Expressäo dos genes hGH (hormônio de crescimento humano) e LacZ(Beta-galactosidade) por longo período pelas cêlulas musculares lisas vasculares, transduzidas por vetores retrovirais, implantadas na adventícia vascular de ratos: estabelecimento de um novo modelo de terapia gênica ex vivo / Long-term expression of hGH(human growth hormone) and LacZ(Beta-galactosidade) genes in vascular smooth muscle cells transduced by retroviral vectors implanted in vascular adventia of rats: establishment of a new model for ex vivo gene teraphy

RESUMO

A proximidade dos vasos sangüíneos torna as células musculares lisas vasculares(CML) ideais para a terapia gênica sistêmica. Além disso, essas células têm proporcionado expressäo de genes exógenos in vivo por longos períodos. Entretanto, o procedimento usualmente empregado para semear CML transduzidas em artérias desnudas de células endoteliais, freqüentemente induz a estenose vascular, consequentemente com alto risco para uso em humanos. Nesse trabalho, demonstramos que a adventícia vascular é um local susceptível para introduzir CML transduzidas para secretar proteínas na corrente sangüínea através de um simples procedimento, evitando as complicaçöes vasculares pós-operatórias. As CML transduzidas com o vetor retroviral L(GH6)SN, o qual carrega o gene do hormônio do crescimento humano (hGH), foram semeadas na regiäo adventícia da porção abdominal da artéria aorta de ratos através da simples injeção da suspensão celular. Baseados na produção de HGH e anticorpos anti-hGH no soro, nós demonstramos que houve produção de hGH por um período de, aproximadamente, 2 meses. A expressào gênica por um longo período também foi demonstrada usando o gene bacteriano da enzima b-galactosidase (LacZ). Nos cortes histológicos da aorta, após coloração com o cromógeno X-Gal, foram observadas várias células azuis na adventícia vascular por, pelo menos, 11 semanas. Em relação ao vetor construído com o gene hGH sob o controle do promotor da metalotioneíns humana (hPMT), verificamos produção de hGH somente por alguns dias in vivo, o qual foi ativado por Zn2+. Com o nosso procedimento de implante celular, não observamos estenose, trombose ou outras anormalidades vasculares ou fisiológicas em nenhum dos animais experimentados. Esse modelo de transferência gênica ex vivo - introdução de células modificadas em um local que não é o de sua origem - poderia ser realizado em vasos periféricos de animais de maior porta através da simples injeção da suspensão celular. Este procedimento nos permite introduzir um grande número de células modificadas para a produção da quantidades suficientes de proteínas à terapia