Functional and phenotypic characterization of CD8+CD28+ and CD28­ T cells in atopic individuals sensitized to Dermatophagoides pteronyssinus / Caracterización funcional y fenotípica de las células CD8+CD28+ y CD28¯ en individuos atópicos sensibilizados a Dermatophagoides pteroyissinus

ABSTRACT

Background: CD8+ T suppressor cells may play a role in immunoregulation. Recent studies have characterized this population by the lack of the CD28 molecule. These CD8+CD28– T cells differ phenotypically and functionally from CD8 + CD28 + T cells. Little is known about CD8 + CD28– cells in atopy. Our aim was to analyze the phenotype and functional properties of CD8 + CD28–T cells in atopic and non-atopic individuals. Methods: Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were obtained after density gradient centrifugation. CD8 + CD28– and CD8 + CD28 + T cells were isolated using immunomagnetic beads. Relative percentages of these cells and expression of several phenotypic markers were analyzed by flow cytometry. Proliferation was assessed by thymidine incorporation in isolated populations and in co-cultures with PBMC using Dermatophagoides pteronyssinusas stimulus. Cytokine synthesis was evaluated in culture supernatants by cytometric bead array. Results:The relative percentages of CD8+CD28– T cells and their phenotypic expression in atopic and non-atopic volunteers were not significantly different. However, CD8 + CD28– T cells showed greater proliferation than did CD8+CD28+ T cells when stimulated with D. pteronyssinus, although cytokine synthesis patterns were similar. CD8+CD28– co-cultures with PBMC showed greater proliferation than CD8+CD28+ T cell co-cultures, but cytokine synthesis patterns were not different. Conclusions: Our data confirm phenotypic and functional differences between CD28+ and CD28– T cells, irrespective of atopic status. Purified human CD8+CD28– T cells, freshly isolated from peripheral blood, do not have suppressor properties on allergen-specific proliferation or on cytokine synthesis in PBMC

RESUMEN

Antecedentes Células T CD8+ supresoras pueden tener un papel en inmunoregulación. Estudios recientes han demonstrado la falta de expresión de la molécula CD28 en esta población. Estas células T CD28− son diferentes fenotipica y funcionalmente de las células T CD28+. Se sabe muy poco de las células T CD8+CD28− en atopia. Nuestro objectivo ha sido analisar el fenótipo y función de células T CD8+CD28− en individuos atópicos y no atópicos. Métodos: Células mononucleares de la sangre periférica (CMSP) fueron obtenidas por gradiente de densidad. Células T CD8+CD28− y CD28+ fueran aisladas con cuentas inmunomagnéticas. Sus porcentages relativos y la expresión de varios marcadores fenotípicos fueran analizados con citometria de flujo. La proliferación fue estudiada por incorporación de timidina en las poblaciones aisladas y en co-culturas con CMSP, con Der p como estímulo. La sintesis de citocinas fue evaluada en los sobrenadantes de culturas por CBA. Resultados: Los porcentages relativos de células T CD8+CD28− y su expresión fenotípica no fueran distinctas entre atópicos y no atópicos. Las células T CD8+CD28− proliferaran mas que las células CD28+ quando estimuladas con Der p, aunque los padrones de síntesis de citocinas fueran similares. Co-culturas de células T CD8+CD28− con CMSP proliferaran mas que las co-culturas de células T CD8+CD28+ con las mismas células, pero los padrones de sintesis de citocinas no fueran diferentes. Conclusiones: Nuestros resultados confirman diferencias fenotípicas y funcionales entre células T CD28+ y CD28−, independientemente de la atopia. Células T CD8+CD28− humanas recientemente aisladas de la sangre periférica, no presentan propiedades supresoras sobre la proliferación o la sintesis de citocinas induzidas por alergenos en CMSP