one that presented consistent characteristics with the possibility of being used in artificial insemination protocols with possibilities of good fertility results. It was concluded that packages that allow a higher speed of temperature changes between the cells found on the edge and in the center of them, favor a better quality of the thawed semen.

Uso do DMSO a 3% e diferentes concentrações de glicerol na curva de resfriamento do sêmen suíno / Use of 3% DMSO and different glycerol concentrations in the swine semen cooling curve

Este trabalho teve como objetivo testar o crioprotetor Dimetilsulfóxido (DMSO-3%) e o glicerol, em cinco concentrações (0,5%, 1%, 3%, 5% e 7%) em uma nova curva de resfriamento. Foram feitas sete coletas de sete varrões (n=49) através da técnica da mão enluvada. O DMSO (3%) e o glicerol foram adicionados separadamente ao diluente de congelação. Durante a análise da curva, a menor média de vigor espermático foi observada à concentração de 7% de glicerol. Na concentração de 1% de glicerol obteve-se maior média de motilidade espermática (72±12,3), sem diferença em relação à concentração de 5%. Maiores médias de vigor e motilidade espermática pós-descongelação foram observadas a3% de glicerol, diferindo das concentrações de 0,5% de glicerol e 3% de DMSO quanto ao vigor e dos demais tratamentos quanto à motilidade espermática. No teste de resistência osmótica o glicerol a 3% como diluente de congelação proporcionou melhor proteção à membrana espermática, diferindo dos demais tratamentos, exceto do DMSO a 3% e glicerola 1%. Observou-se maior porcentagem de células vivas na concentração de 5% e 7% de glicerol, diferindo das demais concentrações. Já o maior percentual de espermatozoides com acrossomas intactos foi observado quando se utilizou o diluente de congelação contendo glicerol a 3% (73,8±11,9). Os resultados do presente estudo, sugeriram que o glicerol, ainda é a melhor opção de crioprotetor a ser utilizada nos processos de criopreservação do espermatozoide suíno.(AU)

This study aimed to test the cryoprotectant Dimethylsulfoxide (DMSO-3%) and glycerol, in five concentrations (0.5%, 1%, 3%, 5% and 7%) in a new cooling curve. Seven collections from seven boars (n=49) through the gloved hand technique were made. DMSO (3%) and glycerol were added separately to the freezing diluent. During the analysis of the curve, the lowest mean sperm count was observed at a concentration of 7% glycerol. The concentration of 1% glycerol obtained more sperm motility (72±12.3) but, did not differ in concentrations of 5% glycerol. Higher mean sperm motility and vigor after thawing were observed at 3%glycerol, differing from 0.5% glycerol and 3% DMSO concentrations regarding vigor and other treatments regarding sperm motility. In the osmotic resistance test, 3% glycerol as a freezing agent provided better protection to the spermatic membrane, differing from the other treatments except for 3% DMSO and 1% glycerol. A higher percentage of living cells was observed in the 5% and 7% glycerol concentration, differing from the other concentrations. The highest percentage of spermatozoa with intact acrosomes was observed when the freezing diluent containing 3% glycerol (73.8±11.9) was used. The results of this study suggested that glycerol is still the best cryoprotective option to be used in cryopreservation processes of swine sperm.(AU)

Uso do DMSO a 3% e diferentes concentrações de glicerol na curva de resfriamento do sêmen suíno / Use of 3% DMSO and different glycerol concentrations in the swine semen cooling curve

Este trabalho teve como objetivo testar o crioprotetor Dimetilsulfóxido (DMSO-3%) e o glicerol, em cinco concentrações (0,5%, 1%, 3%, 5% e 7%) em uma nova curva de resfriamento. Foram feitas sete coletas de sete varrões (n=49) através da técnica da mão enluvada. O DMSO (3%) e o glicerol foram adicionados separadamente ao diluente de congelação. Durante a análise da curva, a menor média de vigor espermático foi observada à concentração de 7% de glicerol. Na concentração de 1% de glicerol obteve-se maior média de motilidade espermática (72±12,3), sem diferença em relação à concentração de 5%. Maiores médias de vigor e motilidade espermática pós-descongelação foram observadas a3% de glicerol, diferindo das concentrações de 0,5% de glicerol e 3% de DMSO quanto ao vigor e dos demais tratamentos quanto à motilidade espermática. No teste de resistência osmótica o glicerol a 3% como diluente de congelação proporcionou melhor proteção à membrana espermática, diferindo dos demais tratamentos, exceto do DMSO a 3% e glicerola 1%. Observou-se maior porcentagem de células vivas na concentração de 5% e 7% de glicerol, diferindo das demais concentrações. Já o maior percentual de espermatozoides com acrossomas intactos foi observado quando se utilizou o diluente de congelação contendo glicerol a 3% (73,8±11,9). Os resultados do presente estudo, sugeriram que o glicerol, ainda é a melhor opção de crioprotetor a ser utilizada nos processos de criopreservação do espermatozoide suíno.

This study aimed to test the cryoprotectant Dimethylsulfoxide (DMSO-3%) and glycerol, in five concentrations (0.5%, 1%, 3%, 5% and 7%) in a new cooling curve. Seven collections from seven boars (n=49) through the gloved hand technique were made. DMSO (3%) and glycerol were added separately to the freezing diluent. During the analysis of the curve, the lowest mean sperm count was observed at a concentration of 7% glycerol. The concentration of 1% glycerol obtained more sperm motility (72±12.3) but, did not differ in concentrations of 5% glycerol. Higher mean sperm motility and vigor after thawing were observed at 3%glycerol, differing from 0.5% glycerol and 3% DMSO concentrations regarding vigor and other treatments regarding sperm motility. In the osmotic resistance test, 3% glycerol as a freezing agent provided better protection to the spermatic membrane, differing from the other treatments except for 3% DMSO and 1% glycerol. A higher percentage of living cells was observed in the 5% and 7% glycerol concentration, differing from the other concentrations. The highest percentage of spermatozoa with intact acrosomes was observed when the freezing diluent containing 3% glycerol (73.8±11.9) was used. The results of this study suggested that glycerol is still the best cryoprotective option to be used in cryopreservation processes of swine sperm.

