Association between Haemagglutination inhibiting antibodies and protection against clade 6B viruses in 2013 and 2015.

BACKGROUND: The epidemiology of the pandemic A(H1N1) virus has been changing as population immunity continues to co-evolve with the virus. The impact of genetic changes in the virus on human's susceptibility is an outstanding important question in vaccine design. In a community-based study, we aim to (1) determine the genetic characteristics of 2009-2015 pandemic H1N1 viruses, (2) assess antibody response following natural infections and (3) assess the correlation of A/California/07/09 antibody titers to protection in the 2013 and 2015 epidemics. METHODS: In a household transmission study, serum specimens from 253 individuals in Managua, Nicaragua were analyzed. Combined nose and throat swabs were collected to detect RT-PCR confirmed influenza infection and virus sequencing. Hemagglutination inhibition assays were performed and the protective titer for circulating H1N1pdm was determined. RESULTS: Clade 6B pandemic H1N1 viruses predominated in Nicaragua during the 2013 and 2015 seasons. Our household transmission study detected a household secondary attack rate of 17% in 2013 and 33% in 2015. Infected individuals, including vaccinees, showed an apparent antibody response to A/California/07/09. Baseline titers of A/California/07/09 antibodies were found to associate with protection in both seasons. A titer of ≥1:40 correlated to a 44% protection in children, a 29% protection in adults 15-49years old and a 51% protection in adults 50-85years old. CONCLUSION: In 2013 and 2015, antibody titers to A/California/07/09 associated with an infection risk reduction amongst exposed household contacts. This is consistent with a detectable vaccine effectiveness reported in a number of studies. Genetic changes in clade 6B viruses might have led to a reduced immunity in some whereas others might have been less affected. The use of human serologic data is important in virus characterization and if performed in a timely manner, could assist in vaccine strain selection.

Structural analysis of effector functions related motifs, complement activation and hemagglutinating activities in Lama glama heavy chain antibodies.

Heavy chain antibodies (HCAbs), devoid of the light chains and the CH(1) domain, are present in the serum of camelids. IgG(2) and IgG(3) are HCAbs; whereas IgG(1) has the conventional structure. In order to study the immunological properties of llama HCAbs, from which to date little is known, llamas (Lama glama) HCAbs cDNA were cloned, sequenced and compared with other mammalian Igs. The sequence analysis showed that llama HCAbs cDNA organization is similar to other mammalian Igs and the presence of conserved binding motifs to Protein A, Protein G, FcγRI, FcγRIII and C1q in HCAbs were observed. In a previous work, different IgG isotypes purified by Protein A and Protein G chromatography, were assayed for their ability to fix complement. Both IgG(1) and the total serum were able to fix complement, whereas IgG(2) and IgG(3) fixed complement even in the absence of antigen (anti-complementary activity). Therefore, in this work we performed the complement activating activity of the different IgG isotypes purified under physiological conditions using Sephadex G-150 and their ability to induce hemagglutination. Llamas were immunized with sheep red blood cells (RBC) stroma and the different isotypes were purified from sera. Whole serum and IgG(1) could activate complement; however, HCAbs (IgG(2)+IgG(3)) could not, despite the presence of the C1q binding motif in their primary sequence. Unlike IgG(1), the fraction corresponding to IgG(2)+IgG(3) did not display hemagglutinating activity. Our findings suggest that HCAbs cannot crosslink efficiently with different antigens and that the C1q binding site might be hindered by the proximity of the variable domains.

Ascaris lumbricoides: epitopes del Sistema P por método de cinética de la hemaglutinación / Ascaris lumbricoides: P system epithopes by haemogglutination kinetics method

Experiencias previas demostraron epitopes P1 en Ascaris lumbricoides por inhibición de la aglutinación. La cinética de la hemaglutinación aplica la extinción óptica relativa producida por un haz de luz trasmitido a través de una suspensión de pequeñas partículas, y permite obtener una estimación paramétrica de la tasa de hemaglutinación. El objetivo de este trabajo fue utilizar este método para demostrar la presencia de epitopes del Sistema P en extractos de A. lumbricoides. La técnica de inhibición de la aglutinación permitió seleccionar 10 extractos: 3 con y 7 sin epitopes P1. Se registró la cinética de la reacción Control: anti- P1- eritrocitos - P1 y la cinética de la misma reacción, previo contacto del anticuerpo con el extracto. Se calcularon y se compararon los valores de ³ EOR % (variación en el porcentaje de extinción óptica relativa) para ambas reacciones. Los resultados evidenciaron la presencia de epitopes P1, que no habían sido detectados por inhibición de la aglutinación, en 3 extractos. Para los extractos restantes, hubo coincidencia entre los resultados obtenidos por los dos métodos. La cinética de la hemaglutinación es sencilla, rápida y fácilmente adaptable para las experiencias en que se necesite evaluar una reacción antígeno-anticuerpo a través de la hemaglutinación.

