Células mesenquimales y fibrocitos en sangre periférica. Condiciones de cultivo / Mesenchymal cells and fibrocytes in peripheral blood. Culture conditions

RESUMEN

Objetivos: El término fibroblast-like, célula madre de sangre periférica, engloba a las unidades formadoras de colonias fibroblásticas, los fibrocitos y las células mesenquimales. El diseño de este trabajo intenta establecer las condiciones de cultivo. Material y método: En 25 muestras de sangre venosa se aislaron células mononucleares y se sembraron en medio de cultivo McCoy’s 5A con suero bovino fetal al 20%. A los 7, 14 y 21 días se evaluó la proliferación, la confluencia y la relación células redondas/células alargadas. El día 21 se valoró la morfología, los marcadores de superficie y la actividad fagocítica. Resultados: En todos los cultivos se detectó crecimiento celular positivo para la vimentina, CD34 y NBT. La media ± desviación estándar del 36 ± 3,71% eran células alargadas (fibrocitos) y sólo en 2 casos se registraron áreas de confluencia. Conclusiones: Los métodos de cultivo descritos son adecuados para los seudofibroblastos de sangre periférica. La positividad de CD34, prueba NBT y vimentina demuestra que los seudofibroblastos tienen características comunes con la célula madre, los monocitos-macrófagos y los fibroblastos (AU)

ABSTRACT

Objectives: The fibrocytes, the mesenchymal cells and the colony forming units are included in the concept fibroblast-like, peripheral-blood circulating stem cells The aim of this work was to establish the culture conditions. Material and method: Peripheral blood mononuclear cells were isolated from 25 samples collected from the cephalic vein. These were cultured in McCoy’s 5A enriched with 20% of foetal bovine serum. The culture was read at 7, 14 and 21 days, evaluating the proliferation, confluence and the round cell/spindle cell ratio. Moreover the 21st day surface markers and phagocytic activity testing was carried out. Results: Growth was achieved in all the cases but only in two dishes were confluence areas retrieved. Spindle cells were 36 ± 3.71% (mean ± SD). All the cells showed intense signal against vimentin, CD34 marker and the NBT test were positives. Conclusions: Clear CD34 expression, positivity against a connective tissue marker such as vimentin and positivity in a phagocytic assay like the NBT-test, support that stem cells, monocytes and fibroblasts share common characteristics (AU)