Aspectos gerais da criopreservação de sêmen suíno / General aspects of boar semen cryopreservation

A utilização de sêmen congelado para inseminações artificiais já vem sendo estudada há mais de 30 anos e os avanços nesta área se devem principalmente às pesquisas dos diferentes fatores que influenciam a conservação do sêmen e fertilidade de um ejaculado. O protocolo ideal de criopreservação não foi totalmente elucidado por pesquisadores da área, apesar de ser bastante utilizado para conservação de tecidos e de células, como os espermatozoides. Isto se deve ao fato de que o sucesso da criopreservação depende de diferentes parâmetros, entre eles a utilização de crioprotetores; bem como uma concentração adequada, o que varia de espécie para espécie. Vários estudos foram feitos para se obter uma melhor congelação de sêmen suíno, com o objetivo de diminuir os índices de crioinjúrias causados pelo abaixamento de temperatura. Apesar de ainda existirem muitos problemas no processo de criopreservação de sêmen do varrão, alguns autores relatam que o uso do sêmen congelado superará o do sêmen resfriado, por ser um procedimento que permite preservar células por longos períodos de tempo. Este trabalho teve como objetivo relatar os principais problemas ligados à congelação de sêmen e os avanços da técnica utilizada para tal, através de um levantamento geral acerca dos principais aspectos ligados à criopreservação, com ênfase na espécie suína.(AU)

The use of frozen semen for artificial insemination has been studied for over 30 years and the advances in this area are mainly due to research the different factors that influence the semen retention and fertility of an ejaculate. The optimal protocol for cryopreservation has not been fully elucidated by researchers in the field, even though it is often used for preservation of tissues and cells such as sperm cells. This is due to the fact that the success of cryopreservation depends on different parameters, among them the use of cryoprotectants as well as a suitable concentration, which differ between species. Several studies were made seeking a better freezing of boar semen, also, aiming to reduce the rates of freezing damages caused by the lowering of temperature. Although there are still many problems in the process of cryopreservation of boar semen, some authors report that the use of frozen semen, outrank the cooled semen, due to a procedure that preserves cells for long periods of time. This study aimed to report the main problems associated with freezing semen, and technique advances through a general survey about the main aspects of cryopreservation with emphasis on swine.(AU)

Aspectos gerais da criopreservação de sêmen suíno / General aspects of boar semen cryopreservation

A utilização de sêmen congelado para inseminações artificiais já vem sendo estudada há mais de 30 anos e os avanços nesta área se devem principalmente às pesquisas dos diferentes fatores que influenciam a conservação do sêmen e fertilidade de um ejaculado. O protocolo ideal de criopreservação não foi totalmente elucidado por pesquisadores da área, apesar de ser bastante utilizado para conservação de tecidos e de células, como os espermatozoides. Isto se deve ao fato de que o sucesso da criopreservação depende de diferentes parâmetros, entre eles a utilização de crioprotetores; bem como uma concentração adequada, o que varia de espécie para espécie. Vários estudos foram feitos para se obter uma melhor congelação de sêmen suíno, com o objetivo de diminuir os índices de crioinjúrias causados pelo abaixamento de temperatura. Apesar de ainda existirem muitos problemas no processo de criopreservação de sêmen do varrão, alguns autores relatam que o uso do sêmen congelado superará o do sêmen resfriado, por ser um procedimento que permite preservar células por longos períodos de tempo. Este trabalho teve como objetivo relatar os principais problemas ligados à congelação de sêmen e os avanços da técnica utilizada para tal, através de um levantamento geral acerca dos principais aspectos ligados à criopreservação, com ênfase na espécie suína.

The use of frozen semen for artificial insemination has been studied for over 30 years and the advances in this area are mainly due to research the different factors that influence the semen retention and fertility of an ejaculate. The optimal protocol for cryopreservation has not been fully elucidated by researchers in the field, even though it is often used for preservation of tissues and cells such as sperm cells. This is due to the fact that the success of cryopreservation depends on different parameters, among them the use of cryoprotectants as well as a suitable concentration, which differ between species. Several studies were made seeking a better freezing of boar semen, also, aiming to reduce the rates of freezing damages caused by the lowering of temperature. Although there are still many problems in the process of cryopreservation of boar semen, some authors report that the use of frozen semen, outrank the cooled semen, due to a procedure that preserves cells for long periods of time. This study aimed to report the main problems associated with freezing semen, and technique advances through a general survey about the main aspects of cryopreservation with emphasis on swine.

Motilidade, vigor e qualidade acrossomal do sêmen descongelado de varrão em diferentes diluentes / Boar semen motility, vigour and acrosomal quality in diferents extender after thawing

Objetivou-se determinar um diluente que proporcionasse uma boa manutenção da viabilidade do sêmen do varrão, após descongelação. Foram utilizados os seguintes diluentes: Beltsville Thawing Solution (BTS), BTS + ácido 3-indol a cético(IAA)E Androhep (ADHP). Os 24 ejaculados foram analisados in natura e após diluição, quanto ao vigor, motilidade espermática e integridade do acrossoma. Em seguida, foi retirado de cada ejaculado um total de 10,2 x109 espermatozoides, que foram repartidos igualmente entre os diferentes tratamentos experimentais. Os ejaculados foram diluídos em partes iguais (1:1) a 30oC, permanecendo incubados por 2 horas, antes de iniciar a curva de congelação. Posteriormente, o sêmen foi envazado em palhetas de 0,5 mL, em uma concentração de 112 x10 6sptz/mL, submetidos a vapor de nitrogênio por quatro minutos, em seguida, mergulhado no nitrogênio líquido (-196 oC). As amostras foram descongeladas em banho-maria à temperatura de (37ºC/30s), em seguida, o conteúdo foi ressuspenso nos diferentes diluentes (1:5). As amostras foram avaliadas quantosàs mesmas características do sêmen in natura. Na análise estatística, foram utilizados os testes de Mann-Whitney, com intervalo de confiança de 5%. O diluente BTS apresentou motilidade e vigorespermático melhores, em relação aquele contendo ADPH, em 5 minutos de incubação; porém, não houve diferenças significativas sobre as mesmas avaliações, quando os tratamentos foram incubados por 1 hora. A integridade acrossomal do diluente ADPH proporcionou maior número de espermatozoides íntegros (p<0,05), em relação aos demais tratamentos. Um diluente que favoreça a conservação de uma melhor qualidade espermática após descongelação ainda precisa ser desenvolvido.(AU)

