Leishmaniose visceral canina: correlação da resposta imunológica com a carga parasitária e a variabilidade genética do parasita / Correlation of immune response, parasite load and genetic variability in canine visceral leishmaniasis

RESUMO

A Leishmaniose Visceral causada pela Leishmania infantum é uma doença zoonótica no Novo Mundo em que o cão é o principal hospedeiro doméstico. O conhecimento prévio dos mecanismos imunopatogênicos associados à infecção porL. infantum é necessário para o desenvolvimento de vacinas e outras estratégias decontrole. O objetivo geral desta tese foi correlacionar a expressão clínica, a cargaparasitária, a resposta imunológica do hospedeiro e a diversidade genética dosparasitos em cães naturalmente infectados por L. infantum. O presente estudo éuma avaliação transversal de noventa e dois cães naturalmente infectados por L.infantum provenientes do estado do Mato Grosso. A infecção dos animais incluídosno estudo foi confirmada por sorologia, cultura e /ou PCR. O diagnóstico etiológicofoi realizado por PCR-RFLP para o gene hsp70 e por eletroforese de enzimas nosparasitos isolados. Foram ainda analisados os sinais clínicos, a resposta imune pelaexpressão gênica de citocinas, a carga parasitária por qPCR, as alteraçõeshistológicas no baço e fígado e a as populações e genótipos de L. infantumcirculantes por meio da análise do polimorfismo de microssatélites. Foram definidosgrupos de acordo com a carga parasitária esplênica e hepática. Os animais com altacarga parasitária apresentaram altos títulos de anticorpos específicos antiLeishmaniae mais sinais clínicos da doença. A carga parasitária no baço foi maiordo que no fígado e houve correlação com o rompimento da arquitetura esplênica,caracterizado principalmente pela desorganização da polpa branca. No fígado, acarga parasitária foi correlacionada positivamente à ocorrência de granulomas, àdegeneração dos hepatócitos bem como à intensidade do infiltrado inflamatório.Mostramos que a maior carga parasitária promoveu menor expressão gênica de IL-12, IFNgama, TNF, IL-6, TGFbeta e IL-10 no baço e maior expressão de CCL2, CXCL8 eMAP4K4 no fígado...

ABSTRACT

Visceral leishmaniasis is a zoonotic disease in the New World and the domestic dogis the main host of Leishmania infantum. Prior knowledge of the immunopathogenicmechanisms associated with infection by L. infantum is required for the developmentof vaccines and other control strategies. The overall aim of this thesis was tocompare the clinical expression, parasite load, the host immune response andgenetic diversity of parasites in dogs naturally infected with L. infantum. This study isa cross-sectional assessment of ninety-two dogs naturally infected by L. infantum.Infection was confirmed by serology, parasite culture and / or PCR. The etiology wasassessed by hsp70 PCR-RFLP and MLEE. We further analyzed clinical signs,immune response by cytokine gene expression, molecular parasite load by qPCR,histological changes in splenic and hepatic compartments and also L. infantumpopulations and genotypes through microsatellite analysis. Groups according to thespleen and liver parasite load were defined. Animals with high parasite load had hightiters of anti-Leishmania antibodies and more clinical signs. The parasite load in thespleen was higher than in liver and correlated with disruption of splenic architecture,mainly characterized by white pulp disorganization. Liver parasite load wascorrelated with the occurrence of granulomas, degeneration and intensity of theinflammatory infiltrate. We show that the higher parasite load promoted lower geneexpression of IL-12, IFN gama, TNF, IL-6, IL-10 and TGF beta in the spleen and increasedexpression of CCL2, CXCL8 MAP4K4 in the liver. Genetic analysis of parasites isindicative of polyclonal infection and tissue tropism of some clones, more evident inthe analysis of paired samples (strain isolated and tissue)...