Caracterização proteica do fluido aspirado de mama de pacientes brasileiras com câncer de mama unilateral / Protein characterization of breast fluid aspirated from Brazilian patients with unilateral breast cancer
Rio de Janeiro; s.n; 2010. xix,104 p. ilus, tab, graf.
Thesis
in Portuguese
| LILACS
| ID: lil-573293
Responsible library:
BR15.1
Localization: BR15.1
RESUMO
O câncer de mama é a principal causa de morte por câncer em mulheres no mundo. De acordo com o Instituto Nacional do Câncer, 7.470 novos casos são estimados em 2010 apenas no Rio de Janeiro. A maioria dos casos de câncer de mama são originados nas células ductais mamárias. Elas secretam o fluido aspirado de mama (NAF), que contém proteínas intimamente associadas ao microambiente tumoral. O objetivo deste trabalho foi utilizar a abordagem proteômica como ferramenta para caracterizar e comparar o NAF das duas mamas de pacientes brasileiras com câncer da mama unilateral. A concentração média de proteínas das amostras controle, tumor benigno ou câncer de mama de 13 mulheres foi aproximadamente 115 mais ou menos 60 (miu)g/(miu)L. A atividade proteolítica do NAF foi visualizada porzimografia das amostras de duas pacientes. Observamos que o padrão de bandas gelatinolíticas diferiu substancialmente entre as pacientes, mas não entre as duas mamas do mesmo indivíduo. As enzimas proteolíticas se apresentam sensíveis à inibição por agentes quelantes de metais (EDTA e orto-fenantrolina). As amostras de NAF também foram submetidas à 2D-PAGE em condições otimizadas (IPG 4-7 e aplicação de amostra por reidratação in gel) e poucos spots protéicos muito abundantes foram detectados e identificados por espectrometria de massas MALDI-TOF/TOF como albumina, imunoglobinas, zinco-alfa2-glicoproteína e proteína induzida por prolactina. Para enriquecer o NAF em suas proteínas menos abundantes, testamos estratégias de depleção usando a coluna de múltipla afinidade Hu-6 da Agilent ou proteína L agarose. Este passo de pré-fracionamento introduziu variabilidade adicional importante nas amostras e por este motivo não foi empregado em etapas posteriores do estudo. Catorze amostras de NAF das mamas pareadas de mulheres com câncer unilateral foram sistematicamente comparadas por 2D-DIGE. Foram observadas diferenças qualitativas substanciais entre as pacientes, prejudicando as comparações quantitativas entre as amostras. Dois grandes perfis protéicos distintos foram definidos por 2D-DIGE. O perfil A caracterizou-se pela presença de dois grupos de spots ácidos típicos (pl 4,5 e MM 29,5 e 18 kDa), ausentes no perfil B. A presença de glico- e fosfo-proteínas foi determinada em amostras de ambos os perfis após revelação dos géis 2D com ProQ-Emerald ou Diamond, respectivamente. As amostras dos dois perfis se mostraram muito mais ricas em glicoproteínas do que em fosfoproteínas. Este trabalho constituiu a primeira caracterização proteômica sistemática do NAF de pacientes brasileiras com câncer de mama unilateral. Nossos resultados mostram uma variabilidade importante do conteúdo de proteínas nas amostras individuais de NAF, sugerindo a necessidade de uma estratificação mais uniforme das pacientes. Por fim, o emprego de tecnologias proteômicas mais sensíveis e acuradas deverá ser necessário para possibilitar a detecção e identificação de proteínas menos abundantes no NAF, que poderão constituir candidatos a biomarcardores do câncer de mama.
Search on Google
Collection:
International databases
Health context:
SDG3 - Target 3.4 Reduce premature mortality due to noncommunicable diseases
Health problem:
Breast Cancer
Database:
LILACS
Main subject:
Breast Neoplasms
/
Risk Factors
/
Women's Health
/
Proteomics
Type of study:
Etiology study
/
Prognostic study
/
Risk factors
Limits:
Female
/
Humans
Country/Region as subject:
South America
/
Brazil
Language:
Portuguese
Year:
2010
Document type:
Thesis