The objective of this study was to determine a diluent that would provide good maintenance of the boar's semen viability after thawing. The following diluents were used: Beltsville Thawing Solution (BTS), BTS + 3-indole acetic acid (IAA) and Androhep (ADHP). The 24 ejaculates were analyzed in natura and after dilution, regarding sperm vigor and motility and acrosome integrity. Then, a total of 10,2x109 spermatozoa were removed from each ejaculate, which were equally distributed among the different experimental treatments. The ejaculates were diluted in equal parts (1:1) at 30 oC and incubated for 2 hours before starting the freezing curve. Subsequently the semen was packed in 0,5 mL vats, at a concentration of 112 x106spermatozoa/mL, submitted to nitrogen vapor for 4 minutes and then immersed in liquid nitrogen (-196oC). Samples were thawed in a water bath at (37 °C/30s), then the contents were resuspended in the different diluents (1:5). The samples were evaluated as many as the same characteristics of semen in natura. In the statistical analysis, the Mann-Whitney tests were used, with a confidence interval of 5%. The BTS diluent had better sperm motility and vigor compared to ADPH in 5 minutes of incubation, but there were no significant differences on the same evaluations when the treatments were incubated for 1 hour. The acrosomal integrity of the ADPH diluent provided a higher number of intact spermatozoa (p<0.05) in relation to the other treatments. A extender that favors the conservation of a better sperm quality after thawing, still needs to be developed.(AU)

Motilidade, vigor e qualidade acrossomal do sêmen descongelado de varrão em diferentes diluentes / Boar semen motility, vigour and acrosomal quality in diferents extender after thawing

Objetivou-se determinar um diluente que proporcionasse uma boa manutenção da viabilidade do sêmen do varrão, após descongelação. Foram utilizados os seguintes diluentes: Beltsville Thawing Solution (BTS), BTS + ácido 3-indol a cético(IAA)E Androhep (ADHP). Os 24 ejaculados foram analisados in natura e após diluição, quanto ao vigor, motilidade espermática e integridade do acrossoma. Em seguida, foi retirado de cada ejaculado um total de 10,2 x109 espermatozoides, que foram repartidos igualmente entre os diferentes tratamentos experimentais. Os ejaculados foram diluídos em partes iguais (1:1) a 30oC, permanecendo incubados por 2 horas, antes de iniciar a curva de congelação. Posteriormente, o sêmen foi envazado em palhetas de 0,5 mL, em uma concentração de 112 x10 6sptz/mL, submetidos a vapor de nitrogênio por quatro minutos, em seguida, mergulhado no nitrogênio líquido (-196 oC). As amostras foram descongeladas em banho-maria à temperatura de (37ºC/30s), em seguida, o conteúdo foi ressuspenso nos diferentes diluentes (1:5). As amostras foram avaliadas quantosàs mesmas características do sêmen in natura. Na análise estatística, foram utilizados os testes de Mann-Whitney, com intervalo de confiança de 5%. O diluente BTS apresentou motilidade e vigorespermático melhores, em relação aquele contendo ADPH, em 5 minutos de incubação; porém, não houve diferenças significativas sobre as mesmas avaliações, quando os tratamentos foram incubados por 1 hora. A integridade acrossomal do diluente ADPH proporcionou maior número de espermatozoides íntegros (p<0,05), em relação aos demais tratamentos. Um diluente que favoreça a conservação de uma melhor qualidade espermática após descongelação ainda precisa ser desenvolvido.

The objective of this study was to determine a diluent that would provide good maintenance of the boar's semen viability after thawing. The following diluents were used: Beltsville Thawing Solution (BTS), BTS + 3-indole acetic acid (IAA) and Androhep (ADHP). The 24 ejaculates were analyzed in natura and after dilution, regarding sperm vigor and motility and acrosome integrity. Then, a total of 10,2x109 spermatozoa were removed from each ejaculate, which were equally distributed among the different experimental treatments. The ejaculates were diluted in equal parts (1:1) at 30 oC and incubated for 2 hours before starting the freezing curve. Subsequently the semen was packed in 0,5 mL vats, at a concentration of 112 x106spermatozoa/mL, submitted to nitrogen vapor for 4 minutes and then immersed in liquid nitrogen (-196oC). Samples were thawed in a water bath at (37 °C/30s), then the contents were resuspended in the different diluents (1:5). The samples were evaluated as many as the same characteristics of semen in natura. In the statistical analysis, the Mann-Whitney tests were used, with a confidence interval of 5%. The BTS diluent had better sperm motility and vigor compared to ADPH in 5 minutes of incubation, but there were no significant differences on the same evaluations when the treatments were incubated for 1 hour. The acrosomal integrity of the ADPH diluent provided a higher number of intact spermatozoa (p<0.05) in relation to the other treatments. A extender that favors the conservation of a better sperm quality after thawing, still needs to be developed.

Use of alternative extenders and temperatures in long term storage of boar semen / Uso de diluentes e temperaturas alternativas na conservação prolongada do sêmen do varrão

The use of appropriate extenders is important for the success of an artificial insemination program. The objective of this study was to evaluate the efficiency of alternative extenders for swine semen at different temperatures (17 to 10 C). The following extenders were used: Beltsville Thawing Solution (BTS), powdered coconut water (ACP-103®), and skimmed milk powder (LPD). The 50 ejaculates were analyzed daily, in natura and after dilution, during the 5-day period of semen preservation  (D0 to D4), regarding spermatic vigor and motility. Acrosome integrity and sperm viability were evaluated on D0 and D4. Data were analyzed using Mann-Whitney, Students, Tukey and chi-square tests (p 0.05). The LPD extender at 10 C presented higher motility and sperm vigor compared to BTS and ACP until D2, and to treatments stored at 17 C. Acrosome vitality and integrity remained higher (p 0.001) with LPD at 10 C on D0 and D4. LPD showed to be a good extender for the swine semen at lower temperature (10 C). Furthermore, it provided better protection to sperm cells, by allowing greater integrity and vitality of the acrosome(AU)

