Propuesta de un modelo experimental in vitro para evaluar alteraciones morfológicas de eritrocitos expuestos a NaOCl 5.25% / Proposal for experimental in vitro model to assess morphological alterations in erythrocytes exposed to 5.25% NaOCl

RESUMEN

Introducción: El hipoclorito de sodio (NaOCl) es el agente químico más utilizado como solución irrigadora durante la terapia endodóntica. Es altamente tóxico cuando se extruye a tejido periapicales. En endodoncia la hemolisis causada por el NaOCl ha quedado demostrada utilizando diferentes modelos, sin embargo poca o ninguna evidencia se tiene de las alteraciones morfológicas en la membrana celular de los eritrocitos. Objetivo: Proponer un modelo experimental que permita evaluar las alteraciones morfológicas que sufren los eritrocitos cuando son expuestos a NaOCl utilizado en la práctica odontológica mediante microscopia electrónica de barrido de alta resolución (MEB). Material y métodos: Se obtuvieron 20 mL de sangre periférica y se depositaron en tubos con anticoagulante EDTA (ácido etilendiaminotetraacético). Se realizaron lavados con solución amortiguadora de fosfatos (solución Evan's). Se prepararon diferentes diluciones de la muestra de eritrocitos (11, 12, 14, 18 y 116). Se obtuvieron 100 μL de cada una de estas diluciones y se confrontaron con 100 μL de NaOCl 5.25% de uso odontológico (Viarzoni-T, Medental®). Se tomaron 0.5 μL de estas muestras para depositarse en un portamuestra de aleación Zn-Cu, el cual se sometió a un proceso de metalización de baño de iones de Cu por el método antiguo llamado Sputtering. Obteniendo microfotografías por MEB. Resultados: Se lograron observar eritrocitos con alteración de tipo anisocitosis y poiquilocitosis (estomatocitos, eliptocitos, esferocitos y discocitos). También se observaron algunas características estructurales de cristales de NaOCl. Conclusión: Este modelo experimental permitió evaluar los cambios morfológicos que sufren los eritrocitos cuando son expuestos a NaOCl 5.25%.

ABSTRACT

Introduction: Sodium hypochlorite (NaOCl) is the chemical agent most frequently used as irrigation solution during endodontic therapy. When extruded to periapical tissue, it is highly toxic. In endodontics, hemolysis caused by NaCOl has been proven using different models, nevertheless, there is little or no evidence of morphological alterations in the cellular membrane of erythrocytes. Objective: To propose an experimental model which might allow to assess morphological alterations suffered by erythrocytes when they are exposed to NaOCl used in the dental practice by means of high resolution scanning electron microscopy (SEM). Materials and methods: In the present study, 20 mL of peripheral blood were obtained and deposited in tubes with EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) anticoagulant. Rinses were conducted with a phosphate buffer solution (Evan's solution). Several dilutions of the erythrocyte sample were prepared (11, 12, 14, 18 and 116); 100 μL of each of these dilutions was obtained to be then confronted with 100 μL of dental use 5.25% NaOCl (Viarzoni-T, Medental®); 0.5 μL of these samples were taken to then be deposited in a sample holder made of Zn-Cu alloy which was subjected to a process of Cu ion metallization bath, following the old Spluttering method. Microphotographs were obtained with SEM. Results: Erythrocytes with alteration type anisocytosis and poikilocytosis (stomatocytes, elliptocytes and discocytes) were observed. Some structural characteristics of NaOCl crystals were equally observed. Conclusion: This experimental model allowed assessment of morphological changes experienced by erythrocytes when exposed to 5.25% NaOCl.