Detecção de RNA de Leischmania(Leishmania) infantum chagasi em pulgas e carrapatos coletados de cães naturalmente infectados e padronização de uma PCR em tempo real para diagnóstico e diferenciação de espécies de Leishmania / Detection of RNA of Leishmania(Leishmania) infantum chagasi in fleas and ticks collected from naturally infected dogs and standardization of a real-time PCR for diagnois and differentiation of leishmana species

RESUMO

A leishmaniose visceral americana (LVA) é um sério problema de saúde pública. No período de 2003 a 2009 foram registrados no Brasil mais de 34 mil casos de leishmaniose visceral. Até a década de 80, a maioria dos casos concentrava-se em áreas rurais dos municípios. Esse perfil mudou e vários casos são notificados nas áreas urbanas. No Estado de São Paulo a doença é autóctone desde 1998. A partir de 2003 foram registrados também casos autóctones caninos nas redondezas da região metropolitana de São Paulo. Uma das formas de se avaliar a propagação da infecção é o estudo dos transmissores. Embora Lutzomyia longipalpis seja uma espécie prevalente em zonas urbanas, tem sido a única responsável pela transmissão na área urbana dos municípios da região Oeste do Estado. Contudo, na Região Metropolitana de São Paulo a sua presença ainda não foi detectada. Este fenômeno leva a supor que outra espécie de flebotomíneos ou outros ectoparasitas de cães como os carrapatos Rhipicephalus sanguineus e as pulgas Ctenocephalides felis felis possam estar envolvidos na transmissão da LVA. Este estudo mostra que os cães estão densamente infestados por pulgas e carrapatos em todos os estádios evolutivos. Além disso, material genético positivo para L. (L.) infantum chagasi, foi encontrado no interior desses ectoparasitas com uma positividade variando de 53,1% nas pulgas a 77,7% nas ninfas, inclusive após a ecdise de ninfa para o estádio adulto sugerindo a capacidade dos carrapatos de preservar parasitas vivos. Com a utilização da PCR em tempo real, foi possível quantificar o DNA presente no interior dos ectoparasitas. A PCR em tempo real single se mostrou eficiente na detecção de espécies do subgênero Leishmania e com a PCR multiplex foi possíveldiferenciar entre as espécies dos subgênero Viannia e as do complexodonovani. O marcador molecular (CY5) da PCR em tempo real multiplex foicapaz detectar todas as espécies de Leishmania spp analisadas sendo útilpara detectar...