Efeitos da timulina 5cH na evolução do granuloma e da diferenciação de células B1: um modelo experimental para entender seus mecanismos biológicos / Effects of thymulin 5cH in granuloma evolution and B1 cell differentiation: an experimental model to understand its biological mechanisms

RESUMO

Em estudos prévios, foi verificado que a timulina (um hormônio tímico), quando preparada em potências homeopáticas 5cH, tem a propriedade de melhorar a performance produtiva de frangos infectados com reovirus, bem como modular o desenvolvimento do tumor de Ehrlich e de lesões granulomatosas em camundongos por mecanismos imunomediados. O objetivo deste trabalho foi estudar os mecanismos imunonodulatórios da timulina 5cH em um modelo de granuloma experimental, pela injeção subcutânea de BCG em camundongos, focando o envolvimento das células B1 e do zinco no processo. Três grupos de camundongos Balb/c machos (grupo A tratado com timulina 5cH, grupo B tratado com timulina 5cH incubada com Chelex ® - um quelante de zinco ? e grupo C, controle, tratado com veículo) foram inoculados com BCG no coxim plantar esquerdo e o granuloma subcutâneo e baço foram colhidos para análise histomorfométrica, após 7, 14 e 21 dias. Colorações de Ziehl-Neelsen, hematoxilina eosina e azul da Prússia foram também utilizadas. A citometria de fluxo também foi usada nos mesmos tempos para caracterizar e quantificar células peritoneais. Células positivas para CD11b (fagócitos ativados, células B1), CD 19 (B1 e B2), CD23 (negativas em B1, positivas em B2) e CD5 (B1a) foram analisadas em um aparelho FACS Calibur (BD). A análise estatística foi Kruskal-Wallis/Dunn para avaliações não paramétricas e ANOVA/Tuckey-Krammer para avaliações paramétricas. O método X2 foi usado para avaliar a proporção entre células na citometria. Valores de p?0.05 foram considerados estatisticamente significantes. Camundongos tratados com timulina 5cH apresentaram alta atividade de macrófagos e aumento na área folicular esplênica após 7 dias da inoculação do BCG. O aumento do tamanho macroscópico da lesão e a redução da infecção local foram vistos após 21 dias. Nesse período, a citometria demonstrou aumento na proporção de fagócitos derivados de células B1 peritoneais em camundongos tratados com timulina 5cH, independentemente da incubação ou não com Chelex®, a qual bloqueou apenas os efeitos da timulina sobre células B2 no peritôneo e reduziu significativamente os níveis de manganês na preparação medicamentosa. Conclui-se que a timulina 5cH modula o granuloma induzido por BCG através de mais de um mecanismo, especialmente da diferenciação de células B1 peritoneais em fagócitos.(AU)

ABSTRACT

In previous studies, we found that thymulin (a thymic hormone), when prepared in homeopathic 5cH potency, had the property to improve the productive performance of broiler chickens infected with reovirus, as well as modulate the development of Ehrlich tumor and granuloma inflammatory lesions in mice by immune-mediated mechanisms. The aim of the present work was to study the immunomodulatory mechanisms of thymulin 5cH in a granuloma experimental model, by subcutaneous inoculation of BCG in mice, focusing the B-1 cells and zinc involvement in this process. Three groups of male Balb/c SPF mice (group A treated with thymulin 5cH, group B treated with thymulin 5cH incubated in Chelex ® - a zinc chelant - and group C, control, treated with vehicle) were inoculated with BCG in the left footpad and subcutaneous granuloma and spleen were harvested for histomorphometry analysis, after 7, 14 and 21 days. Ziehl-Neelsen, HE and Prussia Blue staining methods were used. Flow cytometry was also used in the same times to characterize and quantify peritoneal cells. Positive cells for CD11b (activated phagocytes, B-1 cells), CD19 (B-1 and B-2 cells), CD23 (negative B-1 cells, positive B2 cells) and CD5 (B-1a cells) were analyzed in a FACS Calibur (BD) device. Statistical analysis was performed using Kruskal - Wallis / Dunn for nonparametric evaluations and ANOVA / Tuckey-Krammer for the parametric ones. The X² method was used to evaluate the cell count in flow cytometry. P values ? 0.05 were considered statistically significant. Mice treated with thymulin 5cH presented higher macrophage activity and increase in the follicular area were seen in spleen after 7 days. Increase in gross lesion diameter and decrease in local BCG infection were seen after 21 days. At this time, the flow cytometry demonstrated the increase in peritoneal phagocytes derived from B-1 cells in thymulin 5cH treated mice, independently of Chelex ® incubation. The incubation of thymulin 5cH with Chelex ® blocked its effects only upon the number of B2 cells in the peritoneum and reduces Mn levels in the medicine solution. We conclude that thymulin 5CH modulates the BCG-induced granuloma through more than one mechanism, especially by peritoneal B1 cell differentiation into phagocytes.(AU)