Efeitos do bisfenol A nas glândulas salivares de camundongos e em linhagem de células tumorais humanas / Effects of bisphenol A on murines salivary glands and human tumor cell lines

RESUMO

O Bisfenol A (BPA) é um produto químico desregulador endócrino com potencial papel em cânceres endócrinos. Entretanto, os efeitos do BPA sobre as glândulas salivares têm sido pouco explorados. Investigamos o impacto da exposição in vivo subcrônica ao BPA e seus efeitos in vitro nas linhagens celulares do carcinoma mucoepidermóide de glândula salivar. Camundongos machos e fêmeas foram expostos ao BPA (30.000 µg/kg/dia). Analisamos glândulas salivares sublinguais e submandibulares desses camundongos C56BL6 e camundongos fêmeas submetidos a ovariectomia. A concentração de BPA nas glândulas salivares foi avaliada por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa com armadilha de íons. A expressão dos receptores ERα e ERß foi avaliada em amostras de glândulas salivares de camundongos e linhagens celulares UM-HMC-1 e UM-HMC-3A pelo qRT-PCR, RNA mensageiro. Foram avaliadas in vitro, a viabilidade celular p63 e Ki-67, a imunoglobulina e a expressão de proteínas-alvo relacionadas às vias de sobrevivência/proliferação. O BPA prejudicou a morfologia das glândulas submandibulares e sublingual, particularmente nas fêmeas, e aumentou a expressão dos receptores de estrogênio, também acompanhado por um acúmulo significativo de BPA nestes tecidos. Ao contrário, a redução dos níveis de estrogênio pelo modelo de ovariectomia teve um leve impacto nas alterações morfológicas induzidas pela BPA. In vitro, a BPA não afetou a proliferação de células neoplásicas, mas aumentou a expressão dos receptores de p63 e estrogênio. A fosforilação ERK1/2 foi aumentada enquanto a fosforilação AKT e NF-κB foi reduzida. Os dados destacam um efeito nocivo do BPA sobre os tecidos das glândulas salivares e células tumorais. Os dependentes de estrogênio podem combinar o mecanismo de acúmulo de BPA, juntamente com a via de sinalização pró-sobrevivência e aumento da expressão da p63.

ABSTRACT

Bisphenol A (BPA) is an endocrine-disrupting chemical with potential role in endocrine cancers. However, BPA effects on the salivary glands have been barely explored. We investigated the impact of in vivo sub-chronic exposure to BPA and its in vitro effects on salivary gland mucoepidermoid carcinoma cell lines. Male and female mice were exposed to BPA (30,000 µg/kg/day). We analyzed sublingual and submandibular salivary glands from sham C56BL6 mice and that female ones underwent ovariectomy. Concentration of BPA in salivary glands was evaluated by gas chromatography coupled to ion trap mass spectrometry. Expression of ERα and ERß receptors was assessed in mouse salivary gland samples and cell lines UM-HMC-1 and UM-HMC3A by qRT-PCR, mARN. In vitro, cell viability p63 and Ki-67 immunostaining and expression of target proteins related to survival/proliferation pathways were evaluated. BPA impaired the architectural of the submandibular and sublingual glands, particularly in female mice, and increased the expression of estrogen receptors. This was accompanied by a significant accumulation of BPA in these tissues. Conversely, the reduction of estrogen levels by the ovariectomy model slightly impacted BPA-induced morphological changes. In vitro, BPA did not affect the proliferation of neoplastic cells, but increased the expression of p63 and estrogen receptors. ERK1/2 phosphorylation was increased while AKT and NF-κB phosphorylation was reduced. Data highlight a harmful effect of BPA on salivary gland tissues and tumorigenic cells. Estrogendependent may orchestrate the BPA-accumulation mechanism, along with pro-survival signaling pathway and increased p63 expression.