Identificación de proteínas espermáticas humanas involucradas en la interacción espermatozoide-zona pellucida / aaa

RESUMEN

La interacción inicial entre las gametas es mediada por proteínas de superficie de la cabeza del espermatozoide y de la matriz extracelular del ovocito, la zona pellucida (ZP). El presente trabajo tuvo como objetivo la identificación de antígenos de superficie de espermatozoides humanos potencialmente involucrados en el reconocimiento de la ZP. Para ello se obtuvo un extracto de proteínas periféricas de espermatozoides humanos por tratamiento de las células con solución de alta fuerza iónica (HSE - High Salt Extract) (Buffer Pipes 100mM, pH 7,4; NaCl1M, sacarosa 0,25 M). Se desarrollaron anticuerpos policlonales (anti-HSE) que reconocieron numerosas proteínas en HSE (9-200 KDa). Las proteínas fueron separadas por electroforesis en geles de poliacrilamida, transferidas a membranas de nitrocelulosa y utilizadas para adsorber inmunoglobulinas de anti-HSE. Con éste método se obtuvieron anticuerpos contra dos polipéptidos mayoritarios de 49 (p49) y 66 (p66) kDa. Ambos anticuerpos (anti-p49 y anti-p66) reconocieron epitopes localizados en la cabeza y el flagelo de espermatozoides eyaculados y capacitados...