Microdissecção e captura a laser na investigação do gene TP53 em tecidos incluídos em parafina / Laser-capture microdissection for TP53 gene analysis in paraffin-embedded tissues
J. bras. patol. med. lab
; 43(1): 61-67, fev. 2007. tab, ilus
Article
in Portuguese
| LILACS
| ID: lil-448537
Responsible library:
BR14.1
RESUMO
INTRODUÇÃO:
Microdissecção e captura a laser (MCL) é uma técnica de desenvolvimento recente que permite a coleta de células individuais ou pequeno conjunto de células para análise molecular. Atualmente, no Brasil, há raros microscópios para MCL, de modo que a divulgação dos procedimentos inerentes a essa técnica é oportuna para destacar seu amplo potencial para diagnóstico e investigação.OBJETIVO:
Este trabalho descreve a padronização dos procedimentos de MCL e de extração de DNA de material fixado em formalina e incluído em parafina. MATERIAL EMÉTODOS:
Foram estudados o éxon 8 do gene TP53 e o gene da ciclofilina em amostras de tecido normal e de neoplasias de fígado e rim provenientes de modelo de carcinogênese química induzida em rato. A extração do DNA foi comprovada por reação em cadeia da polimerase (nested-PCR).RESULTADOS:
Foram padronizados os procedimentos de preparo dos cortes histológicos, de microdissecção e captura a laser e de obtenção de seqüências gênicas pela reação de nested-PCR para tecidos incluídos em parafina. Obtivemos amplificação de 48,3 por cento das amostras para o éxon 8 do gene TP53 e 51,7 por cento para o gene da ciclofilina. Considerando pelo menos um dos dois segmentos gênicos, foram amplificadas 79,3 por cento das amostras. DISCUSSÃO ECONCLUSÃO:
A extração de DNA de tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina e a técnica de nested-PCR foram adequadamente padronizadas para produtos gênicos de interesse, obtidos de material coletado por MCL. Esses procedimentos podem ser úteis para a obtenção de seqüências de DNA de arquivos para análise molecular.ABSTRACT
BACKGORUND Laser-capture micro-dissection (LCM) is a recently developed procedure that provides single cells or specific cell groups for molecular analysis. Currently, there are few LCM systems in Brazil, in such a way that it is necessary to disseminate the technical procedures inherent to the methodology, and also to characterize its enormous potential for diagnosis and research. OBJECTIVE:
This study describes the standardization of LCM and DNA extraction from formalin fixed and paraffin-embedded tissues. MATERIAL ANDMETHOD:
The gene TP53 exon 8 and the cyclophilin gene were studied in normal and neoplastic liver and kidney samples from a chemical carcinogenesis model in rat. DNA extraction was confirmed by nested-PCR.RESULTS:
Histological sections preparation for LCM and the nested-PCR procedures were standardized; 48.3 percent amplifications of the gene TP53 exon 8 and 51.7 percent of the cyclophilin gene samples were obtained. When at least one of the gene segments was considered, 79.3 percent samples presented amplification. DISCUSSION ANDCONCLUSION:
Procedures for DNA extraction from formalin fixed and paraffin-embedded tissues collected by LCM were standardized. They can be useful for DNA collection for molecular studies.
Full text:
Available
Collection:
International databases
Database:
LILACS
Main subject:
DNA
/
Polymerase Chain Reaction
/
Cyclophilins
/
Microdissection
/
Lasers
Limits:
Animals
Language:
Portuguese
Journal:
J. bras. patol. med. lab
Journal subject:
Pathology
Year:
2007
Document type:
Article
/
Project document
Affiliation country:
Brazil
Institution/Affiliation country:
Universidade Estadual Paulista/BR