Inmunohistoquímica en el diagnóstico de la fiebre amarilla. Experiencia en el Dpto. de Patología, del Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud y la Cátedra de Anatomía Patológica, Facultad de Ciencias Medicas, Universidad Nacional de Asunción / Immunohistochemistry in the diagnosis of yellow fever. Experience in the Department of Pathology, Health Sciences Research Institute and the Department of Pathology, Faculty of Medical Sciences, National University of Asuncion

RESUMEN

La fiebre amarilla (FA) es una enfermedad hemorrágica aguda, inmunoprevenible producida por un arbovirus cuyo órgano blanco es el hígado. Se presenta en forma epidémica y en dos formas epidemiológicas la urbana y la selvática, ambas con características clínicas e histopatológicas semejantes. Para el diagnóstico se utilizan distintos métodos como serología, cultivo celular, biología molecular, histopatología e inmunohistoquímica (IHQ). La IHQ identifica, en las muestras obtenidas postmortem, la presencia, a nivel tisular, del antígeno viral causante de la enfermedad mediante una unión antígeno-anticuerpo altamente específica. El objetivo de este estudio fue determinar por IHQ la presencia del antígeno del virus de la FA en tejidos hepáticos de pacientes fallecidos con sospecha de FA en el Paraguay. Estudio descriptivo en muestras de tejido hepático (bloques de parafina) obtenidos postmortem, con autorización de los familiares, de 4 pacientes fallecidos con sospecha clínica de FA. Los bloques de parafina fueron enviados, codificados para respetar la confidencialidad de los pacientes, por la Cátedra de Anatomía Patológica de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Nacional de Asunción (UNA) al Dpto. de Patología del Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud (IICS-UNA) para el análisis por IHQ. Se utilizó el anticuerpo primario anti-fiebre amarilla y la técnica del complejo avidina-biotina-peroxidasa, se agregaron cortes de control positivo y negativo para cada caso. Todas fueron positivas para FA. La positividad de la tinción se evaluó por microscopía óptica y en relación a los hallazgos histopatológicos, se consideró positivos aquellos casos en los que se observó una tinción marrón en el citoplasma de las células hepáticas. La positividad se observó en todos los casos sospechosos y en los controles positivos. Los controles negativos no presentaron esta tinción. La IHQ en conjunto con otras técnicas laboratoriales y los criterios clínicos contribuye al diagnóstico postmortem en los casos de FA, y se constituye en una herramienta de diagnóstico muy útil que permite realizar el diagnóstico retrospectivo, en los casos que no ha sido posible realizar otros estudios.

ABSTRACT

Yellow fever (YF) is an acute hemorrhagic disease, which is immuno-preventable, caused by an arbovirus whose target organ is the liver. It occurs epidemically and in two epidemiological forms urban and wild, both with clinical and histopathological similar characteristics. Several methods are used for the diagnosis such as serology, cell culture, molecular biology, histopathology and immunohistochemistry (IHC). The IHC determines the presence of the viral antigen causing the disease at tissue level in post-mortem samples through a highly specific antigen-antibody binding. The objective of this study was to determine the presence of the YF viral antigen by IHC in the liver tissue of deceased patients with suspicion of YF in Paraguay. This is a descriptive study carried out on liver tissue samples (paraffin blocks), obtained post-mortem with the permission of the relatives, of four patients that died and had clinical suspicion of YF. Paraffin blocks were sent, coded to respect the patient confidentiality, by the Department of Pathology of the Faculty of Medicine-National University of Asunción (UNA) to the Department of Pathology of the Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud (IICS-UNA) to be analysed by IHC. The anti-yellow fever primary antibody and the technique of avidin-biotin-peroxidase complex were used. Also, samples of positive and negative controls for each case were added. Positive staining was evaluated by optical microscopy, and in relation to the histopathological findings those with a brown staining in the cytoplasm of the hepatic cells were considered positive. Positivity was observed in all suspected cases and positive controls. The negative controls did not show any staining. The IHC techniques together with other laboratory techniques and the clinical criteria contribute to postmortem diagnosis in YF cases and represent a useful diagnostic tool which allows the performance of retrospective diagnosis in those cases where other studies could not have been made.