O uso de diluentes adequados é importante para o sucesso de um programa de inseminação artificial. O objetivo deste experimento foi avaliar a eficiência de diluentes alternativos para o sêmen suíno, em diferentes temperaturas (17 e 10 C). Foram utilizados os diluentes: Beltsville Thawing Solution (BTS); água de coco em pó (ACP®-103) e leite em pó desnatado (LPD). Os 50 ejaculados, foram analisados in natura e após diluição, diariamente, durante os 5 dias de conservação do sêmen (D0 a D4), quanto ao vigor e motilidade espermática. Avaliou-se a integridade do acrossoma e a viabilidade espermática no D0 e D4. Na análise estatística, foram utilizados os testes de Mann-Whitney, Students, Tukey e o qui-quadrado, com intervalo de confiança de 5%. O diluente LPD a 10 C apresentou motilidade e vigor espermático melhores em relação ao BTS e ACP (10 C) até D2 e aos tratamentos conservados a 17 C. A vitalidade e integridade acrossomal, no D0 e D4, foram melhores com LPD a 10 C, que mostrou ser um bom meio diluente para o sêmen suíno em temperatura mais baixa  (10C), conferindo uma maior proteção à célula espermática, através de maiores taxas de viabilidade  e integridade de acrossoma(AU)

USO DE DILUENTES E TEMPERATURAS ALTERNATIVAS NA CONSERVAÇÃO PROLONGADA DO SÊMEN DO VARRÃO

Abstract The use of appropriate extenders is important for the success of an artificial insemination program. The objective of this study was to evaluate the efficiency of alternative extenders for swine semen at different temperatures (17 to 10 °C). The following extenders were used: Beltsville Thawing Solution (BTS), powdered coconut water (ACP-103®), and skimmed milk powder (LPD). The 50 ejaculates were analyzed daily, in natura and after dilution, during the 5-day period of semen preservation (D0 to D4), regarding spermatic vigor and motility. Acrosome integrity and sperm viability were evaluated on D0 and D4. Data were analyzed using Mann-Whitney, Students, Tukey and chi-square tests (p 0.05). The LPD extender at 10 °C presented higher motility and sperm vigor compared to BTS and ACP until D2, and to treatments stored at 17 °C. Acrosome vitality and integrity remained higher (p 0.001) with LPD at 10 °C on D0 and D4. LPD showed to be a good extender for the swine semen at lower temperature (10 °C). Furthermore, it provided better protection to sperm cells, by allowing greater integrity and vitality of the acrosome.

Resumo O uso de diluentes adequados é importante para o sucesso de um programa de inseminação artificial. O objetivo deste experimento foi avaliar a eficiência de diluentes alternativos para o sêmen suíno, em diferentes temperaturas (17 e 10 °C). Foram utilizados os diluentes: Beltsville Thawing Solution (BTS); água de coco em pó (ACP®-103) e leite em pó desnatado (LPD). Os 50 ejaculados, foram analisados in natura e após diluição, diariamente, durante os 5 dias de conservação do sêmen (D0 a D4), quanto ao vigor e motilidade espermática. Avaliou-se a integridade do acrossoma e a viabilidade espermática no D0 e D4. Na análise estatística, foram utilizados os testes de Mann-Whitney, Students, Tukey e o qui-quadrado, com intervalo de confiança de 5%. O diluente LPD a 10 °C apresentou motilidade e vigor espermático melhores em relação ao BTS e ACP (10 °C) até D2 e aos tratamentos conservados a 17 °C. A vitalidade e integridade acrossomal, no D0 e D4, foram melhores com LPD a 10 °C, que mostrou ser um bom meio diluente para o sêmen suíno em temperatura mais baixa (10 °C), conferindo uma maior proteção à célula espermática, através de maiores taxas de viabilidade e integridade de acrossoma.

Use of alternative extenders and temperatures in long term storage of boar semen / Uso de diluentes e temperaturas alternativas na conservação prolongada do sêmen do varrão

The use of appropriate extenders is important for the success of an artificial insemination program. The objective of this study was to evaluate the efficiency of alternative extenders for swine semen at different temperatures (17 to 10 C). The following extenders were used: Beltsville Thawing Solution (BTS), powdered coconut water (ACP-103®), and skimmed milk powder (LPD). The 50 ejaculates were analyzed daily, in natura and after dilution, during the 5-day period of semen preservation  (D0 to D4), regarding spermatic vigor and motility. Acrosome integrity and sperm viability were evaluated on D0 and D4. Data were analyzed using Mann-Whitney, Students, Tukey and chi-square tests (p 0.05). The LPD extender at 10 C presented higher motility and sperm vigor compared to BTS and ACP until D2, and to treatments stored at 17 C. Acrosome vitality and integrity remained higher (p 0.001) with LPD at 10 C on D0 and D4. LPD showed to be a good extender for the swine semen at lower temperature (10 C). Furthermore, it provided better protection to sperm cells, by allowing greater integrity and vitality of the acrosome

O uso de diluentes adequados é importante para o sucesso de um programa de inseminação artificial. O objetivo deste experimento foi avaliar a eficiência de diluentes alternativos para o sêmen suíno, em diferentes temperaturas (17 e 10 C). Foram utilizados os diluentes: Beltsville Thawing Solution (BTS); água de coco em pó (ACP®-103) e leite em pó desnatado (LPD). Os 50 ejaculados, foram analisados in natura e após diluição, diariamente, durante os 5 dias de conservação do sêmen (D0 a D4), quanto ao vigor e motilidade espermática. Avaliou-se a integridade do acrossoma e a viabilidade espermática no D0 e D4. Na análise estatística, foram utilizados os testes de Mann-Whitney, Students, Tukey e o qui-quadrado, com intervalo de confiança de 5%. O diluente LPD a 10 C apresentou motilidade e vigor espermático melhores em relação ao BTS e ACP (10 C) até D2 e aos tratamentos conservados a 17 C. A vitalidade e integridade acrossomal, no D0 e D4, foram melhores com LPD a 10 C, que mostrou ser um bom meio diluente para o sêmen suíno em temperatura mais baixa  (10C), conferindo uma maior proteção à célula espermática, através de maiores taxas de viabilidade  e integridade de acrossoma

Uso do diluente BTS no processo de congelação do sêmen suíno: II. Modificações na técnica / The BTS extender use in the swine semen freezing process: II. Modificantions in the technique

