O papel da via ubiquitina-proteossoma na indução de apoptose e secreção de citocinas e estudo da modulação de genes humanos em resposta a Mycobacterium leprae / The role of the ubiquitin-proteasome induced apoptosis and cytokine secretion and study of the modulation of human genes in reply the Mycobacterium leprae

RESUMO

A hanseníase é uma doença infecciosa crônica caracterizada por um espectro de formas clínicas,de acordo com a resposta imune do hospedeiro contra a bactéria.No presente estudo,nós avaliamos a interação entre Mycobacterium leprae e culturas de células mononucleares do sangue periférico(PBMC)na tentativa de contribuir para elucidar novos mecanismos celulares modulados durante o processo infeccioso.Este trabalho consistiu de 2 etapas.Na 1ªetapa,foi estudado o papel da via ubiquitina-proteossoma na apoptose e na secreção de citocinas induzidas por M.leprae.Na 2ªetapa,foi pesquisada a resposta transcricional global de células hospedeiras ao patógeno.Estudos...A dosagem da concentração de citocinas no sobrenadante destas culturas,por ELISA, mostrou que a inibição do proteossoma reduziu significativamente a secreção de TNF-α e IL-10 induzidas por M.leprae304,4±77,0 e 110,4±37,5pg/mL de TNF-α e 121,9±10,9pg/mL e 0pg/mL de IL-10,em células não tratadas e tratadas com este composto,respectivamente.Da mesma forma,foi observada uma redução significativa dos níveis de TNF-α em resposta a LPS quando as culturas foram tratadas com MG132.Finalmente,ensaios de Western blot demonstraram que...Os experimentos de RT-PCR em tempo real mostraram que M.leprae induz um aumento na expressão de κBras-1 após 4 e 12 horas de estímulo(0,001834±0,00067 e 0,002572 ±0,0008485,respectivamente)quando comparadas a culturas controle não estimuladas(0,001205±0,0001 e 0,00144± 0,0004,respectivamente).Em adição,observou-se um aumento significativo na expressão de VNN-1 após 12 horas de exposição a M.leprae(0,002674±0,0007299 em células não estimuladas e 0,007946±0,001912 em células estimuladas com a bactéria).Em contraste,foi observada a regulação negativa da expressão de CCR5 em culturas estimuladas com M.leprae por 4 horas(0,3221±0,11950 em células não estimuladas e 0,06505±0,01053 em células estimuladas com a bactéria)e 12 horas(0,3087±0,04916 em células não estimuladas...