Summary Previous experiences have demonstrated P1 epithopes in Ascaris lumbricoides by inhibition agglutination. Haemogglutination kinetics applies the relative optical extinction produced on a light beam transmitted through a suspension of small particles, giving a parametric estimate of the haemagglutination rate.The aim was to use this method for the demonstration of P System epithopes presence in A. lumbricoides extracts. inhibition agglutination test enabled the selection of 10 extracts: 3 with and 7 without P1 epithopes. Kinetics of anti- P1 - P1 erythrocyte control reaction and kinectics of the same reaction with a previous contact between antibody and extract were registered. ³ EOR % values (relative optical extinction variation) for both reactions were calculated and compared between themselves. The results proved P1 epithopes presence in 3 extracts, which had not been detected by inhibition agglutination. The results coincided for the remaining extracts by both methods. Haemogglutination kinetics is simple and fast and it is easily adapted for experiences in which the investigator needs to assess the antibody-antigen reaction by haemogglutination.

Haemagglutination induced by Bordetella pertussis filamentous haemagglutinin adhesin (FHA) is inhibited by antibodies produced against FHA(430-873) fragment expressed in Lactobacillus casei.

Filamentous haemagglutinin adhesin (FHA) is an important virulence factor from Bordetella pertussis related to the adhesion and spread of the bacteria through the respiratory tract. Three distinct domains have been characterized in mature FHA, and among them, the FHA(442-863) fragment was suggested to be responsible for the heparin-binding activity. In this study, we cloned the gene encoding the HEP fragment (FHA(430-873)) in a Lactobacillus casei-inducible expression vector based on the lactose operon. The recombinant bacteria, transformed with the resulting construct (L. casei-HEP), were able to express the heterologous protein depending on the sugar added to the culture. Subcutaneous inoculation of L. casei-HEP in Balb/C mice, using the cholera toxin B subunit as adjuvant, induced systemic anti-HEP antibodies that were able to inhibit in vitro erythrocyte haemagglutination induced by FHA. This is the first example of a B. pertussis antigen produced in lactic acid bacteria and opens new perspectives for alternative vaccine strategies against whooping cough.

Aplicación de una cámara de flujo para el análisis de la aglutinación eritrocitaria mediada por anticuerpos monoclonales / Application of the flow chamber technique to the analysis of the erythrocyte agglutination mediated by monoclonal antibodies

El conocimiento de la energía involucrada en las interacciones célula-célula tiene importantes implicaciones en las ciencias biológicas y médicas. Los glóbulos rojos se adhieren entre si cuando macromoléculas específicas o no específicas (aglutininas) enlazan células adyacentes de manera irreversible o reversible. La técnica de la cámara de flujo fue utilizada para evaluar la afinidad de un anticuerpo monoclonal analizando la disociación de un doblete (dos células aglutinadas por el anticuerpo) determinando la energía de adhesión. Esta técnica permite aplicar una tensión de corte uniforme paralela a la interfase de adhesión de un aglutinado de dos células fijado sobre la superficie inferior de un microcanal. La tensión produce el desprendimiento progresivo de la célula superior del doblete. La observación microscópica de la separación producida en el aglutinado aislado y la obtención de imágenes secuenciales con una cámara CCD (Charged Coupled Device), permite determinar la relación entre la tensión de corte aplicada (sigma) y el porcentaje de separación de las células del doblete. A partir de estos resultados calculamos la energía de disociación por unidad de área membranal adherida(gamma d), valor igual a 8.92 x 10 elevado a -19 N.cm por moléculas de anticuerpo. Del análisis de los resultados, se concluye que la tensión de corte necesaria para disociar el doblete es proporcional a la densidad superficial de moléculas de anticuerpo y a la densidad antigénica de los eritrocitos. (AU)

Aplicación de una cámara de flujo para el análisis de la aglutinación eritrocitaria mediada por anticuerpos monoclonales / Application of the flow chamber technique to the analysis of the erythrocyte agglutination mediated by monoclonal antibodies