O sêmen de sete reprodutores foi coletado utilizando a técnica da mão enluvada sendo utilizado o ejaculado total. De cada ejaculado foi retirado 10,2 x109 sptz para cada tratamento. A qualidade do sêmen foi avaliada pela concentração (x106 sptz/mL), volume (mL), total de espermatozoides (x109 sptz), vigor espermático (0 a 5), porcentagem de células móveis (%), morfologia espermática (%) e integridade de membrana espermática (%). O sêmen foi diluído no Beltsville Thawing Solution (BTS). O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, utilizando-se o teste de Mann Whitney, com análise das diferenças entre médias feita por variância multifatorial com o General Linear Models do programa Statistical Analysis System (SAS 6.03), a um intervalo de confiança de p<0,05. Vários tratamentos foram propostos: diferentes volumes do diluente de resfriamento/congelação (18mL, 9mL, 6mL, 4mL); diferentes açúcares (glicose, frutose, lactose, sacarose); diferentes crioprotetores (glicerol, etileno glicol, propileno glicol, óleo mineral) e uso da gema de ovo em pó. O menor volume do diluente gema de ovo usado sem influenciar negativamente a qualidade espermática foi de 6 mL. A glicose obteve os melhores resultados, particularmente na de porcentagem de membrana intacta (25%). Dentre os crioprotetores utilizados, é desaconselhável o uso do óleo vegetal devido a menor motilidade espermática (15%) e de células com membrana intacta (0%). O uso da gema de ovo em pó pode ser recomendado devido a sua melhor qualidade sanitária. De uma maneira geral as modificações propostas pelo protocolo de trabalho não apresentaram os efeitos esperados. (AU)

The semen of seven swine males was collected by the glove handled technique, being used the total ejaculated. It was separate from each one a total of 10,2 x109 sptz, distributed among the treatments. The semen quality was evaluated by the concentration (x106 sptz/mL), volume (mL), total of spermatozoas (x109 sptz), spermatic vigour (0 to 5), movable cells (%), spermatic morphology (%) and spermatic membrane integrity (%). The semen was diluted in Beltsville Thawing Solution. The experimental statistic test used was the maybe blocks, with the Mann Whitney analysis, in the Lineal General Models of Statistical Analysis System Program (SAS 6.03), with a trust interval of p<0,05. Several treatments were proposed: differents volumes of freezing extender (18mL, 9mL, 6mL, 4mL); differents sugars (glucose, fructose, lactose, sucrose); different cryoprotectants (glycerol, ethylene glycol, propylene glycol, mineral oil) and use of yolk egg powdered. The smallest volume in the egg yolk extender used without negative influence in the spermatic quality was 6mL. The glucose obtained the best results, particularly in the percentage of intact membrane (25%). Among the cryoprotectants used, the use of the mineral oil is inadvisable due the smaller spermatic mobility (15%) and the cells with intact membrane (0%). The use of the egg yolk powdered can be recommended due to your best sanitary quality. In a general way the modifications proposed by the work protocol they didn't present the expected effects. (AU)

Uso do diluente BTS no processo de congelação do sêmen suíno: II. Modificações na técnica / The BTS extender use in the swine semen freezing process: II. Modificantions in the technique

O sêmen de sete reprodutores foi coletado utilizando a técnica da mão enluvada sendo utilizado o ejaculado total. De cada ejaculado foi retirado 10,2 x109 sptz para cada tratamento. A qualidade do sêmen foi avaliada pela concentração (x106 sptz/mL), volume (mL), total de espermatozoides (x109 sptz), vigor espermático (0 a 5), porcentagem de células móveis (%), morfologia espermática (%) e integridade de membrana espermática (%). O sêmen foi diluído no Beltsville Thawing Solution (BTS). O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, utilizando-se o teste de Mann Whitney, com análise das diferenças entre médias feita por variância multifatorial com o General Linear Models do programa Statistical Analysis System (SAS 6.03), a um intervalo de confiança de p<0,05. Vários tratamentos foram propostos: diferentes volumes do diluente de resfriamento/congelação (18mL, 9mL, 6mL, 4mL); diferentes açúcares (glicose, frutose, lactose, sacarose); diferentes crioprotetores (glicerol, etileno glicol, propileno glicol, óleo mineral) e uso da gema de ovo em pó. O menor volume do diluente gema de ovo usado sem influenciar negativamente a qualidade espermática foi de 6 mL. A glicose obteve os melhores resultados, particularmente na de porcentagem de membrana intacta (25%). Dentre os crioprotetores utilizados, é desaconselhável o uso do óleo vegetal devido a menor motilidade espermática (15%) e de células com membrana intacta (0%). O uso da gema de ovo em pó pode ser recomendado devido a sua melhor qualidade sanitária. De uma maneira geral as modificações propostas pelo protocolo de trabalho não apresentaram os efeitos esperados.

The semen of seven swine males was collected by the glove handled technique, being used the total ejaculated. It was separate from each one a total of 10,2 x109 sptz, distributed among the treatments. The semen quality was evaluated by the concentration (x106 sptz/mL), volume (mL), total of spermatozoas (x109 sptz), spermatic vigour (0 to 5), movable cells (%), spermatic morphology (%) and spermatic membrane integrity (%). The semen was diluted in Beltsville Thawing Solution. The experimental statistic test used was the maybe blocks, with the Mann Whitney analysis, in the Lineal General Models of Statistical Analysis System Program (SAS 6.03), with a trust interval of p<0,05. Several treatments were proposed: differents volumes of freezing extender (18mL, 9mL, 6mL, 4mL); differents sugars (glucose, fructose, lactose, sucrose); different cryoprotectants (glycerol, ethylene glycol, propylene glycol, mineral oil) and use of yolk egg powdered. The smallest volume in the egg yolk extender used without negative influence in the spermatic quality was 6mL. The glucose obtained the best results, particularly in the percentage of intact membrane (25%). Among the cryoprotectants used, the use of the mineral oil is inadvisable due the smaller spermatic mobility (15%) and the cells with intact membrane (0%). The use of the egg yolk powdered can be recommended due to your best sanitary quality. In a general way the modifications proposed by the work protocol they didn't present the expected effects.

