Discordance of positive immunohistochemical results among different primary HER2 antibodies used in breast cancer: A comparison between Histofine® HER2 Kit (MONO) SV2-61γ antibody and Ventana I-VIEW PATHWAY™ HER2 4B5 antibody / Discordancia de los resultados inmunohistoquímicos positivos entre los diferentes anticuerpos primarios HER2 utilizados en el cáncer de mama: comparación entre el anticuerpo Histofine® HER2 Kit (MONO) SV2-61γ y el anticuerpo Ventana I-VIEW PATHWAY™ HER2 4B5

ABSTRACT

Introduction: Immunohistochemical (IHC) testing for human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) expression status renders variable scores among different primary antibodies. Materials and methods: We assessed HER2 expression status by IHC score using two types of kits, i.e., Roche Ventana I-VIEW PATHWAY™ HER2 using the 4B5 antibody that recognizes the intracellular domain (ICD) and Nichirei Biosciences Histofine® HER2 Kit (MONO) using the SV2-61γ antibody that recognizes the extracellular domain (ECD). In addition, we determined the presence or absence of the ECD in samples by Western blotting (WB) and examined its relationship with the IHC score. Results: Of 101 samples, 44 and 9 samples received a score of 2+/3+ by IHC with 4B5 and SV2-61γ, respectively. A verification by WB in samples with a discrepancy of IHC scores found that samples with the score of 2+/3+ with SV2-61γ showed a significantly higher protein intensity of p185HER2 with the ECD, whereas samples with a score of 2+/3+ with 4B5 but as 0/1+ with SV2-61γ showed a significantly higher protein intensity of p95HER2 without the ECD. Conclusion: The nature of primary antibodies used for IHC and the presence or absence of the ECD in samples may contribute to different positive rates between 4B5 and SV2-61γ.(AU)

RESUMEN

Introducción: Para el ensayo de inmunohistoquímica (IHC) para evaluar el estado de expresión del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2), diferentes anticuerpos primarios causan diferentes puntuaciones de IHC. Materiales y métodos: Evaluamos el estado de expresión de HER2 mediante la puntuación IHC usando dos tipos de kits, es decir, Roche Ventana I-VIEW PATHWAY™ HER2 usando el anticuerpo 4B5 que reconoce el dominio intracelular (ICD) y Nichirei Biosciences Histofine® HER2 Kit (MONO) usando el SV2-Anticuerpo 61γ que reconoce el dominio extracelular (ECD). Además, determinamos la presencia o ausencia de ECD en las muestras mediante Western Blot (WB) y examinamos su relación con la puntuación IHC. Resultados: De las 101 muestras, 44 y 9 de ellas recibieron una puntuación de 2+/3+ por IHC con 4B5 y SV2-61γ, respectivamente. Una verificación por WB en muestras con una discrepancia en las puntuaciones de IHC encontró que las muestras con una puntuación de 2+/3+ con SV2-61γ mostraron una intensidad de proteína de p185HER2 significativamente mayor con el ECD, mientras que las muestras con una puntuación de 2+/3+ con 4B5 pero como 0/1+ con SV2-61γ mostraron una intensidad de proteína significativamente mayor de p95HER2 sin ECD. Conclusión: La naturaleza de los anticuerpos primarios utilizados para IHC y la presencia o ausencia de ECD en las muestras pueden contribuir a diferentes tasas positivas por IHC entre 4B5 y SV2-61γ.(AU)