Utilización del ácido caprílico en la obtención de inmunoglobulina G de caballo antitoxina tetánica / Using the caprylic acid in obtaining the horse immunoglobulin anti tetanus toxin

RESUMEN

Las inmunoglobulinas de caballo antitoxina tetánica purificadas, con altas concentración de anticuerpos y actividad biológica, se utilizan como sueros heterólogosy sueros estándar para la producción de la vacuna correspondiente. No obstante, la selección de agentes precipitantes para la purificación de las mismas constituye un problema en términos de pureza, rendimiento y de economía, aún por resolver. En este estudio se describieron las condiciones para el fraccionamiento de plasma antitoxina tetánica de caballo mediante precipitación con ácido caprílico. A las muestras se les añadió solución de ácido acético/acetatode sodio para alcanzar fuerzas iónicas de 0,05 a 0,4 moles/L y ácido caprílico para obtener concentracionesde 1 al 7 por ciento (v/v), con agitación vigorosa. Las proteínas no-inmunoglobulinas precipitaron en estas condiciones, mientras que las inmunoglobulinas permanecieron en el sobrenadante. Se seleccionaron las mejores condiciones de fraccionamiento y se comparó esta metodología con la precipitación con sulfato de amonio. Los mejores resultados se obtuvieron cuando se añadió el ácido caprílico al plasma hasta alcanzar una concentración final de 3 por ciento, a una fuerza iónica de 0,2 moles/L y un pH ajustado a 4,5. La IgG antitoxina fraccionada con ácido caprílico se obtuvo con una media de recuperación de proteína de91-95 por ciento, la concentración de proteínas fue de 27,1-29,3 mg/mL y la relación albúmina/inmunoglobulina de 0,019-0,021. Se alcanzó una pureza entre 91-95 por ciento y la actividad de antitoxina osciló entre el 93-96 por ciento(AU)

ABSTRACT

Purified horse anti tetanus toxin immunoglobulins with high antibody concentration and biological activity,are used as heterologous sera and standard serum for corresponding vaccine. However, the selection ofprecipitating agents for the purification of them is a problem in terms of purity, yield and economy, which stillremains to be solved. In this study, a procedure to fractionation horse plasma anti tetanus toxin by Caprylicacid precipitation is described. A solution of acetic acid/sodium acetate was added to the samples to achievedifferent ionic strengths, 0.05-0.4 moles/L, and caprylic acid was added to each volume to reach finalconcentrations from 1 to 7 percent (v / v), with vigorous stirring for 60 min. Non-immunoglobulin proteinsprecipitated under these conditions, while immunoglobulins remained in the supernatant, which was thendiafiltered to remove caprylic acid and concentrate inmunoglobulins. This methodology was compared tothat based on ammonium sulfate fractionation. The best results were given when caprylic acid was added toplasma, until a final caprylic acid concentration of 3 percent was reached, at ionic strength 0.2 moles/L and pH adjusted to 4.5. The IgG recovery was 91-95 percent by using the caprylic acid method. It was achieved a protein concentration of 27.1-29.3 mg/mL and an albumin/immunoglobulins ratio of 0.019-0.021. The purity was 91-95 percent and the anti-tetanus toxin activity recovery of 93-96 percent (AU)