El conocimiento de la energía involucrada en las interacciones célula-célula tiene importantes implicaciones en las ciencias biológicas y médicas. Los glóbulos rojos se adhieren entre si cuando macromoléculas específicas o no específicas (aglutininas) enlazan células adyacentes de manera irreversible o reversible. La técnica de la cámara de flujo fue utilizada para evaluar la afinidad de un anticuerpo monoclonal analizando la disociación de un doblete (dos células aglutinadas por el anticuerpo) determinando la energía de adhesión. Esta técnica permite aplicar una tensión de corte uniforme paralela a la interfase de adhesión de un aglutinado de dos células fijado sobre la superficie inferior de un microcanal. La tensión produce el desprendimiento progresivo de la célula superior del doblete. La observación microscópica de la separación producida en el aglutinado aislado y la obtención de imágenes secuenciales con una cámara CCD (Charged Coupled Device), permite determinar la relación entre la tensión de corte aplicada (sigma) y el porcentaje de separación de las células del doblete. A partir de estos resultados calculamos la energía de disociación por unidad de área membranal adherida(gamma d), valor igual a 8.92 x 10 elevado a -19 N.cm por moléculas de anticuerpo. Del análisis de los resultados, se concluye que la tensión de corte necesaria para disociar el doblete es proporcional a la densidad superficial de moléculas de anticuerpo y a la densidad antigénica de los eritrocitos. (AU)

Aplicación de una cámara de flujo para el análisis de la aglutinación eritrocitaria mediada por anticuerpos monoclonales / Application of the flow chamber technique to the analysis of the erythrocyte agglutination mediated by monoclonal antibodies

El conocimiento de la energía involucrada en las interacciones célula-célula tiene importantes implicaciones en las ciencias biológicas y médicas. Los glóbulos rojos se adhieren entre si cuando macromoléculas específicas o no específicas (aglutininas) enlazan células adyacentes de manera irreversible o reversible. La técnica de la cámara de flujo fue utilizada para evaluar la afinidad de un anticuerpo monoclonal analizando la disociación de un doblete (dos células aglutinadas por el anticuerpo) determinando la energía de adhesión. Esta técnica permite aplicar una tensión de corte uniforme paralela a la interfase de adhesión de un aglutinado de dos células fijado sobre la superficie inferior de un microcanal. La tensión produce el desprendimiento progresivo de la célula superior del doblete. La observación microscópica de la separación producida en el aglutinado aislado y la obtención de imágenes secuenciales con una cámara CCD (Charged Coupled Device), permite determinar la relación entre la tensión de corte aplicada (sigma) y el porcentaje de separación de las células del doblete. A partir de estos resultados calculamos la energía de disociación por unidad de área membranal adherida(gamma d), valor igual a 8.92 x 10 elevado a -19 N.cm por moléculas de anticuerpo. Del análisis de los resultados, se concluye que la tensión de corte necesaria para disociar el doblete es proporcional a la densidad superficial de moléculas de anticuerpo y a la densidad antigénica de los eritrocitos.

Antibodies produced against a fragment of filamentous haemagglutinin (FHA) of Bordetella pertussis are able to inhibit hemagglutination induced by the whole adhesin.

Filamentous hemagglutinin adhesin (FHA) is important for the adherence of Bordetella pertussis to the host ciliary epithelial cells of the respiratory tract. Several binding domains have been characterized in the FHA molecule. For example, an putative heparin-binding domain of FHA was previously located in the FHA(442-863) region. In this work, the HEP fragment, corresponding to FHA(430-873) was amplified by PCR and subcloned in an Escherichia coli expression plasmid. Purified recombinant HEP was used to produce polyclonal antibodies in mice that were able to recognize HEP and FHA in ELISA and in Western-blot assays. Although recombinant HEP displayed low ability to bind heparin and no hemagglutination activity, the anti-HEP antibodies were able to inhibit FHA mediated hemagglutination activity in goose erythrocytes. These results indicate that other amino acid residues that are not present in the FHA(430-873) fragment may be necessary for heparin binding. Further studies to address the immunogenic response against HEP are also required.

