Evaluación de la inocuidad del proceso de separación espermática por citometría de flujo en el ganado porcino / Safety of boar sperm selection by fl ow cytometry

ABSTRACT

La preselección del sexo de la descendencia mediante la separación espermática por citometría de fl ujoimplica la tinción de los espermatozoides con el fl uorocromo Hoechst 33342 y el impacto sobre éstos de unláser ultravioleta, dos agentes potencialmente mutagénicos. En este trabajo se realizó un estudio de la efi cienciareproductiva obtenida tras la inseminación de cerdas nacidas a partir de espermatozoides separados y noseparados (control) con espermatozoides teñidos con Hoechst 33342 y separados por citometría de fl ujo. Asímismo, se realizo un estudio fenotípico y citogenetico de la descendencia obtenida tras estas inseminaciones.En primer lugar, se evaluó el efecto del procedimiento de separación sobre los parámetros reproductivos. Losanálisis citogenéticos se realizaron en metafases linfocitarias procedentes de lechones nacidos tras la inseminaciónde las cerdas de primera generación con espermatozoides separados y no separados (control). Para elloy tras el cultivo in vitro de sangre procedente de estos animales, se recolectaron los linfocitos por centrifugaron,se lavaron con una solución hipotónica, se fi jaron y se prepararon las extensiones en portaobjetos. El númerode intercambios de cromátidas hermanas (ICHs) y de aberraciones cromosómicas (ACs, incluyendo roturascromosómicas y cromatídicas) por célula fueron evaluadas en 50 metafases, pertenecientes al segundo ciclode replicación celular in vitro, de cada uno de los individuos analizados. Los datos se analizaron medianteANOVA. Las tasas de partos fueron de un 40% y un 81’2% (p<0.05) en cerdas de primera generación nacidasde espermatozoides separados e inseminadas, a su vez, con espermatozoides separados y no separadosrespectivamente. Para las cerdas control de esta primera generación, los porcentajes fueron de un 36% y un82’1% (p<0.05) para espermatozoides separados y no separados respectivamente. No se observaron diferenciasentre los grupos para el tamaño de camada. Independientemente del tipo de cerda inseminado, no se observóun aumento signifi cativo (p>0.05) de la frecuencia de ICHs o ACs por célula, en linfocitos pertenecientes alos lechones obtenidos tanto con espermatozoides separados como no separados (segunda generación). Losresultados indican que el proceso de separación por citometría de fl ujo no posee un efecto mutagénico sobre losespermatozoides de verraco expresado como un aumento en la incidencia de anormalidades en la descendencia obtenida en la segunda generación, así como con un incremento en la frecuencia de ICHs y ACs por célula enlinfocitos de estos individuos