Uso da água de coco em pó no processo de congelação do sêmen suíno: I. Controle durante o abaixamento da temperatura entre 30 e 15 °C / The coconut water powdered use in the swine semen freezing process: I. Controls during the temperature fall

O sêmen de oito reprodutores foi coletado utilizando a técnica da mão enluvada sendo utilizado o ejaculado total. De cada ejaculado foi retirado 10,2 x109 sptz para cada tratamento. A qualidade do sêmen foi avaliada pela concentração (x106 sptz/mL), volume (mL), total de espermatozoides (x109 sptz), vigor espermático (0 a 5), porcentagem de células móveis (%), morfologia espermática (%) e integridade de membrana (%). O sêmen foi diluído no Beltsville Thawing Solution (BTS) e na água de coco em pó (ACP). O ejaculado foi diluído em partes iguais (1:1) e incubado entre 30 oC e 15 oC. Os exames da integridade do acrossoma e vitalidade foram feitos no sêmen puro e diluído pela técnica do azul de bromo-fenol em aumento de 1000x. A integridade da membrana plasmática foi avaliada pela coloração fluorescente em microscopia óptica de campo escuro. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, utilizando-se os testes de Mann Whitney, Tukey e Student, com análise das diferenças entre médias feita por variância multifatorial com o General Linear Models do programa Statistical Analysis System (SAS 6.03), a um intervalo de confiança de p<0,05. As avaliações do sêmen in natura, apresentaram valores médios de vigor espermático (4,2) e de porcentagem de espermatozoides móveis (92%) acima dos parâmetros mínimos exigidos (3,0 e 70%) para sua utilização em programas de inseminação artificial. Na característica porcentagem de células móveis, o ACP (74%) foi significativamente melhor que o BTS (67%) a 15 oC. Os melhores resultados foram obtidos com o uso do diluente ACP: acrossoma intacto (49,2%); células vivas (62,5%) e membrana íntegra (65,6%). O diluente ACP proporcionou um meio de conservação que manteve maior número de espermatozoides vivos com membranas íntegras, podendo ser recomendado para uso(...)(AU)

The semen of eight swine males was collected by the glove handled technique, being used the total ejaculated. It was retired from each ejaculated a total of 10.2 x109 sptz, distributed among the treatments. The semen quality was evaluated by the concentration (x106 sptz/mL), volume (mL), total of spermatozoa (x109 sptz), spermatic vigour (0 to 5), movable cells (%), spermatic morphology (%) and membrane integrity (%). The semen was diluted in Beltsville Thawing Solution (BTS) and the coconut water powdered extender (ACP), in the same parts (1:1) and incubated between 30 oC and 15 oC. The exams of acrossome integrity and vitality, were made in the pure and diluted semen, by the bromophenol blue technique in increase at 1000x. The integrity of plasmatic membranes was evaluated by the fluorescent coloration in optical microscopy of dark field. The experimental statistic test used was the maybe blocks, with the Mann Whitney, Tukey and Student analysis, in the Lineal General Models of Statistical Analysis System Program (SAS 6.03), with a trust interval of p<0.05. The in nature semen evaluations, presented medium values of spermatic vigour (4.2) and the movable spermatozoa (92%) above the minimum demanded parameters (3.0 and 70%) for your use in artificial insemination programs. In the percentage of movable cells characteristic, the ACP extender (74%) it was significantly better than BTS (67%) at 15 oC. The best results were obtained with use of the ACP extender: intact acrossome (49.2%); alive cells (62.5%) and complete membrane (65.6%). The coconut water extender provided a conservation middle that maintained a larger number of alive spermatozoids with integrate membranes and could be recommended for routine use in reproduction laboratories. The ACP extender demonstrated to be a good middle of swine spermatozoa conservation in temperatures between 17 and 15 °C, and may be indicated for use in artificial insemination programs.(AU)

Uso da água de coco em pó no processo de congelação do sêmen suíno: I. Controle durante o abaixamento da temperatura entre 30 e 15 °C / The coconut water powdered use in the swine semen freezing process: I. Controls during the temperature fall

O sêmen de oito reprodutores foi coletado utilizando a técnica da mão enluvada sendo utilizado o ejaculado total. De cada ejaculado foi retirado 10,2 x109 sptz para cada tratamento. A qualidade do sêmen foi avaliada pela concentração (x106 sptz/mL), volume (mL), total de espermatozoides (x109 sptz), vigor espermático (0 a 5), porcentagem de células móveis (%), morfologia espermática (%) e integridade de membrana (%). O sêmen foi diluído no Beltsville Thawing Solution (BTS) e na água de coco em pó (ACP). O ejaculado foi diluído em partes iguais (1:1) e incubado entre 30 oC e 15 oC. Os exames da integridade do acrossoma e vitalidade foram feitos no sêmen puro e diluído pela técnica do azul de bromo-fenol em aumento de 1000x. A integridade da membrana plasmática foi avaliada pela coloração fluorescente em microscopia óptica de campo escuro. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, utilizando-se os testes de Mann Whitney, Tukey e Student, com análise das diferenças entre médias feita por variância multifatorial com o General Linear Models do programa Statistical Analysis System (SAS 6.03), a um intervalo de confiança de p<0,05. As avaliações do sêmen in natura, apresentaram valores médios de vigor espermático (4,2) e de porcentagem de espermatozoides móveis (92%) acima dos parâmetros mínimos exigidos (3,0 e 70%) para sua utilização em programas de inseminação artificial. Na característica porcentagem de células móveis, o ACP (74%) foi significativamente melhor que o BTS (67%) a 15 oC. Os melhores resultados foram obtidos com o uso do diluente ACP: acrossoma intacto (49,2%); células vivas (62,5%) e membrana íntegra (65,6%). O diluente ACP proporcionou um meio de conservação que manteve maior número de espermatozoides vivos com membranas íntegras, podendo ser recomendado para uso(...)