Inmunodiagnostico de la toxoplasmosis: hemaglutinación indirecta e inmunoanalisis enzimatico IgM e IgG / Immunodiagnosis of the toxoplasmosis: indirect hemagglutination IgM and IgG enzime linked immunosorbent assay

En el presente trabajo se compararon los métodos de Hemaglutinación Indirecta (HAI) e Inmunoanálisis Enzimático (ELISA, IgM e IgG) para investigar anticuerpos antitoxoplasma en 54 muestras sanguíneas. Los resultados obtenidos muestran una concordancia del 62.96 por ciento entre HAI y ELISA. IgM y del 83.33 por ciento entre HAI y ELISA. IgG. El análisis estadístico mediante el chi cuadrado, reveló que hubo significancia cuando se compararon todos los títulos de HAI a partir de 1:2 con todos los índices de ELISA. IgM, esta significancia no puede establecer la superioridad de un método sobre el otro, debido: a. La utilización del "kit" comercial ELISA. IgM que solo detecta este tipo de anticuerpo; b. La detección por HAI de IgM e IgG; c. La presencia de anticuerpos inespecíficos de HAI y ELISA. IgG reveló que no hubo diferencias, lo cual nos indica que la discordancia entre ambos métodos no es estadísticamente significante

Comparación de pruebas serológicas para el diagnóstico de mastitis por Mycoplasma bovis / Comparison of serological tests for the diagnosis of mastitis by Mycoplasma bovis

El objetivo de este trabajo fue comparar la prueba de hemaglutinación pasiva, inhibición de crecimiento e inhibición de película como métodos para el diagnóstico serológico de mastitis causada por Mycoplasma bovis (Mb). El grupo testigo fue de 40 vacas Holstein sin historia de mastitis por Mycoplasma sp. El grupo problema fue un hato de 57 vacas Holstein. De ambos grupos se obtuvieron muestras de sangre y de leche en condiciones de asepsia. Con el suero sanguíneo se hicieron las pruebas del estudio y se intentó hacer el aislamiento de las muestras de leche. Se obtuvieron 16 aislamientos de Mycoplasma bovis. Se encontró que la prueba de hemaglutinación pasiva tenía 25 por ciento de sensibilidad y una especificidad del 90 por ciento. La prueba de inhibición de crecimiento tuvo una sensibilidad del 62.5 por ciento y especificidad del 95 por ciento. La prueba de inhibición de película presentó una sensibilidad del 100 por ciento y una especificidad del 52.5 por ciento. Se encontró que los títulos de hemaglutinación pasiva en animales infectados se incrementaron hasta 1:160; a diferencia del grupo testigo que llegaron hastas 1:40. En cuanto a la inhibición de crecimiento, los halos fueron de 2 hasta 15 mm en el hato problema y en el grupo testigo, la mayoría no presentó inhibición. Se concluyó que la prueba que mejoro funciona a nivel de hato es la de inhibición de crecimiento

Encefalitis equina venezolana: estudio clínico y de laboratorio en pacientes pediátricos / Venezuelan equine encephalitis: clinical and laboratory study in pediatric patients

Se hizo el estudio clínico y de laboratorio de nueve niños con encefalitis producida por el virus de la encefalitis equina Venezolana, demostrado por aislamiento del virus y por la prueba de inhibición de la hemaglutinación. Casi todos los pacientes tenían anticuerpos demostrables en el séptimo día de evolución de la enfermedad. El examen clínico indica que los síntomas y signos más frecuentes fueron: fiebre, convulsiones y otras manifestaciones de excitación cortical. Los exámenes hemáticos revelaron leucocitosis inicial con ulterior tendencia hacia leucopenia. Con fórmula leucocitaria normal al comienzo seguida de neutropenia en la mayoría de los casos. El líquido cefalorraquídeo presentó pleocitosis con linfocitos en dos casos y neutrófilos en otro. Hubo hiperglucorraquia en el 50 por ciento de los niños y aumento de la albúmina raquídea. Las pruebas cualitativas para globulinas fueron positivas en tres oportunidades

Venezuelan equine: encephalomyelitis virus: structural components / Componentes estructurales: virus encefalomielitis equina venezolana

Venezuelan equine encephalomyelitis (VEE) virus, purified in sucrose density gradients was examined with the electron microscope before and after sodium desoxycholate (DOC) treatment. The structure of the nucleocapsid revealed 10 to 12 nm ring shaped units organized into an icosahedral symmetry. Density gradied fractions exhibiting hemagglutinating activity after DOC treatment show 12 to 18 nm particles lined by short projections. These isolated hemagglutinating subunits are though to correspond to the superficial spikes of VEE virus

Transmisión de cepas suramericanas del virus de la encefalitis equina venezolana por mosquitos Aedes aegypti / Transmission experiments with south american strains of venezuelan equine encephalitis virus and Aedes aegypti mosquitoes

