Caracterização de polimorfismos do gene PTGS2 na população brasileira e avaliação quanto ao risco de desenvolvimento de câncer de mama

RESUMO

A enzima inflamatória ciclooxigenase-2 (COX-2) encontra-se com alta expressão em diversos tipos de câncer e está associada à progressão, potencial de invasão e metástase. A COX-2 é codificada pelo gene PTGS2, que é polimórfico e apresenta variações na região promotora (RP) e na região 3’-não traduzida (3´-UTR). Tais variantes podem contribuir para aumentar a transcrição ou a estabilidade do RNAm, favorecendo um efeito pró-inflamatório e podendo aumentar o risco de desenvolvimento de câncer. A freqüência de polimorfismos em PTGS2 varia entre grupos étnicos e, até o momento, não há informações quanto à distribuição genotípica em brasileiros saudáveis ou com câncer. Este trabalho teve como objetivo geral a caracterização de variações no gene PTGS2 em brasileiros, a fim de avaliar se tais variações podem afetar o risco de desenvolvimento de câncer de mama. O protocolo utilizado foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa do INCA e todos os participantes assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. A etapa de rastreamento de polimorfismos foi realizada em sete fragmentos da região promotora e em três da região 3’-UTR, com os métodos de dHPLC ou PCR-RFLP. Nós recrutamos 282 voluntários sadios com o objetivo de caracterizar as freqüências alélicas e as distribuições genotípicas e avaliar as possíveis diferenças entre sexo e cor de pele. Foram identificados nove polimorfismos já descritos em outras populações, com as seguintes freqüências alélicas -1290AG (0,22), -1195AG (0,15), - 1131GA (0,007), -765GC (0,32), -604TC (0,015), -163CG (0,02) e -62CG(0,007), 8473TC (0,22) e 9850AG (0,01). Todas as distribuições genotípicas estavam em equilíbrio de Hardy-Weinberg (Eq-HW) e não houve diferenças em relação ao sexo. O polimorfismo 8473TC foi o único que apresentou diferença na distribuição genotípica em função da cor de pele (P = 0,034), sendo menos freqüente em brancos do que em pardos ou pretos. Os polimorfismos com freqüência maior que 10% foram selecionados para o estudo caso-controle em câncer de mama que envolveu 131 voluntárias sadias e 216 pacientes. As freqüências alélicas encontradas para as variações -1290AG, -1195AG, -765GC e 8473TC foram, respectivamente, de 0,16 (IC95% 0,11-0,21), 0,13 (IC95% 0,09- 0,18), 0,31 (IC95% 0,25-0,37), 0,24 (IC95% 0,18-0,30) em voluntárias e 0,17 (IC95% 0,13-0,20), 0,1 (IC95% 0,07-0,13), 0,31 (IC95% 0,26-0,35) e 0,31 (IC95% 0,26-0,35) em pacientes. Nós encontramos uma relação significativa ente o polimorfismo 8473TC e o risco para câncer de mama, com uma odds ratio (OR) de 1,73 (IC95% 1,08-2,77; P = 0,024) para a população total do estudo caso-controle e OR de 2,54 (IC95% 1,21-5,32; P = 0,017) apenas entre mulheres brancas. Além dos polimorfismos de PTGS2 outros fatores de risco para câncer de mama, como idade, tabagismo e histórico familiar de câncer foram avaliados...

ABSTRACT

The inflammatory enzyme ciclooxigenase-2 (COX-2) is over expressed in several types of cancer and its presence is associated with progression, invasive potential and metastasis. The gene encoding human COX-2 (PTGS2) is polymorphic and many variants have been described in the promoter region and in the 3’-untranslated (3’-UTR) region. These polymorphisms may affect gene transcription or RNAm stability, and thereby favor the synthesis of COX-2 and a pro-inflammatory effect, which might increase the risk of cancer. The frequency of PTGS2 polymorphisms varies between ethnic groups and, until now, there have been no reports about its distribution in Brazilians. The objective of our study was to characterize PTGS2 polymorphisms occurring in the Brazilian population in order to evaluate the role of selected variants as risk factors for breast cancer. The protocol was approved by the local ethics committee and all participants signed a consent form. The screening of PTGS2 polymorphisms was performed in seven fragments of the promoter region and in three fragments in the 3'–UTR region by dHPLC or PCR-RFLP. We recruited 282 healthy volunteers in order to characterize allelic frequencies and genotypic distributions and to evaluate possible differences according to gender or skin color. We identified nine polymorphisms with the following allelic frequencies -1290AG (0.22), - 1195AG (0.15), -1131GA (0.007), -765GC (0.32), -604TC (0.015), -163CG (0.02), -62CG (0.007), 8473TC (0.22) and 9850AG (0.01). All genotypic distributions followed Hardy-Weinberg equilibrium and no differences were observed in relation to gender. The 8473TC polymorphism was the only one which showed different genotypic distributions in Brazilian color groups (P = 0.034), being less frequent in whites that in intermediate or black volunteers. The polymorphisms with minor allele frequencies higher than 0.10 were selected for the case-control study in breast cancer, which involved 131 healthy women and 216 patients. The frequencies of the variant alleles -1290G, -1195G, -765C and 8473C were respectively 0.16 (CI95% 0.11-0.21), 0.13 (CI95% 0.09-0.18), 0.31 (CI95% 0.25-0.37) and 0.24 (CI95% 0.18-0.30) among healthy controls and 0.17 (CI95% 0.13-0.20), 0.10 (CI95% 0.07-0.13), 0.31 (CI95% 0.26-0.35) and 0.31 (CI95% 0.26-0.35) among patients. We found a significant association between 8473TC polymorphism and breast cancer risk, with an odds ratio (OR) of 1.73 (CI95% 1.08 - 2.77; P = 0.024) in the general study population and an OR of 2.54 (CI95% 1.21- 5.32; P = 0.017) among white women. Besides the PTGS2 polymophisms, we evaluated the contribution of other possible risk factors for breast cancer, namely age, smoking and family history of cancer. We found significant association only for age (OR = 1,65; CI95% 1,07-2,54). The results suggest that the polymorphism 8473TC located in the 3‘-UTR region of PTGS2 gene may be a risk factor for development of breast cancer in Brazilian women.