Avaliação do Teste de Ativação de Monócitos (MAT) para a detecção de pirógenos em Vacina Zika Inativada experimental

RESUMO

As vacinas, bem como todas as formulações injetáveis para uso humano, devem ser seguras e livres de pirogênio. Os pirógenos podem ser descritos como substâncias que, quando reconhecidas pelo sistema imune inato, desencadeiam respostas inflamatórias que resultam na liberação de citocinas, como IL-1ß e IL-6, e podem ocasionar diversos sintomas, entre eles a febre. Com o intuito de substituir o uso de coelhos, esse estudo buscou verificar a eficiência do Teste de Ativação de Monócitos (MAT) para sua validação analítica na detecção de pirógenos, lipopolissacarídeos (LPS) e ácido lipoteicóico (LTA), no concentrado da Vacina Zika Inativada através da quantificação do mediador inflamatório IL-1ß. Para isso, foi utilizado o PyroDetect System (Merck Millipore), seguindo as orientações do fabricante. O concentrado da vacina Zika foi testado puro e em diluições de 1/10, 1/20 e 1/40, com e sem a contaminação por LPS ou LTA. As amostras foram incubadas com sangue humano criopreservado (Cryoblood® – Kit PyroDetect) por 16-18h a 37oC e, em seguida, foi realizado um ensaio de ELISA para quantificar os níveis de IL-1ß liberados no sobrenadante. Os resultados dos testes indicaram baixos níveis de detecção de IL-1ß nas diluições testadas, inclusive nas amostras que foram contaminadas por endotoxina. Esses resultados sugerem que a vacina Zika possa ter algum componente que cause interferência no teste. Além disso, verificou-se menor liberação de IL-1ß nos ensaios do que o esperado, o que poderia levar a resultados superestimados da concentração de endotoxina nas amostras. Para determinar a exatidão do teste, foram calculadas as taxas de recuperação de endotoxina para cada ensaio, e estas deveriam estar em uma faixa entre 80 e 120% para a validação. No entanto, os resultados demonstraram taxas de recuperação fora da faixa esperada. Sendo assim, concluímos que os parâmetros de exatidão, precisão e reprodutibilidade não foram atingidos para a Vacina Zika nas condições testadas.