Validación de la técnica de dihidrorodamina 123 para el diagnóstico de la enfermedad granulomatosa crónica en Colombia / Validation of the dyhidrorhodamine test for the diagnosis of chronic granulomatous disease in Colombia

RESUMEN

Introducción: La enfermedad granulomatosa crónica (EGC) es una inmunodeficiencia primaria por defectos en la explosión respiratoria de los fagocitos cuyas manifestaciones clínicas más frecuentes son los granulomas y las infecciones recurrentes por gérmenes encapsulados. Objetivo Estandarizar en Colombia la técnica de dihidrorodamina (DHR) para diagnóstico de EGC con el propósito de evaluar la explosión respiratoria en neutrófilos y monocitos de sangre periférica (SP) humana después de ser activados in vitro. Métodos Los leucocitos de SP de 10 individuos sanos fueron activados utilizando varias concentraciones de PMA, evaluando la explosión respiratoria por citometría de flujo. Adicionalmente, se obtuvieron los patrones de oxidación de la DHR de estas células en EGC ligada al X, portadoras de este defecto, y en EGC autosómica recesiva. Resultados Las mejores concentraciones de PMA para evaluar el estallido respiratorio tanto en neutrófilos como en monocitos se encontraron entre 0,2 y 5 μg/ml. Se establecieron parámetros de normalidad de la prueba en neutrófilos en nuestra población. Adicionalmente, los patrones de oxidación de la DHR en monocitos no siempre fueron los mismos a aquellos de los neutrófilos. Conclusiones La técnica de DHR por citometría de flujo es un método de cribado que identifica con facilidad, sensibilidad y a bajo costo los diferentes fenotipos de la EGC. Sin embargo, se deben establecer en cada laboratorio los parámetros de normalidad que permiten realizar con certeza la caracterización inicial de esta condición y evaluar diferentes tipos celulares teniendo en cuenta que la expresividad del defecto puede ser específica de ciertas poblaciones celulares (AU)

ABSTRACT

Introduction: Chronic granulomatous disease (CGD) is a primary immunodeficiency caused by defects in the respiratory burst of phagocytes. Affected patients often suffer from granulomas and recurrent infections, mainly due to encapsulated bacteria. Aim: To standardize the dihydrorhodamine test (DHR) in Colombia used for the diagnosis of CGD by evaluating the respiratory burst in human blood neutrophils and monocytes after in vitro activation. Methods: Phagocyte respiratory burst in peripheral blood samples from 10 healthy controls was evaluated by flow cytometry after leukocyte activation with several concentrations of phorbol myristate acetate (PMA). The different oxidation patterns of DHR in X-linked or autosomal recessive CGD were also obtained. Results: The most suitable concentrations of PMA for the evaluation of the respiratory burst in peripheral blood were 0.2 to 5g/ml. Reference values for this test in neutrophils from our population were established. It was shown that the oxidation patterns of DHR in monocytes were not always identical to those observed in neutrophils. Conclusion: The evaluation of DHR oxidation by flow cytometry is a screening method that easily identifies the different phenotypes of CGD, with good sensitivity and at a lower cost. However, it is crucial that every laboratory establishes its own normal range for this test, in order to achieve the accurate characterization of this condition. DHR oxidation patterns may be also evaluated in different blood cells, since cell type-specific defects have also been reported (AU)