Producción de un polipéptido con actividad antiviral por fusión del gen interferón-alpha 2 humano al gen lacZ del bacteriófago M13mp8 / Production of a polypeptide with antiviral activity by fusion of the alpha 2 IFN gen to the lacZ gen in the M13mp8 bacteriophage

RESUMEN

Un gen de IFN-* recientemente aislado en nuestro laboratorio a partir de una librería de ADN crosomal humano, fue genéticamente manipulado in vitro para poder acortar la secuencia señal y mejorar el rendimiento de IFN en cultivos bacterianos. Primero, la secuencia señal fue acortada en una extensión equivalente a nueve codones, usando la enzima de restricción HacIII y la secuencia remanente fue fusionada en fase con el codón iniciador del gen lacZ presente en el bacteriófago M13mp8. Uno de los clones recombinantes fue analizado en detalle. Este clon mostró una alta inestabilidad del inserto y una baja producción de actividad IFN, con un rendimiento similar al obtenido con el gen pre-IFN-*2 completo. El gen fusionado lacZ/IFN-* fue entonces transferido por clonaje mplecular al plásmido pBR322. Uno de los clones obtenidos mostró una buena estabilidad del plásmido híbrido, y aunque el rendimiento de actividad de IFN fue bajo (3x 10 a la 5 unidades/ml de extracto bacteriano crudo) la producción se mantuvo aún después de más de 20 pases. Finalmente, la secuencia señal recombinante presente en este clon fue nuevamente acortada en una extensión equivalente a 4 codones y se encontró que uno de los nuevos clones incrementaba aproximadamente en 20 veces el nivel de producción de actividad IFN. A pesar de que el polipéptido sintetizado constituye un producto de fusión, la actividad biológica antiviral de IFN parece quedar conservada