The semen of eight swine males was collected by the glove handled technique, being used the total ejaculated. It was retired from each ejaculated a total of 10.2 x109 sptz, distributed among the treatments. The semen quality was evaluated by the concentration (x106 sptz/mL), volume (mL), total of spermatozoa (x109 sptz), spermatic vigour (0 to 5), movable cells (%), spermatic morphology (%) and membrane integrity (%). The semen was diluted in Beltsville Thawing Solution (BTS) and the coconut water powdered extender (ACP), in the same parts (1:1) and incubated between 30 oC and 15 oC. The exams of acrossome integrity and vitality, were made in the pure and diluted semen, by the bromophenol blue technique in increase at 1000x. The integrity of plasmatic membranes was evaluated by the fluorescent coloration in optical microscopy of dark field. The experimental statistic test used was the maybe blocks, with the Mann Whitney, Tukey and Student analysis, in the Lineal General Models of Statistical Analysis System Program (SAS 6.03), with a trust interval of p<0.05. The in nature semen evaluations, presented medium values of spermatic vigour (4.2) and the movable spermatozoa (92%) above the minimum demanded parameters (3.0 and 70%) for your use in artificial insemination programs. In the percentage of movable cells characteristic, the ACP extender (74%) it was significantly better than BTS (67%) at 15 oC. The best results were obtained with use of the ACP extender: intact acrossome (49.2%); alive cells (62.5%) and complete membrane (65.6%). The coconut water extender provided a conservation middle that maintained a larger number of alive spermatozoids with integrate membranes and could be recommended for routine use in reproduction laboratories. The ACP extender demonstrated to be a good middle of swine spermatozoa conservation in temperatures between 17 and 15 °C, and may be indicated for use in artificial insemination programs.

Qualidade morfofuncional do espermatozoide suíno conservado nos diluentes ACP®- 103 e BTS / Morfo-functional quality of swine spermatozoa in conservation into BTS and coconut water powdered extender

Com a finalidade de se testar a ação do diluente água de coco em pó sobre as características morfológicas do espermatozoide suíno, o sêmen de sete reprodutores foi coletado, sendo separado de cada ejaculado um total de 1,75x109 sptz entre os dois tratamentos, com concentração de 35x106 sptz/mL. Usou-se o BTS como controle sendo testado o diluente água de coco em pó. O dia de coleta foi D0, sendo o sêmen conservado durante 5 dias, com análises em: D0 e D4. A avaliação da qualidade espermática baseou-se nos resultados da produção espermática, morfologia espermática, resistência osmótica e número de células vivas. Para o delineamento experimental, utilizou-se o teste Mann Whitney (SAS 6.03), a um intervalo de confiança de p<0,05. O resultado da resistência osmótica foi excelente, com 71,3% de espermatozoides com cauda enrolada. Não houve diferença estatística entre os dois diluentes testados para a característica células com acrossoma intacto (BRS=67,1%; ACP=71,2%). O sêmen diluído em ACP®-103 é aconselhável para o uso de rotina em laboratórios que trabalhem com conservação de sêmen suíno.(AU)

In order to test the action of coconut water powdered extender on the morphological characteristics of swine spermatozoa, the semen of seven swine males was collected and it was separate from each one a total of 1.75x109sptz, among the treatments, to a concentration of 35x106 sptz/mL. The BTS was used as control, being tested to coconut water powdered extender. The day of collection was considered D0, with a semen conservation for 5 days, with analyses in D0 and D4. The evaluation of spermatic quality was based in the results of the spermatic production, spermatic morphology, osmotic resistance and the alive cells number. The experimental statistic test used was Mann Whitney (SAS 6.03), with a trust interval of p<0.05. The medium results of the osmotic resistance were excellent, with 71.3% of spermatozoa with coiled tail. There were not statistics differences among the two extenders tested for the characteristic cells with intact acrosome (BTS=67.1%; ACP=71.2%). The semen diluted in ACP®-103 extender presented a higher number of alive cells (77.7%) after conservation period, statistically different from the BTS (58.4%). The choice of ACP®-103 extender is advisable for the routine use in laboratories that work with conservation of swine semen.(AU)

Qualidade morfofuncional do espermatozoide suíno conservado nos diluentes ACP®- 103 e BTS / Morfo-functional quality of swine spermatozoa in conservation into BTS and coconut water powdered extender

Com a finalidade de se testar a ação do diluente água de coco em pó sobre as características morfológicas do espermatozoide suíno, o sêmen de sete reprodutores foi coletado, sendo separado de cada ejaculado um total de 1,75x109 sptz entre os dois tratamentos, com concentração de 35x106 sptz/mL. Usou-se o BTS como controle sendo testado o diluente água de coco em pó. O dia de coleta foi D0, sendo o sêmen conservado durante 5 dias, com análises em: D0 e D4. A avaliação da qualidade espermática baseou-se nos resultados da produção espermática, morfologia espermática, resistência osmótica e número de células vivas. Para o delineamento experimental, utilizou-se o teste Mann Whitney (SAS 6.03), a um intervalo de confiança de p<0,05. O resultado da resistência osmótica foi excelente, com 71,3% de espermatozoides com cauda enrolada. Não houve diferença estatística entre os dois diluentes testados para a característica células com acrossoma intacto (BRS=67,1%; ACP=71,2%). O sêmen diluído em ACP®-103 é aconselhável para o uso de rotina em laboratórios que trabalhem com conservação de sêmen suíno.

In order to test the action of coconut water powdered extender on the morphological characteristics of swine spermatozoa, the semen of seven swine males was collected and it was separate from each one a total of 1.75x109sptz, among the treatments, to a concentration of 35x106 sptz/mL. The BTS was used as control, being tested to coconut water powdered extender. The day of collection was considered D0, with a semen conservation for 5 days, with analyses in D0 and D4. The evaluation of spermatic quality was based in the results of the spermatic production, spermatic morphology, osmotic resistance and the alive cells number. The experimental statistic test used was Mann Whitney (SAS 6.03), with a trust interval of p<0.05. The medium results of the osmotic resistance were excellent, with 71.3% of spermatozoa with coiled tail. There were not statistics differences among the two extenders tested for the characteristic cells with intact acrosome (BTS=67.1%; ACP=71.2%). The semen diluted in ACP®-103 extender presented a higher number of alive cells (77.7%) after conservation period, statistically different from the BTS (58.4%). The choice of ACP®-103 extender is advisable for the routine use in laboratories that work with conservation of swine semen.

Detection and dynamics of porcine circovirus 2 shedding in semen using conventional and real-time PCR / Deteccão e dinâmica de excreção do circo vírus porcino tipo 2 no semen pelo PCR convencional e PCR em tempo real

The dynamics of porcine circovirus type 2 (PCV2) shedding in semen of naturally infected boars was studied. Semen was collected serially each 15 or 20 days during 62 days from 5 boars from a herd and from 11 boars from an artificial insemination center. All boars were positive for PCV2 DNA by nested polymerase chain reaction of raw semen in at least two sampling dates, and most of them had detectable shedding in all sampling dates. Real-time quantitative PCR was performed in 23 samples. All samples showed low amounts of PCV2 DNA, ranging from 98 to 652 PCV2 copies/mL. No differences between the frequencies of PCV2 DNA shed in semen were found considering herds and age of boars. PCV2 shedding in the semen can occur continuously or intermittently up to 60 days in naturally infected boars at 12 to 42 months old in absence of PCV2 clinical signs. These results demonstrate sporadic and long-term shedding patterns of low amounts of PCV2 DNA in semen from naturally infected boars.

