Estandarización de un protocolo sencillo para la extracción de ADN genómico de levaduras / Standardising a simple protocol for extracting yeast from genomic DNA
Rev. colomb. biotecnol
; 11(1): 125-131, jul. 2009. graf
Article
in Spanish
| LILACS
| ID: lil-590638
Responsible library:
CO326
RESUMEN
Se estandarizó un protocolo rápido, sencillo y de bajo costo para la extracción de ADN genómico de levaduras a partir de lisis de la pared celular mediante tratamiento enzimático y precipitación por alcoholes. El empleo de la enzima Beta-glucoronidasa en reemplazo de la enzima Zimolasa, permitió obtener ADN en alta concentración (124,9±30,2 ng/λl) y de buena calidad (A260/A280 nm =1,86±0,1), ideal para su uso en estudios de biología molecular. Además, se adicionó un paso de incubación del ADN obtenido a 100° C para inactivar ADNasas. La calidad del ADN obtenido fue evaluada por medio de la amplificación de la región ITS1-5.8S-ITS2, presentando bandas definidas y cuantificables (entre 380 y 880 pb) ideales para estudios de identificación molecular y filogenia.
ABSTRACT
A quick, simple and low-cost protocol for extracting genomic DNA from yeast by cell wall lysis involving enzymatic treatment and alcoholic precipitation was standardised. Higher DNA yields (124.9±30.2 ng/λl) were obtained by using beta-glucuronidase instead of zymolyase; these had very high quality (A260/A280 nm = 1.86±0.1) and would be suitable for use in molecular biology assays. Moreover, a DNAse inactivation step was also introduced by incubation at 100 °C to further ensure DNA stability. DNA quality was assayed by PCR amplification of the ITS1-5.8S-ITS2 region, revealing defined, quantifiable 380 to 880 bp bands. These results show that the protocol is ideal for molecular identification and phylogenetic studies.
Full text:
Available
Collection:
International databases
Database:
LILACS
Main subject:
Chromosomes, Artificial, Yeast
Type of study:
Practice guideline
Language:
Spanish
Journal:
Rev. colomb. biotecnol
Journal subject:
Biotechnology
Year:
2009
Document type:
Article
Affiliation country:
Colombia
Institution/Affiliation country:
Universidad del Valle/CO