Respostas das células-tronco mesenquimais humanas isoladas de tecido adiposo ao óxido nítrico: análise do transcritoma / Answers of the Mesenchymal stem cells human isolated from adipose tissue to nitric oxide: analysis of transcritome

RESUMO

As células-tronco mesenquimais (MSC) são células-tronco adultas multipotentes que, sob determinados estímulos, podem se diferenciar para produzir um tipo celular especializado. Estas células apresentam uma frequência muito baixa nos tecidos, porém apresentam características que as capacitam para várias aplicações clínicas como a engenharia tecidual e a medicina regenerativa. As células-tronco adultas têm sido usadas para recuperação da função cardíaca, entretanto, a pré-diferenciação das células em uma linhagem cardíaca antes do transplante pode evitar um tipo tecidual não desejado no local do transplante. Recentemente, foi demonstrado o envolvimento do óxido nítrico na cadiomiogênese a partir de células-tronco embrionárias. Apesar dessas informações potencialmente promissoras para a diferenciação de células embrionárias pelo óxido nítrico, ainda não há descrição do seu possível papel na diferenciação de células mesenquimais. O objetivo deste trabalho é estudar o efeito do óxido nítrico no potencial de diferenciação de células-tronco mesenquimais, utilizando o microarranjo como ferramenta para uma análise global das alterações dos programas de expressão gênica. Células-tronco mesenquimais provenientes de tecido adiposo foram cultivadas e tratadas com doadores de óxido nítrico, SNAP ou DEA/NONOate. Foi utilizado também 5-azacitidina, um indutor a cardiomiócitos descrito na literatura, assim como um controle negativo sem indutor. Ao longo dos tratamentos, não foram observadas células contráteis nem com fenótipo semelhante, em nível macroscópico, com nenhum dos indutores. O RNA destas células foi extraído após 2, 7 e 20 dias de cultivo e três pools, com RNA proveniente de 2 doadores cada, foram obtidos. Em seguida, foi sintetizado cDNA, cRNA e cDNA biotinilado para hibridar em Genechip Human Gene 1.0 ST (Affymetrix). Análises por PCA e por agrupamento hierárquico mostraram que há uma grande variabilidade biológica entre os pacientes. As anáises...