A comparison between enzyme immunoassay and HPLC for ochratoxin A detection in green, roasted and instant coffee
Braz. arch. biol. technol
; 50(2): 349-359, Mar. 2007. graf, tab
Article
in English
| LILACS
| ID: lil-452751
Responsible library:
BR16.1
ABSTRACT
An indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ic-ELISA) for ochratoxin A (OTA) detection in green, roasted and instant coffees was developed using anti-OTA monoclonal antibody. Immunological reagents prepared were OTA-BSA (4.76 mg/mL), anti-OTA.7 MAb (2x10³-fold dilution) and HRP-anti IgG (10³-fold dilution). The detection limit was 3.73 ng OTA/g and correlation coefficients (r) between this immunoassay and high performance liquid chromatography were 0.98 for green coffee, 0.98 for roasted and 0.86 for instant. OTA levels detected by ic-ELISA were higher than by HPLC, with ELISA/HPLC ratio of 0.66 - 1.46 (green coffee), 0.96 - 1.11 (roasted) and 0.93 - 1.82 (instant). ELISA recoveries for OTA added to coffee (5 - 70 ng/g) were 81.53 percent for green coffee, 46.73 percent for roasted and 64.35 percent for instant, while recoveries by HPLC were 80.54 percent, 45.91 percent and 55.15 percent, respectively. Matrices interferences were minimized by samples dilution before carrying out the ELISA assay. The results indicate that MAb-based ic-ELISA could be a simple, sensitive and specific screening tool for OTA detection, contributing to quality and safety of coffee products.
RESUMO
ELISA competitivo indireto (ic-ELISA) baseado em anticorpos monoclonais foi desenvolvido para a detecção de ocratoxina A (OTA) em café verde, torrado e instantâneo. Os reagentes imunológicos necessários à reação consistiram de OTA-BSA (4,76 mg/mL), anti-OTA.7 MAb (diluído 2x10³) e anti IgG-HRP (diluído 10³), apresentando limite de detecção de 3,73 ng OTA/g. Os coeficientes de correlação (r) entre o imunoensaio e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foram de 0,98 (café verde), 0,98 (torrado) e 0,86 (instantâneo). Ic-ELISA detectou valores superestimados de OTA em relação a CLAE, com valor ELISA/CLAE variando de 0,66 - 1,46 (café verde), 0,96 - 1,11 (torrado) e 0,93 - 1,82 (instantâneo). As recuperações médias de OTA adicionada em café (5 - 70 ng/g) foram de 81,53 por cento (café verde), 46,73 por cento (torrado) e 64,35 por cento (instantâneo) por ELISA, em relação a 80,54 por cento, 45,91 por cento e 55,15 por cento por CLAE, respectivamente. A interferência de matriz no imunoensaio foi minimizada pela diluição das amostras previamente à análise por ELISA. O ic-ELISA desenvolvido pode ser considerado uma técnica alternativa simples, sensível e específica para análise de OTA, contribuindo para a qualidade e segurança de produtos de café.
Full text:
Available
Collection:
International databases
Database:
LILACS
Main subject:
Immunoassay
/
Chromatography, High Pressure Liquid
/
Coffee
/
Ochratoxins
Type of study:
Diagnostic study
Language:
English
Journal:
Braz. arch. biol. technol
Journal subject:
Biology
Year:
2007
Document type:
Article
Affiliation country:
Brazil
/
Japan
Institution/Affiliation country:
Kagawa University/JP
/
Science University of Tokyo/JP
/
Universidade Estadual de Londrina/BR