Development of an enzyme immunoassay for poliovirus antigens

ABSTRACT

An indirect solid-phase enzyme immunoassay (EIA) was developed for the detection of poliovirus antigen. Virus antigen was obtained in LLC-MK2 cell cultures and used to prepare antibodies in rabbit and guinea pig. Antibodies were evaluated by double immunodiffusion and neutralization test. Optimal concentrations of guinea pig and rabbit immunoglobulins were determined by checkerboard titration. Microtitre plates were coated with 15.0 µg/ml guinea pig anti-polio immunoglobulin and rabbit anti-polio immunoglobulin at the concentration of 7.94 µg/ml was used as detecting antibody. The standard curve with eight different antigen concentrations in eight replicates resulted in a coefficient of variation (CV) between 2.1 percent to 7.8 percent. The dose-response relationship was determined by simple linear regression with a coefficient of correlation (R²) equal to 96.4 percent. The assay detected a minimum of 2.3 µg/ml poliovirus antigen.

RESUMO

O trabalho apresenta o desenvolvimento de um ensaio imunoenzimático indireto para a detecção de antígeno de poliovírus. O antígeno viral foi obtido em cultura de células LLC-MK2 e usado para imunização de coelho e cobaia. Os soros hiperimunes foram avaliados por imunodifusão dupla e teste de neutralização. Após padronização, o soro de captura, produzido em cobaia, foi usado na concentração protéica de 15.0 µg/ml para sensibilizar microplacas de poliestireno e o soro de coelho (detector) foi usado na concentração de 7.94 µg/ml. A curva padrão resultante da utilização de oito diferentes concentrações do antígeno padrão definiu um coeficiente de variação de 2.1 por cento a 7.8 por cento. A relação dose-resposta foi determinada por regressão linear simples com o estabelecimento do coeficiente de correlação (R²) igual a 96.4 por cento. O ensaio possibilitou a detecção mínima de 2.3 µg/ml de antígeno de poliovírus.