Monoclonal antibodies specific for carcinoembryonic antigen produced by hybridoma technology

RESUMEN

El objetivo del presente trabajo fue la producción, caracterización y aplicación de anticuerpos monoclonales anti-antígeno carcinoembrionario. Ratones Balb/c fueron inmunizados con 2 dosis ip de 5 y 10 microng de antígeno carcinoembrionario en adyuvante completo de Freund cada 30 días, y 3 dosis de refuerzo durante días consecutivos. Las células esplénicas fueron fusionadas con células de mieloma X63/Ag8.653 en presencia de polietilenglicol, y los híbridos rescatados en medio selectivo conteniendo hipoxantina-methotrexate-timidina. La detección de híbridos productores de anticuerpos monoclonales dirigidos contra el antígeno se realizó por radioinmunoanálisis en fase sólida, utilizando como trazador imunoglobulina de conejo anti-ratón marcada con 125I. Se obtuvo una eficiencia del 65% en crescimiento y del 13% en positividad. Los híbridos fueron clonados y estabilizados por miniclonado repetitivo, con un 65% de crecimiento y 40% de positividad. De 11 hibridomas productores se seleccionaron 3 que fueron inyectados en ratones BALB/c para la obtención de tumores ascíticos. La inmuno-especificidad de los anticuerpos monoclonales A4, A15 y A19 fue determinada por inmunoelectroforesis crozada, detectándose la formación de inmunoprecipitados específicos entre los anticuerpos monoclonales y el antígeno carcinoembrionario marcado con 125I. El anticuerpo monoclonal A4, de altas afinidad (K=1,60x10*10 litros/mol) fue activo en el radioinmunoensayo hasta la dilución 1 10 000 testada, permitiendo detectar valores de aproximadamente 0,5ng/ml. En ensayos de competición contra el anticuerpo policlonal, el rango de inhibición obtenido fue del 28 al 35% utilizando antígeno purificado, y del 10 al 15% con sueros de pacientes afectados por cáncer de colon...