Histological evaluation of the intestine of broiler chickens: comparison of three sampling methods / Avaliação histológica do intestino de frangos de corte: comparação de três métodos de colheita

ABSTRACT

After the growth-promoting antibiotics prohibition, intestinal health became an increasing concern worldwide in poultry farming. The intestinal histological evaluation is an inexpensive technique that brings relevant information, but in poultry, the immediate process of intestinal post-mortem autolysis interferes directly on the samples quality for histological analysis hindering a precise diagnosis. This study aimed to standardize a technique for broilers' intestines sample collection and fixation for histological analysis. Seven broiler chickens received a standard diet until 23 days of age when they were euthanized. Fragments of duodenum, jejunum, and ileum were collected using three methods: intestine strips, transverse section, and Swiss roll and posteriorly fixed in 10% buffered formalin and bouin solution. Tissue samples were submitted for histological (number of villi and viable villi per field) and morphometrical (villi height, crypt depth and villicrypt ratio) evaluations and the results analyzed statistically. A significant high number of villi and viable villi per field in all regions was observed in the Swiss roll method. In the duodenum (p= 0.0066) and jejunum (p= 0.0058) an interaction between the Swiss roll method and the fixative buffered formalin was observed in the viable and number of villi per field, respectively. Regarding the morphometrical analysis significant differences were observed, in the jejunum villi height sampling by the methods Swiss roll (1,157.66 ± 148.25 µm, p= 0.0015) that showed the highest mean. Deeper crypt depths were observed in the jejunum (156.59 ± 15.68 µm, p= 0.0002) and ileum (131.13 ± 15.01 µm, p= 0.0006) collect by the Swiss roll method. An interaction between the bouin fixative was also observed in the jejunum (p= 0.0223) for this variable. Duodenum sampling by transversal section (12.68 ± 1.45 µm, p= 0.0076) was the only segment that had a significant difference for villicrypt ratio, showing the highest mean. It can be concluded that the Swiss roll technique was the best method for morphometrical evaluation of the chickens' intestines, since the highest counts of villi per field and viable villi per field were obtained, while buffered formalin was considered as the best fixative.(AU)

RESUMO

Após a proibição da utilização dos antimicrobianos promotores de crescimento, saúde intestinal se tornou uma preocupação crescente na avicultura mundialmente. A avaliação histológica intestinal é uma técnica de baixo custo que traz informações relevantes, porém nas aves, o imediato processo de autólise intestinal post-mortem interfere diretamente na qualidade da amostra para histologia dificultando um diagnóstico preciso. Este estudo objetivou a padronização de uma técnica para coleta e fixação do intestino de frangos de corte para análise histológica. Sete frangos de corte receberam uma dieta padrão até 23 dias de vida, quando foram eutanasiados. Fragmentos de duodeno, jejuno e íleo foram coletados utilizando três métodos: intestino aberto, corte transversal e rocambole, e posteriormente fixados em formalina tamponada 10% e solução de bouin. Amostras de tecidos foram submetidas a avaliações histológicas (número de vilosidades e vilosidades viáveis por campo) e morfométricas (altura de vilosidade, profundidade de cripta e relação vilosidadecripta) e os resultados analisados estatisticamente. Um significativo maior número de vilosidades e vilosidades viáveis por campo foi observado, em todos os segmentos intestinais, no método rocambole. No duodeno (p= 0,0066) e jejuno (p= 0,0058) uma interação entre o método rocambole e o fixador formalina tamponada foi observado para as variáveis vilosidades viáveis e número de vilosidades por campo, respectivamente. Referente a análise morfométrica diferenças significativas foram observadas na altura de vilosidade no jejuno amostrado pelo método rocambole (1.157,66 ± 148,25 µm, p= 0,0015) que apresentou a maior média. Criptas mais profundas foram observadas no jejuno (156,59 ± 15,68 µm, p= 0,0002) e íleo (131,13 ± 15,01 µm, p= 0,0006) coletados pelo método rocambole. Uma interação entre o fixador bouin também foi observado no jejuno (p= 0,0223) para esta variável. Amostragem do duodeno pelo método corte transversal (12,68 ± 1,45 µm, p= 0,0076) foi o único segmento que teve uma diferença significativa para relação vilosidadecripta apresentando a maior média. Pode-se concluir que o método rocambole foi o melhor para avaliação morfométrica do intestino de frangos de corte, uma vez que as maiores contagens de vilosidades e vilosidades viáveis por campo foram obtidas, enquanto formalina tamponada foi considerada o melhor fixador.(AU)