Characterization of Coagulase-Negative Staphylococci and pheno-genotypic beta lactam resistance evaluation in samples from bovine Intramammary infection / Caracterização de Staphylococcus coagulase negativa e avaliação fenogenotípica da resistência aos beta-lactâmicos em amostras oriundas de infecção intra-mamária em bovinos

ABSTRACT

This study aimed to identify Coagulase-Negative Staphylococci (CoNS) species isolated from bovine mastitis, through phenotypic and PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism-Polimerase Chain Reaction) methods and to compare both techniques to matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) technique. Among them, the PCR-RFLP method, using a partially conserved sequence of the groEL gene, is a promising alternative, because of its reproducibility and reliability. On the other hand, the proteomic technique MALDI-TOF MS provides an accurate and much faster diagnosis and has been increasingly employed in microbiological identification. The pheno-genotypic profiles of beta-lactam resistance were also investigated, this characterization is important, considering that the use of antimicrobials is a key element for mastitis control in dairy farms. The concordance of the phenotypic, PCR-RFLP and MALDI-TOF MS assays to identify CoNS species was 77,5% (31/40). S. chromogenes was the species most frequently isolated. Antibiotic resistance rate was relatively low, registering values of 25.5% to penicillin, 9.6% to oxacillin and 6.2% to cefoxitin. Resistance to imipenem, cephalotin and amoxicillin+clavulanate was not observed. The mecA gene and its variant were detected in 7.6% and 4,1% of the isolates respectively. The blaZ gene was found in 43.2% of the strains resistant to penicillin.(AU)

RESUMO

Este estudo teve como objetivo identificar isolados de Staphylococcus coagulase-negativa (SCN) isolados de mastite bovina, por meio de métodos fenotípicos e PCR-RFLP (reação em cadeia de polimerase - polimorfismo nos fragmentos de restrição), e compará-los com a técnica de tempo de voo de ionização/desorção por laser assistida por matriz de espectrofotometria de massa (MALDI-TOF MS). O método de PCR-RFLP, que utiliza uma parte conservada da sequência do gene groEL, é uma alternativa promissora, por ser reprodutível e confiável. Por outro lado, a técnica proteômica MALDI-TOF MS permite uma acurácia e um diagnóstico muito mais rápidos e tem sido cada vez mais empregada na identificação microbiológica. Os perfis fenogenotípicos de resistência aos beta-lactâmicos também foram investigados. Essa caracterização é importante, considerando-se que os antimicrobianos são os elementos-chave para o controle da mastite na produção leiteira. A concordância entre os testes fenotípicos, PCR-RFLP E MALDI-TOF MS na identificação foi de 77,5% (31/40). S. chromogenes foi a espécie mais frequentemente isolada. A resistência antimicrobiana foi relativamente baixa, apresentando valores de 25,5% para penicilina, 9,6% para oxacilina e 6,2% para cefoxitina. Resistência ao imipenem, à cefalotina e à amoxacilina + ácido clavulâncico não foi observada. O gene mecA e sua variante foram detectados em 7,6% e 4,1% dos isolados, respectivamente. O gene blaZ foi encontrado em 43,2% dos isolados resistentes à penicilina.(AU)