Se hicieron ensayos de transmisión con cepas venezolanas, peruanas y colombianas del virus de la encefalitis equina Venezolana (EEV), y mosquitos Aedes aegypti. No se obtuvieron diferencias significativas en los porcentajes de transmisión, excepto con una cepa peruana (71D1252), catalogada como un nuevo subtipo antigénico, cuyo porcentaje de transmisión fue muy bajo. Se concluye que A. aegypti transmite eficazmente las cepas estudiadas, aunque no tiene capacidad de selección entre las mismas

Anticuerpos contra el virus de la encefalitis equina venezolana en la población del Distrito Páez del Estado Zulia, Venezuela / Antibodies against venezuelan equine encephalitis virus in the population of Zulia State, Venezuela

Con el propósito de conocer la presencia de anticuerpos para el virus de la encefalitis equina venezolana (EEV), se estudiaron 192 sueros (112 niños y 80 adultos), provenientes de las poblaciones de Carretal, Cojoro, Paraguaipoa (Dtto. Páez), entre los meses de marzo y octubre de 1986. Las muestras fueron analizadas mediante las técnicas de inhibición de la hemaglutinación (IHA), usando de EEV (cepa guajira). Se encontró que de las 192 muestras procesadas, 161 fueron negativas, para un 84 por ciento; esta ausencia de anticuerpos se observó principalmente, en la población infantil donde alcanzó un 97 por ciento. La negatividad en los adultos fue de 65 por ciento. Estos resultados demuestran que no ha habido actividad viral desde la última epidemia de 1973, probablemente debido a los controles epidemiológicos efectuados en la zona, y que el porcentaje de positividad entre los mayores de 15 años se ha mantenido en el mismo nivel desde la última encuesta practicada en ese año de 1973

Encefalitis equina venezolana: determinación de anticuerpos en la población humana del Municipio Miranda, Estado Zulia, Venezuela / Venezuelan equine encephalitis: antibodies determination in the human population of Miranda country, Zulia State, Venezuela

Con el objeto de determinar la prevalencia de anticuerpos contra el virus de la encefalitis equina venezolana en las poblaciones de los Puertos de Altagracia y Sabaneta de Palmas, del Municipio Miranda, del Estado Zulia, en Venezuela, se estudiaron 199 individuos, 57 provenientes de los Puertos de Altagracia y 142 de Sabaneta de Palmas. Estos se clasificaron en mayores y menores de 15 años resultando 85 mayores de 15 años (42,78 por ciento) y 114 menores de 15 años (57,2 por ciento). Las muestras de sangre fueron procesadas para la prueba de Inhibición de la Hemaglutinación, usando antígeno preparado a partir de la cepa Guajira de EEV y a un pH de 6.5. Se encontró que las 57 muestras provenientes de Los Puertos de Altagracia resultaron negativa, mientras que de las 142 muestras de Sabaneta de Palmas, 17 fueron positivas (11,97 por ciento). De estas, solo 1 provenía de un menor de 15 años (5,85 por ciento) y 16 de mayores de 15 años (94,15 por ciento). Los títulos de los positivos fueron superiores a 1:160 en el 80 por ciento de los casos. Habiendo sido Sabaneta de Palmas una de las poblaciones más afectadas por la epidemia ocurrida en 1962 en el Municipio Miranda, y permaneciendo alta la positividad de los afectados con títulos bastante elevados, podría concluirse que esta población puede representar una zona enzoótica similar al Municipio Páez, donde se ha descrito una situación similar de alta positividad y elevados títulos, muchos años después de la ultima epidemia ocurrida en la zona

Allopurinol Vs. testigo en la parasitemia de la enfermedad de chagas cronica asintomatica valorada por xenodiagnosticos seriados / Allopurinol and placebo in the evaluation by serial xenodiagnosis of the parasitemia of asimptomatic chronic Chagas disease

Se estudiaron 58 pacientes en total, siendo 26 mujeres y 32 varones. El promedio de edad fue semejante a los tres grupos (29+/-5,13 anos)La parasitemia fue evaluada mediante xenodiagnosticos seriados (Xd). Cada estudio se realizo con 4 cajas de 10 ninfas del 3er estadio del T. Infestans cada una de acuerdo a la tecnica de Cerisola y Col.> El personal que realizo la lectura en todos los casos ignoraba a que grupo pertenecia el paciente estudiado e igualmente si habia recibido tratamiento o no