Restauración en el Inmunoblotting de proteínas de / Neisseria meningitidis dañadas por calor y agentes / reductores / Restoration in Immunoblotting of Neisseria meningitidis proteins denatured by reducing agents and heat

ABSTRACT

En este trabajo se utilizaron cinco detergentes para restaurar las proteínas de membrana externas (PME) del meningococo dañadas por el efecto del calor y de agentes reductores utilizados en el Inmunoblotting. La acción de los detergentes fue evaluada en la solución de lavado, en el diluente de la muestra y del conjugado. Las bandas de proteínas, reconocidas por la IgG del suero, fueron identificadas usando un conjugado anti IgGhumana peroxidasa. Los antígenos reconocidos por el control positivo se corresponden con las proteínas P1, P3,P4 y P5 atendiendo a su peso molecular. Además, fueron reconocidas bandas de 80, 70, 24 kDa y otra con pesomayor a 150 kDa. En general el reconocimiento de todas las PME, excepto esta última de alto peso molecular(APM), se vieron favorecidas con la utilización del Tween 20, con el que se logró un incremento del número y la intensidad de las bandas así como la disminución de los fondos con respecto al resto de detergentes evaluados(Empigen BB, Triton X-100, Nonidet NP-40 y CHAPS). El reconocimiento de la proteína de APM (>150 kDa) se vio afectado por la presencia de detergente como el Tween 20 y Empigen BB. Los lavados con Tween 20 constituyeron los pasos más importantes en la renaturalización de los sitios de unión de la IgG a las PME(AU)