Fatores que afetam a amplificaçäo de DNA pela técnica de RAPD (random amplified polymorphic DNA) / Factors affecting DNA amplification by RAPD (rondom amplified polymorphic DNA

RESUMO

Alguns reagentes que afetam as amplificaçöes (MgCl2 subscrito, dNTPs, "primers", DNA) foram testados para se obter melhor resoluçäo e reprodutibilidade das impressöes digitais de DNA em bovinos. As concentraçöes dos "primers" de 0,1mM foi considerada suficiente para uma amplificaçäo satisfatória. As concentraçöes de DNA genômico de 2,5ng/ml e de dNTPs na faixa de 0,1mM foram as que obtiveram resultados mais fortes e reprodutível. Um dos fatores que demonstraram maior variaçäo no padräo de amplificaçäo foi o MgCl2 subscrito. Concentraçäo de 2,0mM demonstrou ser suficiente para uma forte amplificaçäo. Foi possível demonstrar variaçöes nos padröes de amplificaçäo obtidos e associá-los com os fatores acima citados. A padronizaçäo entre diferentes laboratórios e a reprodutibilidade dos RAPDs deve levar em consideraçäo tais fontes de variaçäo para que se faça possível o intercâmbio de informaçäo entre laboratórios e a montagem de bancos de dados seguros obtidos por RAPD