Desenvolvimento de uma metodologia de PCR semiquantitativa utilizando plasmídio clonado com parte do gene gB de citomegalovírus / Development of a semi-quantitative PCR method using a plasmid cloned with part of the gB gene of cytomegalovirus

RESUMO

A infecçäo por citomegalovírus é disseminada em nosso meio e costuma acometer, com significante morbimortalidade, indivíduos imunodeprimidos, especialmente, transplantados de medula óssea e de rim bem como pacientes com AIDS. Neste trabalho, descrevemos o desenvolvimento de uma PCR semiquantitativa para detectar e quantificar cargas de CMV, presentes em materiais clínicos. Para tanto, inserimos em plasmídios PCR II (Invitrogen, USA), o fragmento com 296 pares-base do gene da glicoproteína B do CMV. Os plasmídios com inserto foram transfectados em Escherichia coli, multiplicados, verificados quanto à presença do inserto por seqüenciamento nucleotídico, purificados, e quantificados. Os plasmídios com inserto foram titulados em diluições decimais e as mesmas foram submetidas à PCR descrita anteriormente, que foi, também, utilizada nos testes semiquantitativos, permitindo determinar a sensibilidade da técnica, 867 cópias de CMV / mg de DNA. Com base nas densidades das bandas eletroforéticas dos amplicons de amostras clínicas, comparadas às da titulaçäo de plasmídios contendo inserto de glicoproteína B do CMV, obtivemos as cargas virais. A técnica de PCR semiquantitativa, por nós padronizada, tem, como vantagens, o baixo custo e o fácil manuseio após sua padronizaçäo, podendo ser testada na detecçäo da carga de CMV em diferentes tipos de pacientes com suspeita de citomegalovirose