Validation of Total and Specific IgE Measurements in Induced Sputum

RESUMEN

Durante los últimos años, se están analizando de forma exhaustiva los componentes solubles del esputo inducido, no obstante pocos estudios analizan la IgE total y específica y ninguno de ellos ha intentado validar la técnica. El objetivo de este estudio fue validar la cuantificación de IgE total y específica en el sobrenadante del esputo inducido y evaluar la influencia del procesamiento del mismo con dithiothreitol (DTT). La IgE total y específica fueron determinadas mediante el fluoroenzymoinmunoensayo ImmunoCAP (Phadia ThermoFisher Scientific). Para el proceso de validación utilizamos experimentos de adición de células del esputo con IgE total y específica (frente a Dermatophagoides pteronyssinus y Phleum pratense) en un rango de concentraciones de acuerdo a las recomendaciones de la ATS/ERS. Para las comparaciones intragrupo se utilizó el test de Wilcoxon y el coeficiente de correlación intraclase para evaluar el grado de acuerdo entre ambas mediciones. Fueron considerados como significativos valores de p <0.05. En cuanto a los resultados obtenidos en las muestras de esputo procedentes de 18 pacientes (13 con enfermedad pulmonar intersticial, 2 con asma alérgica y 3 controles sanos), 12 varones, con una edad media de 45.6 ± SD 15.8 años, se obtuvo una media de IgE total de 5.4 (P25-754.0-6.0) kU/L. La IgE específica frente a Dermatophagoides pteronyssinus y Phleum pratense fueron inferiores a 0.35 kUA/L en todas las muestras. Las cifras de recuperación de la IgE total y específica estaba por encima del 80% con un amplio rango de valores. No se hallaron diferencias significativas entre la cuantificación de IgE total y específica con PBS o con DTT, con un buen coeficiente de correlación intraclase (0.81; p=0.01). En conclusión, la cuantificación de IgE total y específica en esputo inducido utilizando un imnunoensayo comercializado es válido y presenta una alta dispersión de rangos de niveles de IgE (AU)

ABSTRACT

Background and objectives: Soluble components are increasingly analyzed in induced sputum supernatant. However, only a few studies have measured total or specific immunoglobulin (Ig) E in sputum and none have attempted to validate it. We aim to validate laboratory measurements of total and specific IgE in induced sputum supernatant and to evaluate the influence of sputum processing with dithiothreitol (DTT) on IgE measurements. Methods: Total and specific IgE were measured by ImmunoCAP and the process was validated using sputum spiking experiments with total and specific IgE (to Dermatophagoides pteronyssinus and Phleum pratense) over a range of concentrations according to international recommendations. The Wilcoxon signed-ranks test was used for within-group comparisons and intraclass correlation coefficients were used to evaluate agreement between measurements. Two-tailed P values lower than .05 were considered significant. Results: Samples from 18 patients (13 with interstitial lung disease, 2 with allergic asthma, and 3 healthy controls; 12 men; mean [SD] age, 45.6 [15.8] years) were evaluated. Median total IgE was 5.4 kU/L (interquartile range, 4.0-6.0 kU/L). Specific IgE levels to D pteronyssinus and P pratense were below 0.35 kUA/L in all samples. Recovery rates were above 80% for total and specific IgE over a wide range of values. No differences were found in total IgE measurements of sputum dispersed with DTT or phosphate-buffered saline, with a good intraclass correlation coefficient between both measurements (0.81, P=.01). Conclusions: Total and specific IgE measurements performed in induced sputum with a commercially available immunoassay are valid over a wide range of IgE levels (AU)