Análise comparativa do perfil molecular do status mutacional dos genes BRAF, NRAS, e C-Kit em melanomas esporádicos primários e metastáticos / Comparative analysis of molecular profiling of themutational status of BRAF, NRAS and C-Kit gene in primary and metastatic sporadic melanomas

RESUMO

INTRODUÇÃO: A ativação anormal da via MAP Quinase está presente em mais de 80% dos melanomas primários. As mutações têm sido documentadas em todos os subtipos de melanoma, incluindo os cutâneos, nos quais as mutações em BRAF e NRAS e KIT são mais comuns. OBJETIVOS: Identificar a frequência de mutações do gene BRAF (V600E, V600K), NRAS (códons 12, 13 e 61) e KIT (éxons 11, 13 e 17) em melanomas cutâneos primários e em suas respectivas metástases e avaliar sua relação com fatores prognósticos clínicos e anatomopatológicos para caracterizar sua relação com a progressão tumoral e seus efeitos na evolução da doença. MÉTODOS: Foi realizado um estudo de coorte. retrospectivo com 98 casos pareados de melanoma esporádico primário e metastático matriculados no Departamento de Câncer de Pele e Dermatologia do A.C.Camargo Cancer Center e atendidos de 2000 a 2013.. Para análise de BRAF e NRAS foi utilizado o método de pirosequenciamento e para KIT foi feito sequenciamento de Sanger, foram realizados também. imunoistoquímica de C-Kit e imunoistoquímica de anti-VE1. RESULTADOS: A maioria dos pacientes era caucasiana (93.9%) do sexo masculino (66.3%).. O maior grupo etário teve 60 anos ou mais (45.9%), com média de 57.36 anos (SD = 16.87). O local de maior incidência do primário foi tronco (29.6%). A maioria dos casos foi Extensivo superficial (45.9%), com ulceração (62.2%). A média de Breslow foi de 4.63 mm (SD = 3.7). A média do índice mitótico foi de 5.37 mitoses/mm² (SD = 6.08). Todos os pacientes tiveram ao menos uma metástase, sendo o linfonodo regional o local mais acometido. No fim do estudo a maioria foi estádio IV (68.4%). A média de seguimento foi de 37,29 meses (SD = 32,68) e 67.3% teve óbito por. melanoma. Para os tumores primários houve 53.1% de mutações em BRAF,10.2% em NRAS e 32.7% de mutações em KIT. Para as metástases encontrou-se 46.9% de mutações em BRAF, 9.2% de mutações em NRAS e 29.6% de mutações em KIT. CONCLUSÕES: As análises de concordância para BRAF ou NRAS mostraram-se substanciais e reprodutíveis Para KIT foi encontrada apenas ligeira concordância para o éxon 17. Análise de BRAF do tumor primário apresentou relação com localização do tumor (p = 0.03) e tipo histológico (p = 0,016). Análise de BRAF na metástase foi relacionada com idade (p = 0.033); local (p = 0.003) e tipo histológico (p = 0.011). NRAS no tumor primário apresentou relação com idade (p = 0.01) e infiltração peritumoral (p = 0,030). NRAS na metástase foi correlacionada com idade (p = 0,017) e gênero (p = 0.037). A análise de KIT nas metástases apresentou relação com ulceração (p = 0.020). Apenas um caso apresentou heterogeneidade tumoral em baixa frequência para NRAS. A imunoistoquímica de C-Kit não apresentou concordância com os achado de KIT em nenhum dos três éxons. O anticorpo anti-BRAF V600E (VE1)correlacionou-se perfeitamente aos achados encontrados nas análises por pirosequenciamento.

ABSTRACT

INTRODUCTION: The abnormal activation of MAP Kinase pathway is present in over 80% of primary melanomas. These mutations have been documented at all melanoma subtypes, especially cutaneous melanomas, in which mutations in BRAF and NRAS and KIT are more common. OBJECTIVES: To analyze the incidence of mutations in BRAF (V600E, V600K), NRAS (codons 12, 13 and 61) and KIT gene (exons 11, 13 and 17) in primary cutaneous melanomas and in their metastases and evaluate its relationship with clinical and pathological prognostic factors to characterize their relationship with tumor progression and its effects on disease progression. METHODS: We conducted a retrospective cohort study of 98 Lmatched cases of primary and metastatic melanoma registered at Department of Dermatology and Skin Cancer A.C.Camargo Cancer Center and catered from 2000 to 2013. BRAF and NRAS analysis was performed using the method of pyrosequencing and KIT was done by Sanger sequencing were also performed immunohistochemical C-Kit and anti-VE1 immunohistochemistry. RESULTS: The majority of patients were Caucasian (93.9%) and male (66.3%). The largest age group was 60 or older (45.9%) with a mean of 57.36 years (SD = 16.87). The site with the highest incidence of the primary tumor was trunk (29.6%). Most cases was superficial spreading (45.9%), with ulceration (62.2%). The mean Breslow thickness was 4.63 mm (SD = 3.7). The average mitotic index was 5.37 mitoses / mm² (SD = 6.08). All patients had at least one metastasis, and the regional lymph nodes most commonly affected. At the end of the study most of the patients were stage IV (68.4%). The average follow-up was 37.29 months (SD = 32.68) and 67.3% had died of melanoma. Primary tumors had 53.1% of mutations in BRAF, 10.2% of mutations in NRAS and 32.7% of mutations in KIT. For metastasis 46.9% had mutations in BRAF, 9.2% had mutations in NRAS and 29.6% had mutations in KIT. CONCLUSIONS: The concordance analysis for BRAF and NRAS proved to be substantial and reproducible. Regarding KIT was found only slight agreement for exon 17. BRAF primary tumor was correlated with site (p = 0.03) and histological type (p = 0.016). BRAF metastasis was correlated with age (p = 0.033); site (p = 0.003); histological type (p = 0.011). NRAS primary tumor was correlated with age (p = 0.01) and lymphocite infiltration (p = 0.030). NRAS metastasis was correlated with age (p = 0.017) and gender (p = 0.037). The KIT analysis in metastases were related to ulceration (p = 0.020). Only one case had tumor heterogeneity at low frequency for NRAS. C-Kit immunohistochemistry has not provided correlation with the KIT found in any of the three exons. The znti-BRAF V600E antibody (VE1) correlated perfectly to the findings in the analysis by pyrosequencing.