Técnicas para avaliação in vitro do efeito de herbicidas sobre bacillus thuringiensis berliner var. kurstaki

ABSTRACT

ABSTRACT The objective of this research was to compare techniques for the in-vitro evaluation of the effect of herbicides onBacillus thuringiensis Berliner var. kurstaki (Btk). The herbicides sulfentrazone, lactofen, imazethapyr, fenoxaprop and metribuzin were tested at two concentrations, on cells and spores, in nutrient agar (NA) solid medium (SM), and in nutrient broth (NB) liquid medium (LM), in addition to their metabolization (MT) by Btk. For cells, the fungicides in NA were tested incorporated into the medium and on filter-paper disks impregnated with the products. Evaluation was made, respectively, of the number of colony-unit formers per milliliter CFU.mL-1 and of the formation of an inhibition halo. For cells, the Btk + products + NB mixture was incubated in Erlenmeyer flasks (30 ± 2° C, 150rpm, 24h) and then the NB was diluted and inoculated onto NA, followed by evaluation of the number of CFU.mL-1. The MT and spore tests were performed in liquid medium (water for MT and NB for spores). The effects of the products varied with their concentration, the evaluation technique used and the developmental stage of the microorganism. The LM evaluation technique proved to be the best for evaluating the effect of herbicides on Btk cells, as it did not show any diffusion limitations and it also allowed for quantification. The herbicides, regardless of their concentration, were incompatible with the cells, although sulfetrazone and imazethapyr were metabolized by Btk. All herbicides were compatible with the spores, allowing for germination, but the concentration and time influenced the results.

RESUMO

RESUMO Objetivou-se comparar técnicas para a avaliação in vitro do efeito de herbicidas sobre Bacillus thuringiensis Berliner var. kurstaki (Btk). Foram testados os herbicidas sulfentrazone, lactofen, imazethapyr, fenoxaprop e metribuzin em duas concentrações, sobre células e esporos, em meio ágar nutriente sólido (MS) e caldo nutriente (CN) - líquido (ML), além da metabolização (MT) de tais produtos por Btk. Para células em MS, os herbicidas foram testados incorporados ao meio e em discos de papel-filtro impregnados nos produtos. Avaliou-se, respectivamente, as unidades formadoras de colônia por mililitro (UFC/mL) e a formação de halo de inibição. Para células, a mistura Btk + produtos + CN foi incubada em frascos erlemmeyer (30 ± 2° C, 150 rpm, 24h) e, em seguida, a mistura foi diluída e inoculada em MS, avaliando-se o número de UFC/mL. Os testes de MT e esporos foram realizados em líquido (água para MT e CN para esporos). O efeito dos produtos variou conforme a concentração utilizada, técnica de avaliação e a fase/estágio do microrganismo, sendo a técnica de avaliação em ML a mais indicada para a avaliação do efeito dos herbicidas sobre células de Btk, pois não apresenta limitações para difusão e permite quantificação. Os herbicidas, independentemente da concentração, foram incompatíveis para a célula, porém sulfetrazone e imazethapyr foram metabolizados por Btk. Todos herbicidas foram compatíveis com esporos, possibilitando a germinação, porém a concentração e tempo influenciaram nos resultados.