Detecção de papilomavírus bovino (BPV) em amostras de caprinos provenientes do estado do Pernambuco

ABSTRACT

Papillomaviruses (PVs) represent a diverse group of viruses, with approximately 55- 60nm in diameter and a genome composed of circular double-stranded DNA, ranging from 7,000bp to 8,600bp. Although most types have been described in humans, PVs have been identified in other hosts, particularly domestic species, birds, and reptiles. Generally, PVs are species-specific, restricted to a host species. However, bovine papillomavirus (BPV) stands out for infecting different species beyond its original host. This study aimed to perform the molecular diagnosis of PVs from skin lesion samples of goats (Capra aegagrus hircus). Lesions from seven goats from the state of Pernambuco were collected. The clinical material underwent DNA extraction, PCR reactions using the FAP 59/64 primer set and agarose gel electrophoresis. The corresponding band was purified and cloned into a bacterial vector using competent cells (E. coli, strain DH5α). After colony selection, recombinant plasmids were extracted, purified, and subjected to digestion to check for the presence of the insert. Subsequently, plasmid samples were sent to the Human Genome Studies Center at the University of São Paulo for DNA sequencing. The generated sequences were compared to a public database (NCBI) for identification. So far, four viral sequences have been identified in DNA samples corresponding to three animals, including two putative new types of BPV, in addition to co-infection with BPV5 and BPV13 types. To the best of our knowledge, this work reports the first description of bovine papillomavirus (BPV) sequences in goats.

RESUMO

Os papilomavírus (PVs) representam um grupo diverso de vírus, com cerca de 55- 60nm de diâmetro e genoma composto por DNA circular e fita dupla, variando de 7000 pb a 8600 pb. Embora a maioria dos tipos já descritos seja encontrada em seres humanos, PVs já foram identificados em outros hospedeiros, com destaque para as espécies domésticas, aves e répteis. De maneira geral, os PVs são espécie- específicos, sendo restritos a uma espécie de hospedeiro. Entretanto, o papilomavírus bovino (BPV) tem se destacado por infectar diferentes espécies, para além de seu hospedeiro original. O presente estudo teve como objetivo realizar o diagnóstico molecular de PVs a partir de amostras de lesões cutâneas de caprinos (Capra aegagrus hircus). Foram coletadas lesões de sete caprinos, provenientes do Estado de Pernambuco. O material clínico foi submetido à extração do DNA e reações de PCR com a utilização do conjunto de iniciadores FAP 59/64. O material amplificado foi submetido à eletroforese em gel de agarose e a banda equivalente foi purificada e clonada em vetor bacteriano, utilizando-se células competentes (E. coli, linhagem DH5α). A partir da seleção das colônias, foi realizada a extração dos plasmídeos recombinantes, sendo purificados e submetidos à digestão para checagem da presença do inserto. Após, amostras dos plasmídeos foram encaminhadas para o Centro de Estudos do Genoma Humano da Universidade de São Paulo para a realização do sequenciamento de DNA. As sequências geradas foram comparadas em banco de dados público (NCBI) para a sua identificação. Até o presente momento, foram identificadas quatro sequências virais em amostras de DNA correspondentes a três animais, incluindo dois supostos novos tipos de BPV, além da coinfecção pelos tipos BPV5 e BPV13. Até onde estamos cientes, este trabalho relata a primeira descrição de sequências do papilomavírus bovinos (BPV) em caprinos.