A dinâmica da excreção do circovírus suíno tipo 2 (CVS2) em sêmen de machos naturalmente infectados foi estudada. Amostras de sêmen de cinco machos de um plantel e de 11 machos de um centro de inseminação artificial foram coletadas a cada 15 ou 20 dias durante 62 dias. Todos os machos testados foram positivos para a presença do DNA viral no sêmen em pelo menos duas coletas, sendo que a maioria deles eliminou o CVS2 em todas as coletas. O teste de PCR quantitativa em tempo real foi aplicado em 23 amostras. Todas as amostras tinham baixa quantidade de DNA viral, variando de 98 a 652 cópias de CVS2/ml. Não houve diferença na freqüência de eliminação do DNA viral levando em conta os plantéis e idade dos machos. A excreção do CVS2 no sêmen pode ocorrer de forma contínua ou intermitente por mais de 60 dias em machos de 12 a 42 meses de idade naturalmente infectados na ausência de sinais clínicos de CVS2. Estes resultados demonstram padrões esporádico e de longa duração de excreção viral em pequenas quantidades no sêmen de varrões naturalmente infectados.

Detection and dynamics of porcine circovirus 2 shedding in semen using conventional and real-time PCR / Deteccão e dinâmica de excreção do circo vírus porcino tipo 2 no semen pelo PCR convencional e PCR em tempo real

The dynamics of porcine circovirus type 2 (PCV2) shedding in semen of naturally infected boars was studied. Semen was collected serially each 15 or 20 days during 62 days from 5 boars from a herd and from 11 boars from an artificial insemination center. All boars were positive for PCV2 DNA by nested polymerase chain reaction of raw semen in at least two sampling dates, and most of them had detectable shedding in all sampling dates. Real-time quantitative PCR was performed in 23 samples. All samples showed low amounts of PCV2 DNA, ranging from 98 to 652 PCV2 copies/mL. No differences between the frequencies of PCV2 DNA shed in semen were found considering herds and age of boars. PCV2 shedding in the semen can occur continuously or intermittently up to 60 days in naturally infected boars at 12 to 42 months old in absence of PCV2 clinical signs. These results demonstrate sporadic and long-term shedding patterns of low amounts of PCV2 DNA in semen from naturally infected boars.(AU)

A dinâmica da excreção do circovírus suíno tipo 2 (CVS2) em sêmen de machos naturalmente infectados foi estudada. Amostras de sêmen de cinco machos de um plantel e de 11 machos de um centro de inseminação artificial foram coletadas a cada 15 ou 20 dias durante 62 dias. Todos os machos testados foram positivos para a presença do DNA viral no sêmen em pelo menos duas coletas, sendo que a maioria deles eliminou o CVS2 em todas as coletas. O teste de PCR quantitativa em tempo real foi aplicado em 23 amostras. Todas as amostras tinham baixa quantidade de DNA viral, variando de 98 a 652 cópias de CVS2/ml. Não houve diferença na freqüência de eliminação do DNA viral levando em conta os plantéis e idade dos machos. A excreção do CVS2 no sêmen pode ocorrer de forma contínua ou intermitente por mais de 60 dias em machos de 12 a 42 meses de idade naturalmente infectados na ausência de sinais clínicos de CVS2. Estes resultados demonstram padrões esporádico e de longa duração de excreção viral em pequenas quantidades no sêmen de varrões naturalmente infectados.(AU)

Efeito de fontes de óleo e níveis de suplementação de vitamina E na ração sobre as características físicas e morfológicas do sêmen in natura de suínos / Effect of oil sources and vitamin E supplementation in the diet on physical and morphological characteristics of fresh boar semen

Avaliou-se o efeito da adição de diferentes fontes de óleo e níveis de suplementação de vitamina E na ração sobre as características do sêmen in natura de suínos reprodutores. Foram utilizados 24 reprodutores Dalboar 85, com idades entre 12 e 18 meses, distribuídos em delineamento inteiramente ao acaso, em arranjo fatorial 2 x 3, com duas fontes de óleo, soja e salmão, e três níveis de antioxidantes, 150, 300 e 450mg de vitamina E/kg. Volume, motilidade espermática total, teste hiposmótico, porcentagem de espermatozoides vivos e morfologia espermática não diferiram (P>0,05) entre os tratamentos. Óleo de salmão (P<0,05) melhorou o vigor espermático. A inclusão de vitamina E na ração melhorou (P<0,05) a concentração espermática, e não foi observada diferença entre as fontes de óleo (P>0,05). Os animais tratados com óleo de salmão apresentaram menor (P<0,05) concentração de antioxidantes totais no sêmen do que os tratados com óleo de soja. Observou-se efeito linear da vitamina E sobre a concentração de antioxidantes totais (P<0,05). A fonte de óleo de salmão da ração melhora o vigor espermático e a concentração de antioxidantes totais no sêmen.

The addition of oil sources and dietary vitamin E supplementation was evaluated on the characteristics of fresh boar sperm. Twenty-four mature Dalboar 85 boars of proven fertility and in routine semen production for artificial insemination were randomly distributed in a factorial arrangement 2 X 3, with two oil sources, soy and salmon, and three antioxidant levels: 150, 300, and 450mg/kg of vitamin E. Volume, total motile sperm, hyposmotic swelling test, percentage of live cell, and morphology did not differ (P<0.05) between the animals from the treatments. Salmon oil improved (P<0.05) sperm vigor. The vitamin E added to the diet improved (P<0.05) the sperm concentration, and there was no difference between the oil sources (P>0.05). Salmon oil treatment showed the lowest (P<0.05) concentration of total antioxidants in the semen. Vitamin E and concentration of total antioxidant showed a linear effect (P<0.05). The semen vigor and the concentration of total antioxidants were improved by oil sources, but the sperm concentration was dependent on the levels of vitamin E. Therefore, salmon oil can be used in the diet of male pigs.